Способ определения пестицидов в крови

(51) 01 33/49 (2006.01) 01 30/02 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ быть использовано в медицинских исследованиях,для определения фосфорорганических пестицидов в крови. Способ определения пестицидов в крови включает экстрагирование пробы органическим растворителем гексаном, последующее разделение на колонке хроматографа с подвижной и неподвижной фазами. В качестве неподвижной фазы используют хроматон - 30, в качестве подвижной - 530. Процесс разделения ведут при температуре 185-195 С, в качестве газаносителя используют азот. Применение предложенного способа позволяет увеличить чувствительность определения до пикограммовых количеств пестицидов и значительно сократить время их определения в крови.(72) Байдаулет Иманали Оспанович Досыбаева Гульжан Нурбековна Ибраев Серик Айтмакович Сраубаев Ермек Нигметович Арыкбаева Гульнур Мысыровна Кадырова Раушан Узакбаевна Асанова Галия Кутымбетовна Кистаубаев Мадияр Умралиевич Абдиева Айя Керимбердиевна Абдразаков Артур Утетлеуович(73) Байдаулет Иманали Оспанович Досыбаева Гульжан Нурбековна(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕСТИЦИДОВ В КРОВИ 21740 Изобретение относится к области медицины, а именно к хроматографическому анализу, и может быть использовано в медицинских исследованиях,для определения фосфорорганических пестицидов в крови биологических организмов. Известен способ определения остаточных количеств пестицида в продуктах животного происхождения. Пестицид экстрагируют хлороформом, насыщенным гидроксидом натрия, фильтруют и выпаривают. Наносят пробы на пластинки Силуфол 50-ным водным раствором ацетона и ледяной уксусной кислоты. Разгонку ведут в смеси метанола, ацетона и ледяной уксусной кислоты. Для идентификации пестицида используют смесь равных объмов 2- ного раствора нитрата серебра и 0,4-ного раствора бромфенолового синего(Патент РФ 2105973,0130/90, опубл. 27.02.98 г. БИ 6). Данный способ не позволяет определить количество фосфорорганических пестицидов в пробах крови биологических объектов. Известен способ тонкослойного и газожидкостного хроматографического определения смеси пестицидов в биологическом материале (моча, смывы с поверхности кожи и со спецодежды) применяемых в свекловодстве. В известном способе из пробы мочи экстракция пестицидов проводилась хлороформом. Количественное определение пестицидов осуществлялось методом двумерной хроматографии в тонком слое сорбента с последующей идентификацией различными проявляющими реагентами. (И.Г. Белашова. Применение хроматографических методов для анализа смеси пестицидов в биологическом материале. Киевский НИИ гигиены труда и профзаболеваний. Киев, 1987, вып. 23, с.69-71). Недостатком способа является сложность выполнения эксперимента, низкая идентификация определения наличия токсичных веществ в пробе крови. Определить количество фосфорсодержащих пестицидов этим способом не представляется возможным. Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ определения токсичных веществ нефтеперерабатывающих производств в крови. Токсичные вещества экстрагировали органическим растворителем хлороформом, с последующим их качественным и количественным анализом в хроматографической колонке,методом газожидкостной хроматографией в токе аргона при температуре 90-100 С. В качестве неподвижной фазы использован хроматон , в качестве подвижной -полиэтиленгликольадипинат. (Патент РК 14135,0130/00, опубл. 15. 03.04, БИ 3). Данным способом невозможно определить содержание именно фосфорорганических пестицидов, изза низкой чувствительности определения. Определение микроколичеств пестицидов в крови биологических организмов является сложной аналитической задачей. Сложность заключается в необходимости определения содержания исследуемых веществ на уровне 10 мкг и меньше, т.к. фосфорсодержащие пестициды поступая в организм быстро метаболизируются что затрудняет их идентификацию. Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа определения фосфорорганических пестицидов в крови, позволяющего повысить чувствительность определения и надежность идентификации пестицида методом хроматографии. Задача изобретения достигается тем, что в способе определения пестицидов в крови, процесс экстракции проводят органическим растворителем гексаном, в качестве неподвижной фазы используют хроматон - 30 , в качестве подвижной фазы 530. Разделение пробы осуществляют при температуре 185-190 С в токе азота. Предложенный способ определения пестицидов в крови осуществляется следующим образом. Пробу плазмы крови, в количестве 2 мл вносят в пробирку и приливают 5 мл органического растворителя - гексана. Экстрагируют, встряхивая в течение 5 мин, разделяют фазы, плазму отбрасывают, пробу гексана берут для дальнейшего исследования. После прохождения стадии испарения, исследуемую пробу растворяют в 500 мкл чистого гексана. Для газохроматографического анализа берут аликвотную часть в количестве 3 мкл и вводят в колонку газового хроматографа. Для анализа пробы используют газовый хроматограф с электронно-захватным детектором, стеклянную колонку длинной 2 м, заполненную неподвижной фазой хроматон - 30 , в качестве подвижной фазы применяют-5 -30. Процесс разделения ведут при температуре 190 С (температура колонки). Температура испарителя 220 С, температура детектора 270 С, скорость газа-носителя азота 50 мл/мин. С целью оценки токсического влияния пестицидов в крови, исследование проводилось на рабочих хлопководческих производств, которые постоянно подвергаются неблагоприятному воздействию факторов - хлопковой пыли, пестицидов, являющиеся причиной патологических изменений в организме. Пример. После забора, кровь центрифугировали при 3000 об/мин. Плазму отбирали и хранили при 20 С. К 2 мл плазмы приливали 5 мл гексана. После 5-минутного встряхивания водную (плазму) и органическую фазы разделяли центрифугированием(5 мин при 3000 об/мин), водную фазу удаляли, а органическую упаривали при 40 С досуха с помощью испарителя. Сухой остаток растворяли в 500 мкл чистого гексана, аликвоту в количестве 3 мкл наносили на колонку газового хроматографа. В течение 2-5 мин на хроматограмме получают качественный и количественный состав фосфорорганических пестицидов в исследуемой пробе крови биологического организма (хроматограммы прилагаются). Предлагаемым способом обнаружены высокие концентрации, фосфорсодержащего вещества (фосфамида) в сыворотке крови, которые составили в среднем 0,865-1,345 мкг/л. Применение предлагаемого изобретения позволяет увеличить чувствительность определения до пикограммовых количеств пестицида и значительно сократить продолжительность анализа. Предел обнаружения фосфорорганических пестицидов в крови биологического организма,удовлетворяет требованиям санитарно-химического контроля, проводимого в хлопководческих районах с целью профилактики возможных отравлений. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения пестицидов в крови,включающий экстрагирование пробы, последующее разделение на колонке с неподвижной и подвижной фазами, детектированием, отличающийся тем, что в качестве неподвижной фазы используют хроматрон- 30 , в качестве подвижной фазы - 530,разделение осуществляют при температуре 185195 С в токе азота, а экстракцию проводят гексаном.