Штамм вируса гриппа птиц подтипа Н3N6 А/чирок-трескунок/Коргалжын/865/04, используемый для приготовления диагностических препаратов.

(51) 12 7/00 (2010.01) 12 15/44 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ пригодных для идентификации и изучения антигенной структуры гемагглютинина вновь выделенных вирусов гриппа. Штамм вируса гриппа А/Чирок-трескунок/ Коргалжын/865/04 (36) по антигенной структуре гемагглютинина близок к эталонному штамму А/утка/Украина/1/63 (38), по нейраминидазе А/утка/Чехословакия/1/56(Н 46) и А/чайка/Мэриленд/704/77(136). Изолят репродуцируется в системе развивающихся куриных эмбрионов при температуре 37 до инфекционного титра 8,49 ЭИД 50/02 мл. Титр гемагглютинации -1256. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ДГП НИИ проблем биологической безопасности Национального центра по биотехнологии МОН РК за номером депозита М 6-08/Д. Предлагаемый вариант активно агглютинирует эритроциты курицы, морской свинки, мыши, кошки,козы, барана, лошади, крупного рогатого скота и человека О группы. Штамм обладает термостабильным гемагглютинином,разрушающимся только после 360 мин. прогревания при 56 С. Вирус А/Чирок-трескунок/Коргалжын/865/04 может быть использован для производства диагностических препаратов, предназначенных для идентификации вновь выделенных изолятов вирусов гриппа и обнаружения специфических антител.(72) Карамендин Кобей Омертаевич Саятов Марат Хусаинович Кыдырманов Айдын Исагалиевич Ишмухаметова Наиля Галивеевна Асанова Сауле Естаевна Даулбаева Клара Дакишевна Жуматов Кайнар Хамзаевич(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Центр биологических исследований Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ ПОДТИПА Н 36 А/ЧИРОКТРЕСКУНОК/КОРГАЛЖЫН/865/04,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ.(57) Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для получения диагностикума вируса гриппа. Задачей изобретения является получение нового штамма вируса гриппа А/ЧИРОК-ТРЕСКУНОК/ КОРГАЛЖЫН/865/04 позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для получения специфических тест-систем для диагностики гриппозной инфекции диких и домашних птиц. Вирусы гриппа принадлежат к семейству, включающему 5 родов вирусы гриппа А, В, С,и . На основе их антигенных различий по двум поверхностным гликопротеидам(НА) и нейраминидазе , вирусы гриппа А разделяются на различные подтипы. К настоящему времени известны 16 подтипов НА (1-16) и 9 подтипов(1-9). Вирусы гриппа А повсеместно распространены в природе и инфицируют человека, свиней, лошадей,морских млекопитающих и различные виды птиц. Экологические и молекулярно-биологические исследования показали, что все их варианты происходят из птичьего резервуара. Доказана персистенция вирусов гриппа А в популяциях водных птиц, преимущественно среди уток, куликов и чаек, у которых он реплицируется в основном в клетках эпителия, выстилающего кишечный тракт. Вирус выделяется в больших концентрациях с испражнениями и разносится фекально-оральным путем через контаминированную воду. Известен референсный вариант вируса гриппа А подтипа 36, выделенный от озерной чайки Гресиковой М. в Словакии. Вирусы гриппа (38) с этим же подтипом НА,но с другойв 1979-1980 гг. доминировали в популяциях околоводных птиц в Прибайкалье и в Бурятии. Вирусы гриппа с подтипом НА НЗ, также часто выделялись от свиней, лошадей, китов, тюленей и людей. Задачей изобретения является получение нового штамма А/Чирок-трескунок/Коргалжын/865/04,позволяющего использовать его в качестве диагностикума для выявления специфических антител в сыворотках крови птиц инфицированных вирусом гриппа А подтипа 38. Оригинальный штамм вируса гриппа А/Чироктрескунок/Коргалжын/865/04 выделен в сентябре 2004 г. из трахеального смыва больной птицы,отловленной на оз. Коргалжын. Новый штамм депонирован и хранится в коллекции микроорганизмов ДГП НИИ проблем биологической безопасности Национального центра по биотехнологии МОН Республики Казахстан(депозит М-6-08/Д). Антигенная структура. Штамм А/Чироктрескунок/Коргалжын/865/04 по НА близок к эталонному вирусу А/утка/Украина/1/63 (38), по- к А/утка/Чехословакия/1/5 6(46) и А/чайка/Мэриленд/704/77 (136). Адаптационные свойства. Изолят репродуцируется в системе развивающихся куриных эмбрионов при температуре 37 до инфекционного титра 8,49 ЭИД 50/02 мл. Титр гемагглютинации - 1256. Патогенность. По патогенности штамм относится к апатогенному варианту. Интравенозный 2 индекс патогенности для шестинедельных цыплят составляет 0,00. Свойства агглютинации. Казахстанский штамм вируса гриппа активно агглютинирует эритроциты курицы, морской свинки, мыши, кошки, козы,барана, лошади, крупного рогатого скота и человека 0 группы. Терморезистентность. По термочувствительности НА штамм А/Чироктрескунок/Коргалжын/865/04 отнесен к термостабильным, поскольку сохранял способность вызывать агглютинацию эритроцитов курицы после прогревания при 56 в течение 360 мин и полностью элюировал с куриных эритроцитов через 30 мин инкубации при 37. Удельная активностьв расчете на 1 АЕ составляет 41,7. Ингибиторочувствительность. Выделенный штамм оказался ингибиторорезистентным и его гемагглютинирующая активность не подавлялась взятыми в эксперимент сыворотками животных. К штамму получена кроличья иммунная сыворотка с гемагглютинирующим титром в РТГА 1640. Схема иммунизации. Для иммунизации используют кроликов породы шиншилла массой 2,53 кг. Первую иммунизацию проводят внутрикожно в область шейных и подключичных лимфатических узлов путем 15-20 точечных инъекций концентрированного антигена (100 мкг) в смеси с полным адьювантом Фрейнда ( , ). Через 3 недели животных иммунизируют подкожно(с адьювантом) и внутривенно (без адьюванта) равным количеством антигена. Кровь у животных берут из краевой вены уха через 7 дней после повторной иммунизации. Титр иммунной сыворотки заявляемого штамма в РТГА с гомологичным антигеном составляет 11280. При филогенетическом исследовании (по результатам секвенирования) генома вируса А/Чирок-трескунок/Коргалжын/865/04 выявлено его сходство и различие по матриксному (М),нуклеопротеидномуи неструктурномугенам с другими вирусами гриппа А из международной базы данных(Фиг.). Как видно из фиг, по М игенам все штаммы вируса гриппа подтипа 36 четко разделяются на 2 линии - американскуюи евразийскую ,но погену характерно наличие переходной группы штаммов , состоящих из представителей обеих линий. Очевидно, что формирование этих линий связано с географическим разделением путей миграций птиц. В филогенетическом отношении по М-гену изолят А/Чирок-трескунок/Коргалжын/865/04(36) наиболее близок к вирусам А/утка/Монголия/54/2001(Н 5 М 2) и А/утка/Хоккайдо/ас-1/04(Н 51 Ч 1), изолированным в Азии и имеющими иной подтип НА - Н 5. Сходство с казахстанским изолятом проявил также вирус с подтипом НА Н 13 А/чайка/Астрахань/1846/1998(136),что свидетельствует о независимости друг от друга сегментов генома каждого вируса при обмене генетическим материалом. В случаегена обнаружена 98 идентичность с вирусом того же подтипа А/красноносый нырок/Монголия/1915/2006(36) и упоминавшимися ранее вирусами А/утка/Монголия/54/2001(Н 52) и А/утка/Хоккайдо/ас-1/04(Н 5 Н 1), а погену наибольшее сходство обнаружено с вирусом А/красноносый нырок/Монголия/1915/2006 (36). Выявленные отличия указывают на то, что вирус А/Чирок-трескунок/Коргалжын/865/04 (36) не идентичен эталонным и ранее выделенным штаммам вируса гриппа А подтипа 36, а является природным,эпизоотическим вариантом низкопатогенного вируса гриппа А (36). Приготовленные на его основе диагностические препараты могут быть использованы в вирусологических лабораториях при расшифровке этиологии эпидемических и эпизоотических вспышек гриппа, а также оценки напряженности популяционного иммунитета. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса гриппа птиц подтипа Н 36 А/Чирок-трескунок/Коргалжын/865/04,семейства, рода А, депонированный в коллекции микроорганизмов ДГП Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Национального центра по биотехнологии КН МОН РК, за номером М-608 Д,используемый для приготовления диагностических препаратов Фиг. - Филогенетическое древо взаимосвязей М ,(В) и(С) генов вируса гриппа А/чироктрескунок/Коргалжын/865/04 и соответствующих генов вирусов из международной базы данных .