Способ изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для выявления больных пастереллезом птиц

(2009.01), 12 1/20 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении эффективного антигенного эритроцитарного диагностикума для выявления больных пастереллезом птиц. Способ изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для выявления больных пастереллезом птиц путем сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана антигеном в дозе 60 мкг/см 3 в присутствии конъюгирующего агента при температуре 45 С,экспозиции в течение 30 минут с последующим отмыванием эритроцитов,в качестве конъюгирующего агента используют 0,005-ный раствор танина.(72) Айдарбекова Лаура Жусипназаровна Умитжанов Мынбай Каратаев Болат Шайзадаевич(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АНТИГЕННОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БОЛЬНЫХ ПАСТЕРЕЛЛЕЗОМ ПТИЦ(57) Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к лабораторной диагностике пастереллеза птиц и может быть использовано в микробиологии и иммунологии. 22469 Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к лабораторной диагностике пастереллеза птиц и может быть использовано в микробиологии и иммунологии. Известен способ получения эритроцитарного диагностикума для индикации бактерий путем сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана сывороткой в разведении 150 в присутствии конъюгирующего агента при температуре 45 С в течение 60 минут с последующим отмыванием эритроцитов А.с. СССР 889002, А 61 К 39/00, 1981. Недостатком известного способа является низкая чувствительность и специфичность препарата. Задачей изобретения является получение высокочувствительного,специфичного и стабильного антигенного эритроцитарного диагностикума для выявления больных пастереллезом птиц. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении эффективного антигенного эритроцитарного диагностикума для выявления больных пастереллезом птиц. Способ изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для выявления больных пастереллезом птиц путем сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана антигеном в дозе 60 мкг/см в присутствии конъюгирующего агента при температуре 45 С,экспозиции в течение 30 минут с последующим отмыванием эритроцитов,в качестве конъюгирующего агента используют 0,005-ный раствор танина. Для изготовления пастереллезного антигена используют штаммА биовар-0054 КазНИВИ 12, который хранится в коллекции лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ). Штамм характеризуется следующими признаками. Происхождение штамма бактерий. Штамм бактерий выделен от трупа павшей птицы в Алматинской области, способ выделения направленный ступенчатый отбор. Сравнен с типовым штаммом 8- 1974. Назначение штамма бактерий. Продуцирует гемолитический токсин, гемолизирует эритроциты морской свинки и не лизирует эритроциты барана. Используется для диагностики пастереллеза птиц. Состав среды и условия культивирования. Агар Хоттингера с добавлением 5 эритроцитов кур. Морфолого-культуральные свойства. Вегетативные клетки растут на агаре Хоттингера при температуре 37 С, оптимальное рН - 7,2-7,4, в течение 24-48 часов. Грамотрицательные бактерий короткие овоидные палочки, размеры клеток 0,4-2,5 мкм,неподвижны, очертания концов закругленные,2 клеточные стенки содержат липополисахарид,консистенция -формы. Физиолого-биохимические свойства. Принадлежность к трофической группе хемогетеротроф. Типы катаболизма аэроб или факультативный анаэроб. Симбиотрофные отношения паразитизм. Источники углерода ферментирует маннит,сахарозу,глюкозу,мальтозу,дульцит,не ферментирует арабинозу, галактозу, лактозу,раффинозу. Другие характерные физиологические особенности обмена дифференцирующие и диагностические ферменты каталаза, оксидаза,лизиндекарбоксилаза, образует индол, сероводород,редуцирует нитраты в нитриты, не свертывает молоко, не разжижает желатин. Маркерные признаки штамма. Гемолизирует эритроциты морской свинки и не гемолизирует эритроциты барана. Способ, условия и состав сред для хранения. Лиофильно высушенный или на косячках с 1,5 агаром Хоттингера при температуре 222 С. Способ, условия и состав сред для размножения штамма агар Хоттингера с добавлением 5 эритроцитов кур. Штамм бактерийА биоварВ-0054 КазНИВИ 12 используемый для получения антигенного эритроцитарного диагностикума для выявления больных пастереллезом птиц. Указанный штамм бактерий депонирован в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт. Идентификацию штамма микроорганизмов проводят по основным морфологическим,культуральным и физиологобиохимическим свойствам,согласно определителя(1974,1984, 1997, справочные издания). Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Пример 1. К 5 взвеси эритроцитов при перемешивании добавляют равный объем раствора антигена и сенсибилизируют при температуре 45 С в течение 30 минут. Для закрепления сенситина на эритроцитах, к смеси сенсибилизированных эритроцитов с сенситином добавляют 0,005 раствор танина и закрепляют в течение 30 минут. Для удаления остатков сенситина, несвязавшегося с рецепторами эритроцитов, их четырехкратно отмывают при 2000 об/мин в течение 10 минут раствором твина 80 в разведении 150000 из расчета 25-кратного объема к осадку эритроцитов. Осадок сенсибилизированных эритроцитов после отмывания разводят 0,9 раствором натрия хлорида рН 6,8 до 2,5 концентрации эритроцитов. Пример 2. Диагностикум эритроцитарный пастереллезный антигенный проверяют на внешний вид, растворимость, гомогенность, влажность,стерильность,концентрацию эритроцитов,активность, специфичность. 22469 Внешний вид определяют визуально,просматривая флаконы в проходящем свете. Флаконы должны быть целыми, без трещин и иметь одинаковый объем содержимого. Одновременно флаконы проверяют на плотность укупорки и правильность этикетирования. Для определения растворимости во флакон с сухой аморфной массой добавляют 11 см 3 0,9-ного раствора натрия хлорида, при этом должна образоваться равномерная взвесь коричневого цвета,без видимых скоплений эритроцитов, в течение одной минуты. Для определения гомогенности 2,5-ную взвесь диагностикума разводят в 5 раз 0,9 -ным раствором натрия хлорида до получения 0,5 -ной концентрации, затем каплю такой взвеси наносят на предметное стекло, покрывают стеклом и микроскопируют при малом увеличении микроскопа. Эритроциты должны располагаться изолированно. Изредка могут встречаться небольшие скопления, не более чем по 10 эритроцитов и не более 3 скоплений в 10 полях зрения. Влажность должна быть не выше 3 . Определение проводят по методике, изложенной в сборнике инструкций, утвержденном приказом Минздрава СССР 31 от 13.01.83 г. На один анализ используют содержимое 3-х флаконов. Диагностикум на стерильность не проверяют. Консервант азид натрия в разведении 1 5000. Для определения концентрации эритроцитов диагностикум содержащий 2,5 -ную взвесь эритроцитов, разводят 0,9 -ным раствором натрия хлорида в 200 раз. Затем каплю такой взвеси помещают в камеру Горяева и подсчитывают с помощью микроскопа количество эритроцитов. Для получения удовлетворительного результата подсчитывают не менее 5 больших квадратов или 80 маленьких. Для каждой серии подсчет эритроцитов проводится 2 раза. Препарат отвечает требованиям,если он содержит в 1,0 см 3 2,5 -ной взвеси не более 550 000 эритроцитов. Определение специфичности и активности. При контроле на специфичность диагностикума используют коммерческие агглютинирующие гетерологичные сыворотки. Во всех случаях должен быть отрицательный результат реакции. Диагностикум сухой имеет вид аморфной массы в виде таблетки коричневого цвета. Диагностикум должен выявлять антитела к пастереллезным антигенам в титре 1400 и выше, давать положительную реакцию в РНГА с пастереллезной агглютинирующей сывороткой в разведении не ниже 11600. Использование антигенного эритроцитарного диагностикума для выявления больных пастереллезом птиц позволит выявить больных пастереллезом птиц на ранней стадии заболевания. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ изготовления антигенного эритроцитарного диагностикума для выявления больных пастереллезом птиц путем сенсибилизации формализированных эритроцитов барана антигеном в дозе 60 мкг/см 3 в присутствии конъюгирующего агента при температуре 45 С, экспозиции в течение 30 минут с последующим отмыванием эритроцитов,отличающийся тем,что в качестве конъюгирующего агента используют 0,005-ный раствор танина.