Способ определения пестицидов в биологических жидкостях

(51) 01 30/00 (2006.01) 01 33/48 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Количественное определение пестицидов в биологической жидкости проводят газожидкостной хроматографией с термоионным детектором, экстрагирование пробы осуществляют органическим растворителем гексаном, с последующим разделением на колонке хроматографа с подвижной и неподвижной фазами. В качестве неподвижной фазы используют хроматон - 30, в качестве подвижной - 530. Процесс разделения ведут при температуре 170 С, в качестве газа-носителя используют азот. Применение предложенного способа позволяет увеличить чувствительность определения и повысить степень извлечения количества фосфорсодержащих пестицидов в биологических жидкостях.(72) Байдаулет Иманали Оспанович Досыбаева Гульжан Нурбековна Сраубаев Ермек Нигметович Кистаубаев Мадияр Умралиевич Аманбаева Бахыт Калбергеновна Жумабаев Айдар Жумабаевич(73) Байдаулет Иманали Оспанович Досыбаева Гульжан Нурбековна(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕСТИЦИДОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ(57) Изобретение относится к области медицины,а именно к хроматографическому анализу, и может быть использовано в медицинских исследованиях,для определения фосфорорганических пестицидов в пробах мочи и желчи. 22199 Изобретение относится к области медицины, а именно к хроматографическому анализу, и может быть использовано в медицинских исследованиях,для определения фосфорор-ганических пестицидов в пробах мочи и желчи. Известен способ определения остаточных количеств пестицида в продуктах животного происхождения. Пестицид экстрагируют хлороформом,насыщенным гидроксидом натрия,фильтруют и выпаривают. Наносят пробы на пластинки Силуфол 50-ным водным раствором ацетона и ледяной уксусной кислоты. Разгонку ведут в смеси метанола, ацетона и ледяной уксусной кислоты. Для идентификации пестицида используют смесь равных объемов 2-ного раствора нитрата серебра и 0,4-ного раствора бромфенолового синего (Патент РФ 2105973,0130/90, опубл. 27.02.98 г. БИ 6). Данный способ не позволяет определить количество именно фосфорорганических пестицидов в пробах мочи и желчи. Известен способ тонкослойного и газожидкостного хроматографического определения смеси пестицидов в биологическом материале (смывы с поверхности кожи и со спецодежды) применяемых в свекловодстве. В известном способе из пробы мочи экстракция пестицидов проводилась хлороформом. Количественное определение пестицидов осуществлялось методом двумерной хроматографии в тонком слое сорбента с последующей идентификацией различными проявляющими реагентами. (Белашова И. Г. Применение хроматографических методов для анализа смеси пестицидов в биологическом материале. Киевский НИИ гигиены труда и профзаболеваний. Киев, 1987, вып. 23, с.69-71). Недостатком способа является низкая идентификация определения наличия пестицидов в пробах мочи и желчи (2-4 мкг в 50 мл пробы). Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ определения -нафтола (метаболит севина) в моче животных, включающий обработку пробы мочи водным раствором едкого натра,экстракцию хлороформом, тонкослойную хроматографию и проявление 0,2-ным водным раствором диазония. Тонкослойную хроматографию проводят путем использования подвижной фазы из растворителей гексан - ацетон в соотношении 31(Патент РФ 2011992, 01 33/50, опубл.30.04.1994). Однако данный способ не предназначен для определения именно фосфорсодержащих пестицидов(фосфомида,карбофоса),т.к. последние не растворяются в органическом растворителе хлороформе. Способ характеризуется недостаточно высокой чувствительностью, сложностью проведения эксперимента, низкой степенью извлечения пестицидов из биологических жидкостей. Определение микроколичеств пестицидов в биологических жидкостях является сложной аналитической задачей. Сложность заключается в необходимости определения содержания исследуемых веществ на уровне 1,0 мкг и меньше, т.к. фосфорсодержащие пестициды поступая в организм быстро метаболизируются, что затрудняет их 2 идентификацию. Анализируемые биологические жидкости на содержание фосфорорганических пестицидов являются многокомпонентными смесями, содержащими коэкстрактивные вещества,которые могут искажать результаты химического анализа. Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа определения фосфорорганических пестицидов в пробах мочи и желчи,позволяющего повысить чувствительность определения, степень извлечения и надежность идентификации пестицида методом газожидкостной хроматографии. Задача изобретения достигается тем, что в способе определения пестицидов в биологических жидкостях, процесс экстракции проводят органическим растворителем гексаном, количественное определение проводят газожидкостной хроматографией с термоионным детектором, в качестве насадки колонки используют хроматон - 30 , с подвижной жидкой фазой 530. Разделение пробы осуществляют при температуре 170 С в токе азота. Предложенный способ определения пестицидов в биологических жидкостях включает несколько этапов отбор проб и их экстрагирование гексаном,концентрирование, отделение от коэкстрактивных веществ,идентификация и количественное определение микроколичеств пестицида методом газожидкостной хроматографией с применением термоионного детектора, являющийся более чувствительным для определения фосфорсодержащих пестицидов. С целью оценки токсического влияния пестицидов, исследование проводилось на рабочих хлопководческих производств, которые постоянно подвергаются неблагоприятному воздействию факторов хлопковой пыли,пестицидов,являющиеся причиной патологических изменений в организме. Пример. Пробу мочи 10 мл вносят в делительную воронку, приливают 5 мл гексана. Экстрагируют,встряхивая на холоде, в течение 60 мин. После отстаивания фильтруют,пропускают через безводный натрий сульфат. Экстракцию проводят еще дважды, встряхивая с новыми порциями гексана по 20 мин. Объединяют с первой порцией, измеряют объем. К пробе желчи (2 мл) приливают по 3 мл гексана и экстрагируют так, как описано для мочи. Из полученного экстракта биосред для газохроматографического анализа берут аликвотную часть (2-5 мкл) и вводят в испаритель газового хроматографа. Для анализа пробы используют газовый хроматограф с термоионным детектором, стеклянную колонку длиной 2 м и внутренним диаметром 3 мм, в качестве насадки колонки применяли хроматон - -с подвижной жидкой фазой 530. Температура колонки 170 С, температура детектора 260 С,температура испарителя 210 С расход газаносителя азота - 50 мл/мин. В течение 2-20 мин на хроматограмме получают качественный и количественный состав фосфорор 22199 ганических пестицидов в исследуемой пробе мочи или желчи биологического организма (таблицы 1, 2). Таблица 1 Аналитическая открываемость пестицидов в пробах мочи проба компонент Фосфомид хлорп-фос Фосфомид карбофос Фосфомид карбофос Степень извлечения фоссодержащих пестицидов в пробах мочи - 97,1-98,8. Таблица 2 Аналитическая открываемость пестицидов в пробах желчи проба Степень извлечения фоссодержащих пестицидов в пробах желчи 98,3 - 99,1. Предлагаемым способом обнаружены высокие концентрации фосфорсодержащих веществ в пробах мочи и желчи, которые составили в среднем 0,26830,265 мкг/см 3 и 0,001 1,086 мкг/мл соответственно. Применение предлагаемого изобретения позволяет увеличить чувствительность определения фосфорсодержащих пестицидов в пробах мочи и желчи до пикограммовых количеств (определяется 0,001 мкг пестицида в пробе, а по способупрототипу 0,5 мкг), и повысить степень извлечения до 99,1 (до 95 по прототипу). Предел обнаружения фосфороганических пестицидов в биологических жидкостях, удовлетворяет требованиям санитарно-химического контроля, проводимого хлопководческих районах с целью профилактики возможных отравлений. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения пестицидов в биологических жидкостях, предусматривающий экстракцию жидкости органическим растворителем и количественное определение анализируемых компонентов, отличающийся тем, что количественное определение компонентов проводят газожидкостной хроматографией с термоионным детектором, в качестве неподвижной фазы используют хроматон - 30 , подвижной фазы - 530, разделение осуществляют при температуре 170 С в токе азота, а в качестве органического растворителя при экстракции используют гексан.