Способ диагностики аллергического ринита

(51) 01 33/53 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Техническим результатом изобретения является повышение достоверности способа. Это достигается тем, что в заявляемом способе диагностики аллергического ринита путем исследования носового секрета,согласно изобретению, определяют концентрацию ИЛ-4 в смывах с мазков отпечатков со слизистой оболочки носовой полости и выявлении ИЛ-4 или при повышении концентрац ии или повышении уровня ИЛ-4 в смывах с мазков отпечатков со слизистой оболочки носовой полости судят о наличии у больного аллергического ринита.(72) Кудайбергнова Сауле Фазыловна Жайсакова Дямелы Едгеевна Рамазанова Бахыт Аманулловна Ланкина Марина Вячеславовна(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКОГО РИНИТА Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии и аллергологии. Известен способ диагностики аллергического ринита путем определения концентрации свободного гемоглобина в назальном секрете иммунометрическим методом в реакции коагглютинации. Показано, что средние величины уровня свободного гемоглобина у больных аллергическим ринитом достоверно выше, чем у больных хроническим рецидивирующим риносинуситом и здоровых доноров. Уровень свободного гемоглобина в назальном секрете может быть использован как диагностический маркер аллергического ринита.(Мац А.Н., Кочетова Ю.И., Мокроносова М.А. Свободный гемоглобин в назальном секрете как диагностический маркер аллергического ринита // Российский аллергологический журнал.- 2004,3.с.26-29). Недостатком данного способа является низкая достоверность, т.к. гемоглобин не является специфическим маркером аллергического процесса. Известен также способ диагностики аллергического ринита по определению в носовых выделениях уровня триптазы, как показателя активности тучных клеток и эозинофильного катионного белка, как маркера активации эозинофилов, которые вовлекаются в развитие ранних форм ринита./,.,., .// .. .- 2004.- 34,7.с.1086-1092). Недостатком данного способа является также низкая достоверность,триптаза является активатором не только аллергического ринита, но и любого другого назального осложнения. Задачей изобретения является создание достоверного способа диагностики аллергического ринита, который дает возможность оценить характер гиперчувствительности при аллергическом рините, исследовать функциональное состояние слизистой носа и назначить адекватную терапию на поликлиническом этапе не только аллергологам, но и врачам других специальностей. Техническим результатом изобретения является повышение достоверности способа. Это достигается тем, что в заявляемом способе диагностики аллергического ринита путем исследования носового секрета,согласно изобретению, определяют концентрацию ИЛ-4 в смывах с мазков отпечатков со слизистой оболочки носовой полости и выявлении ИЛ-4, или при повышении концентрации, или повышении уровня ИЛ-4 в смывах с мазков отпечатков со слизистой оболочки носовой полости, судят о наличии у больного аллергического ринита. Дисрегуляция секреции ИЛ-4 является ключевой в развитии аллергопатологии. ИЛ-4 представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 15-20 кДа. Основные продуценты ИЛ-4 - Т-хелперы 2-го типа (-2) и тучные клетки. Способ осуществляется следующим образом. Для взятия отпечатков с поверхности слизистой оболочки носа для определения концентрации ИЛ-4 в смывах с мазков отпечатков у больных с различными формами аллергического ринита используют обычную фильтровальную бумагу размером 1 см 2 (отрезанную ножницами), которую прикладывают на предварительно очищенную физиологическим раствором слизистую оболочку переднего конца нижней носовой раковины. Время аппликации составляет 15 секунд. После этого пропитанную фильтровальную бумагу полностью с помощью пинцета погружают в эпендорф с 0,1 мл 0,9 раствора натрия хлорида. Время экспозиции 1 час. Затем фильтровальную бумагу удаляют из эпендорфа пинцетом и пробирку-эпендорф с полученным раствором цитокинов замораживают при температуре минус 35 С. Непосредственно перед проведением теста на содержание цитокина ИЛ-4 пробирки размораживают. Определение ИЛ-4 в смывах с мазков-отпечатков со слизистой оболочки носа проводят методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью специального набора фирмы ВекторБест (Новосибирск). Принцип метода основан на твердофазном сэндвич-варианте иммуноферментного анализа. Специфическими реагентами набора являются моноклональные антитела к ИЛ-4, сорбированные на поверхности лунок разборного полистирольного планшета. На первой стадии анализа образцы инкубируют в лунках с иммобилизованными антителами. Имеющийся в образцах ИЛ-4 связывают с иммобилизованными антителами. Не связавшийся материал удаляют отмывкой. Связавшийся ИЛ-4 взаимодействует при инкубации с конъюгатом 1 (антитела к ИЛ-4 человека с биотином). Не связавшийся конъюгат 1 удаляют отмывкой. На третьей стадии связавшийся конъюгат 1 взаимодействует при инкубации с конъюгатом 2 (стрептавидин с пероксидазой хрена). После третьей отмывки количество связавшегося конъюгата 2 определяют цветной реакцией с использованием субстрата пероксидазы хрена,перекиси водорода и хромогена тетраметилбензидина. Реакцию останавливают добавлением стоп-реагента и измеряют оптическую плотность растворов в лунках при длине волны 450 нм. Интенсивность желтого окрашивания пропорциональна количеству содержащегося в образце ИЛ-4. Диапазон измеряемых концентраций 0-100 пг/мл,чувствительность анализа- 0,4 пг/мл. При выявлении ИЛ-4, или при повышении концентрации, или повышении уровня ИЛ-4 в смывах с мазков отпечатков со слизистой оболочки носовой полости, судят о наличии у больного аллергического ринита. Пример 1. Пациент Р., 30 лет. Жалобы на приступообразное чихание, зуд в носу, обильное водянистое 2 отделяемое из носа, затрудненное носовое дыхание,покашливание. Вышеперечисленные жалобы появляются в период с начала июня и продолжаются до конца августа. Проведено обследование А К - эозинофилия в крови 12 и т.д. Больному проведены скарификационные кожные пробы с подозреваемыми аллергенами. Результаты кожных проб оказались сомнительными. При исследовании вентиляционной функции носа активной методом ПАРМ(передней риноманометрии) выявлена высокая степень нарушения проходимости (Суммарный объемный поток 489 мл/сек). При риноскопии выраженная отечность слизистой носа, она бледная, в носовых ходах обильная слизь. Проведен дополнительный метод диагностики. По предлагаемому способу взят мазок-отпечаток со слизистой оболочки носа и проведено исследование концентрации ИЛ-4 в смывах с мазка-отпечатка методом ИФА. Концентрация его составила 12,8 пг/мл. Следовательно,у больного выявлен аллергический ринит. Назначено лечение. Пример 2. Пациент К., 42 года. Клиника характеризовалась затрудненным носовым дыханием, выделениями из носа, частым приступообразным чиханием, иногда головными болями. Вышеуказанные жалобы беспокоят пациента почти круглый год. (т.е. ставить кожные пробы нет возможности при обострении). Это круглогодичная форма аллергического ринита(КАР). При эндоскопии выявлена отечность слизистой оболочки нижних носовых раковин. Цвет слизистой синюшный со стекловидным оттенком. Определили концентрацию ИЛ-4 в смывах с мазков отпечатков с поверхности слизистой оболочки носа по предлагаемому способу. Результат составил 7,3 пг/мл. У данного больного можно судить о наличии аллергического ринита. Назначено лечение. Предлагаемый способ необходим или показателен особенно в случаях, когда отсутствует сезонность, отрицательные или сомнительные кожные пробы, а также в тех случаях, когда наблюдаются круглогодичные клинические проявления и нет возможности ставить кожные пробы. Бывают случаи, когда пациент негативно настроен к диагностике. Определение уровней сывороточного и секреторного ИЛ-4 является ценным диагностическим критерием для диагностики аллергических ринитов. Таким образом, заявляемый способ является доступным, а в совокупности с лабораторными,инструментальными методами обследования,количественное определение уровня ИЛ-4 в смывах с мазков отпечатков со слизистой оболочки носовой полости имеет важное значение при оценке иммунного статуса организма, особенно при диагностике аллергического ринита. Это позволит провести эффективный скрининготбор аллергобольных для дальнейшего проведения адекватного обследования, и, соответственно,адекватного лечения. К тому же иммуноферментные методы высокоспецифичны, просты и быстры в исполнении и являются существенным дополнением к пониманию патогенеза заболеваний. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики аллергического ринита,включающий исследование носового секрета,отличающийся тем, что исследуют смывы с мазков отпечатков слизистой оболочки носовой полости методом твердофазного иммуноферментного анализа при выявлении в смывах -4 или при повышении его концентрации у больного диагностируют аллергический ринит.