Способ получения ППД-туберкулина

(51) 61 39/04 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ 60 суток на жидкой питательной синтетической среде при температуре 37-38 С, автоклавирование при 1 атм в течение 2-3 ч, отделение культуральной жидкости, осаждение 50-ой трихлоруксусной кислотой, отстаивание туберкулопортеина 18-20 ч,отделение надосадочной жидкости, стандартизацию осуществляют в 10 растворе глицерина на деминерализованной воде до содержания белка 0,800,20 мг/мл, доведением рН среды до 7,00 путем добавления 40 раствора гидроксида натрия,расфасовку во флаконы и стерилизацию при 0,5 атм в течение 10 мин. Предлагаемый способ позволяет упростить способ изготовления ППД-туберкулина, повысить его активность и специфичность, снизить затраты. разные размерь пор, не обеспечивают стандартность получаемого препарата и увеличивают потери белка на 7-8. В растворителях ППД-туберкулина используется 0,5-0,25) раствор фенола и 0,85) хлористого натрия. Фенол подавляет выход из тканей гистамина, а фосфаты и карбонаты протеинов и ряд органических веществ. Задачей изобретения является упрощение способа изготовления ППД-туберкулина, повышение его активности и специфичности, снижение затрат. Задача достигается путем снижения сроков культивирования не более 60 суток, так как выращивание более 60 суток делает препарат менее специфичным. Исключения - стадии повторного осаждения раствором сернокислого аммония, что снижает загрязнение препарата. Исключения стадии диализа против водопроводной воды, что снижает загрязнение микрофлорой и как следствие повышает активность и специфичность препарата. В качестве растворителя используется дистиллированная вода с 10 глицерина без 0,85 хлористого натрия и 0,5-0,25 фенола, что снижает присутствие в туберкулине химических веществ, отрицательно влияющих на специфичность и активность препарата. Способ получения ППД-туберкулина, включает выращивание микобактерий туберкулеза в течение 60 суток на жидкой питательной синтетической среде при температуре 37-38 С, автоклавирование при 1 атм в течение 2-3 ч, отделение культуральной(72) Байсеитов Мухтар Аскарович Хабижанова Венера Болатовна(57) Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и может быть использовано при получении биопрепаратов для диагностики туберкулеза млекопитающих. Способ получения ППД-туберкулина включает выращивание микобактерий туберкулеза в течение Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и может быть использовано при получении биопрепаратов для диагностики туберкулеза млекопитающих. Известен способ получения ППД-туберкулина,включающий выращивание микобактерий туберкулеза, автоклавирование, отделение надосадочной жидкости, осаждение, отстаивание туберкулопортеина, отделение надосадочной жидкости, растворение белка, диализ целлофановой оболочкой против водопроводной воды и стандартизация, при этом,выращивание микобактерий туберкулеза осуществляется в течение 60-90 суток, осаждение белка осуществляется дважды раствором трихлоруксусной кислоты и раствором сернокислого аммония,а стандартизацию осуществляют в растворе с 10 глицерина, 0,85 хлористого натрия и 0,5-0,25 фенола (Туберкулин очищенный (ППД) для млекопитающих, ГОСТ 16739, М, 1988). Недостатком известного способа является его сложность, дороговизна и то, что при приготовлении ППД-туберкулина используется большое количество химических реактивов, что приводит к нарушению специфичности препарата, уменьшению активности туберкулопротеина на 20-30 и более,и, в конечном итоге, к появлении неспецифических реакций на этот препарат при диагностике заболевания животных. Диализ против водопроводной воды способствует загрязнениию белков микрофлорой. Целлофановые оболочки, имеющие жидкости, осаждение 50-ой трихлоруксусной кислотой, отстаивание туберкулопротеина в течение 18-24 ч, стандартизацию осуществляют в 10 растворе глицерина на деминерализованной воде до содержания белка 0,800,20 мг/мл, доведением рН среды до 7,00 путем добавления 40 раствора гидроксида натрия, расфасовку во флаконы и стерилизацию при 0,5 атм в течение 10 мин. Пример получения ППД-туберкулина. Получение ППД-туберкулина включает выращивание микобактерий туберкулеза шт.8 на жидкой синтетической питательной среде в течение 60 суток при температуре 37-38 С,автоклавирование при 1 атм в течение 2-3 часов,отделение культуральной жидкости, осаждение 50-ой трихлоруксусной кислотой, отстаивание туберкулопротеина в течение 18-24 ч, стандартизацию осуществляют в 10 растворе глицерина на деминерализованной воде до содержания белка 0,800,20 мг/мл, доведением рН среды до 7,00 путем добавления 40 раствора гидроксида натрия,расфасовку во флаконы и стерилизацию при 0,5 атм в течение 10 мин. Испытание приготовленного туберкулина проводили в сравнении с ППД-туберкулином для млекопитающих на морских свинках. Трем опытным морским свинкам вводили 0,2 мг вакцины БЦЖ в объеме 0,1 см . Три морские свинки служили контролем. Через 30 суток опытным морским свинкам вводили с правой стороны ППД-туберкулин для млекопитающих, с левой стороны испытуемый туберкулин в дозе 500 ТЕ в объеме 0,1 см 3. Через 24 часа после введения туберкулинов проводили учет аллергических реакций путем измерения размеров гиперемии. Проведенные исследования показывают, что интенсивность аллергических реакций на испытуемый туберкулин выше, чем на ППД-туберкулин для млекопитающих. У животных контрольной группы аллергическая реакция отсутствует на оба туберкулина. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения ППД-туберкулина, включающий выращивание микобактерий туберкулеза,автоклавирование,отделение надосадочной жидкости,осаждение,отстаивание туберкулопортеина, отделение надосадочной жидкости, растворение белка, диализ целлофановой оболочкой против водопроводной воды и стандартизация,отличающийся тем,что выращивание микобактерий туберкулеза осуществляется в течение не более 60 суток,осаждение белка осуществляют однократно только раствором трихлоруксусной кислоты,с исключением стадии диализа целлофановой оболочкой против водопроводной воды, а стандартизацию осуществляют в 10 растворе глицерина на деминерализованной воде до содержания белка 0,800,20 мг/мл, доведением рН среды до 7,00 путем добавления 40 раствора гидроксида натрия. Таблица 1 Опытная группа Контрольная группа Размер папул при введении известного 11 ПД-туберкулина Размер папул при введении испытуемого туберкулина (мм) 10 11 11