Способ получения иммуностимулятора

(51) 61 35/56 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат достигается созданием способа получения иммуностимулятора,включающего гомогенизацию тимуса животных,термическую обработку для разрушения, удаления термолабильных веществ,очистку целевого продукта, при этом отличительной особенностью является то, что в качестве исходного сырья используют тимус и лимфатические узлы бычков в соотношении 14, удаляют жировой слой,промывают 0,3 формалинизированным раствором,обсушивают, выдерживают 5-7 суток при 4 С и гомогенизируют. Из гомогената готовят 5 взвесь на стерильном физиологическом растворе рН 6,0,которую подвергают термическому воздействию путем автоклавирования при 1 атм. в течение 30-45 мин. и фильтруют.(72) Мустафин Батыржан Муафикович Тен Виктор Борисович Базарбаев Марат Аманжоллы Рафилбек(57) Изобретение относится к ветеринарной иммунологии и касается способов получения биологических активных препаратов из животного сырья, в частности препаратов, обладающих иммуностимулирующим действием, получаемых из тимуса и лимфатических узлов животных. Технический результат - упрощение технологии получения целевого продукта с достаточно высокой иммуностимулирующей активностью. 23837 Изобретение относится к ветеринарной иммунологии и касается способов получения биологических активных препаратов из животного сырья, в частности препаратов, обладающих иммуностимулирующим действием, получаемых из тимуса и лимфатических узлов животных. Известен способ получения иммуностимулятора,включающий обработку лимфатических узлов животных,замораживание,измельчение,экстрагирование 3 раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрование,обработку надосадочной жидкости ацетоном,отделение осадка, перерастворение его в воде и выделение целевого продукта. А.с. СССР 1187824, МКИ А 61 35/30.- 1985. Недостатком способа является сложность технологического процесса. Известен способ получения иммуностимулятора,включающий гомогенизацию тимусов млекопитающих, экстракцию раствором хлористого натрия,осаждение твердых частиц ткани центрифугированием, удаление из супернатанта термолабильных белков при нагревании,освобождение от пигментных и пирогенных веществ,осаждение целевого продукта с последующей очисткой путем солевого фракционирования, гельхроматографии. А.с. СССР 1255136, МКИ А 61 35/55.- 1986. Недостатком способа является сложность и трудоемкость технологического процесса центрифугирование,фракционирование,гельхроматография. Кроме того, способ не обеспечивает получение препарата с высокой иммуностимулирующей активностью. Задача изобретения - создание способа получения иммуностимулятора. Технический результат - упрощение технологии получения целевого продукта с высокой иммуностимулирующей активностью. Технический результат достигается созданием способа получения иммуностимулятора,включающего гомогенизацию тимуса животных,термическую обработку для разрушения, удаления термолабильных веществ,очистку целевого продукта, при этом отличительной особенностью является то, что в качестве исходного сырья используют тимус и лимфатические узлы бычков в соотношении 14, удаляют жировой слой, промывают 0,3 формалинизированным раствором,обсушивают, выдерживают 5-7 суток при 4 С и гомогенизируют. Из гомогената готовят 5 взвесь на стерильном физиологическом растворе рН 6,0,которую подвергают термическому воздействию путем автоклавирования при 1 атм. в течение 30-45 мин. и фильтруют. Анализ научной и патентной литературы аналогичных способов не выявил. Способ осуществляется следующим образом. Берут тимус и лимфатические узлы бычков 18-20 мес., находившихся в специальных условиях, в соотношении 14, удаляют жировой слой, промывают 0,3 формалинизированным раствором и обсушивают. Обработанные таким образом органы выдерживают 5-7 суток при 4 С для выработки биогенных стимуляторов и максимального выхода биологически активных веществ, в стерильных условиях измельчают в ступке или в гомогенизаторе. Из гомогената готовят целевой продукт - 5 взвесь тимуса и лимфатических узлов в соотношении 14 на стерильном физиологическом растворе рН 6,0. Затем взвесь подвергают термическому воздействию путем автоклавирования при 1 атм. в течение 30-45 мин. и фильтруют с применением вакуумного насоса. Автоклавирование в течение 30-45 мин. - является оптимальным,дальнейшее увеличение или уменьшение времени автоклавирования ведет к снижению активности получаемого вещества. 5 взвесь обеспечивает максимум иммуностимулирующей активности вещества. Супернатант консервируют нейтральным 40 формалином из расчета 0,3 см 3 на 100,0 см 3 препарата и разливают во флаконы в стерильных условиях. Препарат проверяют на стерильность,безвредность и активность. Пример 1. Проводят посев препарата на питательные среды МПА, МПБ, ПГГ, ПГГБ,выдерживают в термостате в течение 10 суток при 37-38 С. Посевы оставались стерильными в течение срока наблюдения. Пример 2. Для проверки на безвредность препарат вводят 5 белым мышам, массой 20 г по 0,5 см 3 подкожно в область брюшка, для наблюдения за местом введения и физиологическим состоянием животных. Наблюдение проводят в течение 10 дней. Установлено, что на месте введения препарата видимых изменений нет, состояние животных в пределах нормы. Пример 3. Для проверки активности препарата берут 5 групп морских свинок, по 10 голов в каждой,инфицированных высокопатогенным штаммом. -1 в дозе 500 тыс. м.к. на животное. Первая группа животных - контрольная, препарат не вводится. Второй группе животных вводят 5 взвесь тимуса и лимфатического узла в соотношении 14.игруппам животных вводят тот же препарат, что и второй, в таком же соотношении, по 1 см 3, подкожно, в область брюшка, 4-кратно с 7 дневным интервалом, за исключением концентрации- длягруппы 4 взвесь, длягруппы 6. Пятой группе животных вводят Т-активин согласно наставления по его применению. На 30 день животных убивают для бактериологического исследования органов. Установлено, что 50 животных ,группы не подверглись заражению, в то время как животные,которым ввели Т-активин, 4 испытуемый препарат,противостояли заражению в 40 случаев, при 100 заражении контрольных, (табл. 1) Пример 4. Для проверки эффективности препарата,приготовленного из тимуса 23837 бесшерстную область за локтевым суставом. Одновременно вводят препараты. Первой группе животных вводят препарат коммерческий (Т-активин), 1 см 3 подкожно, 4-кратно с 7-дневным интервалом. Второй группе животных вводят препарат 4(испытуемый), приготовленный из тимусалимфатические узлы в соотношении 12. Препарат вводят так же как и животным первой группы. Третьей группе животных - 5 препарат(испытуемый), четвертой группе животных - 6 препарат (испытуемый). Пятая группа - контрольная, препарат не вводят. На 30 день после введения препаратов животных убивают. Результаты проверки эффективности препаратов представлены в таблице 2. Из данных таблицы видно, что препараты испытуемые в ,группах предохраняет животных в 60 случаев, а коммерческий и 4 препараты - в 40 случаев. Полученные результаты дают основание считать,что использование предлагаемого иммуностимулятора как самостоятельно, так и в композиции с антибактериальными,профилактическими и противопаразитарными средствами,позволит получить высокий терапевтический и профилактический эффект,стимулируя иммуногенез у животных при иммунодефицитных состояниях,повысит эффективность оздоровительных мероприятий. Предлагаемый способ отличается простотой изготовления, высокой активностью, исключением реактивов (уксусной кислоты, хлористого цинка),сложных методов очистки путем солевого фракционирования, гель- хроматографии. Экономическая эффективность изобретения заключается в уменьшении инфицирования внешней среды патогенными возбудителями, в снижении угрозы заболевания человека и животных, в устранении заноса инфекции в благополучные хозяйства и уменьшении затрат на проведение дополнительных мероприятий. Таблица 1 Результаты проверки эффективности препаратов на морских свинках Результаты проверки эффективности препаратов на овцах Количество Исследовано соотношении 14, удаляют жировой слой, промывают 0,3 формалинизированным раствором,Способ получения иммуностимулятора, обсушивают, выдерживают 5-7 суток при 4 С и включающий гомогенизацию тимуса животных, гомогенизируют, готовят 5 взвесь на стерильном термическую обработку для разрушения, удаления физиологическом растворе рН 6,0, которую термолабильных веществ, очистку целевого продукта подвергают термическому воздействию путем отличающийся тем, что в качестве исходного сырья автоклавирования при 1 атм. в течение 30-45 мин. и используют тимус и лимфатические узлы бычков в фильтруют. Верстка Косалиева Б. Корректор Мадеева П.А. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ