Способ получения коллагена из костной ткани крупного рогатого скота

(51) 61 35/32 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Сущность изобретения измельчение костной ткани до получения костной крошки размером 1-2 мм, обработка костной крошки 2 раствором соляной кислоты в течение 24 часов, последующий гидролиз в течение 48 часов в смеси раствора 0,4 н гидроксида натрия и этанола в соотношении 11,нейтрализация до рН 7,0-7,5, центрифугирование при 3500-4000 об/мин в течение 40 мин, обработка полученного осадка 0,05 раствором трипсина при 37 С в течение 3 часов,повторное центрифугирование и отмывка материала дистиллированной водой,замораживание и лиофилизацию. Эффективность способа заключается в увеличении выхода коллагена,снижение себестоимости и очистки коллагеновой массы т неколлагеновых белков.(72) Кауламбаева Маржан Закановна Ахметсадыков Нурлан Нуролдинович Амиргазиева Макпал Куанышбаевна(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЛЛАГЕНА ИЗ КОСТНОЙ ТКАНИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА(57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано при приготовлении лекарственных форм и изготовлении медицинских изделий для использования в общей хирургии и стоматологии. 23371 Изобретение относится к медицине и может быть использовано при приготовлении лекарственных форм и изготовлении медицинских изделий для использования в общей хирургии и стоматологии. Известен способ получения коллагена из костной ткани, включающий очистку, измельчение костной ткани, гидролиз, нейтрализацию, при этом костную ткань измельчают до получения костной крошки размером от 1,0 до 2,0 мм, проводят гидролиз в течение 24-48 ч в смеси раствора 0,4 н гидроксида натрия и этанола в соотношении 11, нейтрализуют до рН 7,0-7,5, центрифугируют при 3500-4000 об/мин в течение 40 мин, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,125 раствором папаина при 37 С, затем повторно гидролизуют смесью раствора 0,4 н гидроксида натрия и этанола в соотношении 11, диализуют против воды,замораживают и лиофилизируют ( 2 161 976 С 1,А 61 35/32, 2002). Недостатком данного средства является дороговизна способа, и то, что применение коллагена, полученного указанным способом, может привести к аллергическим или воспалительным реакциям, так как он содержит свободные концы коллагеновых волокон. Задачей изобретения является снижение себестоимости, повышение качества конечного продукта. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в снижении себестоимости и повышении качества конечного продукта,Технический результат достигается тем, что в способе получения коллагена из костной ткани,включающем измельчение костной ткани до получения костной крошки размером 1-2 мм,обработку 2 раствором соляной кислоты в течение 24 часов, последующий гидролиз в течение 48 часов в смеси раствора 0,4 н гидроксида натрия и этанола в соотношении 11, нейтрализация до рН 7,0-7,5,центрифугирование при 3500-4000 об/мин в течение 40 мин, обработку полученного осадка 0,05 раствором трипсина при 37 С в течение 3 часов,повторное центрифугирование и отмывку материала дистиллированной водой,замораживание и лиофилизацию. Предварительная обработка костной крошки 2 раствором соляной кислоты приводит к деминерализации кости и улучшению последующего гидролиза. Гидролиз костной крошки проводят в течение 48 ч в смеси раствора 0,4 н гидроксида натрия и этанола в соотношении 11, что позволяет полностью выделить и обезжирить весь костный коллаген. Нейтрализация приводит к осаждению белка. Удаляют надосадок центрифугированием при 35004000 об/мин в течение 40 мин, так как при центрифугировании менее 3000 об/мин осаждается менее 50 гидролизата. Обработку 0,05 раствором трипсина (вместо папаина) при 37 С позволяет провести полный гидролиз свободных неколлагеновых белков кости и удалить свободные концы коллагеновых волокон,так как трипсин, являясь протеолитическим ферментом,гидролизует белки животного происхождения более эффективно, чем раствор папаина. Отмывка и повторное центрифугирование белковой массы позволяет удалить из ткани гидролизованные неколлагеновые белки и остатки трипсина. Это позволяет исключить из процесса диализ против воды с использованием дорогостоящих диализных трубок, что значительно удешевляет продукт и уменьшает аллергическую реакцию. Способ осуществляется следующим образом. Кость очищают от мышц, связок и прочего,отмывают,обезжиривают,высушивают и измельчают до получения костной крошки размером 1-2 мм. Затем обрабатывают 2 раствором соляной кислоты в течение 24 часов. Гидролиз проводят в течение 48 ч в смеси раствора 0,4 и гидроксида натрия и этанола в соотношении 11, нейтрализуют до рН 7,0-7,5, центрифугируют при 3500-4000 об/мин в течение 40 мин, надосадок сливают, а осадок обрабатывают 0,05 раствором трипсина при 37 С в течение 3 часов, затем повторно центрифугируют при 3500-4000 об/мин в течение 40 мин, отмывают осадок дистиллированной водой и повторным центрифугированием, замораживают и лиофилизируют. Пример. Получения костного коллагена различными способами Способ получения костного коллагена Масса исходной кости (г) Масса полученного коллагена (г) Старый способ Предложенный способ- отсутствие аллергической реакции. Эффективность способа заключается в увеличении выхода коллагена,снижение себестоимости и очистки коллагеновой массы от неколлагеновых белков. 2 Аллергическая реакция на полученный коллаген ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения коллагена из костной ткани крупного рогатого скота, включающий измельчение костной ткани,гидролиз,нейтрализацию,отличающийся тем, что костную крошку 23371 предварительно обрабатывают 2 раствором соляной кислоты в течение 24 часов, обработку осадка проводят 0,05 раствором трипсина при 37 С в течение 3 часов, а осадок отмывают дистиллированной водой и центрифугируют при 3500-4000 об/мин в течение 40 мин