Способ ранней молекулярно-генетической диагностики ишемической болезни сердца у мужчин уйгурской национальности

(51) 01 33/50 (2006.01) 12 1/68 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ выявления генетических факторов риска развития ишемической болезни сердца (ИБС) у мужчин уйгурской национальности. Техническим результатом является упрощение способа и повышение точности прогнозирования. Это достигается тем, что в способе ранней молекулярно-генетической диагностики ишемической болезни сердца у мужчин уйгурской национальности, включающем анализ венозной крови, выделение ДНК, проведение молекулярногенетического анализа, определение полиморфизма генов и аллелей, согласно изобретению, определяют полиморфизмы генов 1 и ЛПЛ, и при выявлении сочетания аллелягена ЛПЛ и аллеля гена 1 диагностируют предрасположенность к заболеванию ишемической болезнью сердца.(72) Байтасова Назия Багадурбековна Оспанова Гульнара Ермахановна Мусагалиева Айсулу Толекаевна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Научно-исследовательский институт кардиологии и внутренних болезней Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Предварительный патент РК 14038, кл. 01 33/50, 2002(54) СПОСОБ РАННЕЙ МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА У МУЖЧИН УЙГУРСКОЙ НАЦИОНАЛЬНОСТИ 21958 Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и предназначено для выявления генетических факторов риска развития ишемической болезни сердца (ИБС) у мужчин уйгурской национальности. Выполненные за последние годы фундаментальные исследования,посвященные изучению этиологии, патогенеза ИБС и факторов предрасположенности к ней, позволяют заключить,что ИБС является заболеванием, имеющим генетически выраженный(наследственный) характер, на формирование которого оказывает влияние генетический фон популяции. Для наследования ИБС характерен ряд особенностей, подтверждающих его полигенный характер. В этом случае используется подход с выделением генов-кандидатов, к которым относятся гены параоксоназы (1) и липо-протеидлипазы(ЛИЛ). Известен способ ранней диагностики ишемической болезни сердца путем проведения молекулярно - генетического анализа и определения полиморфизма гена АТФ - связывающего кассетного транспортера типа А 1, связанного с развитием ИБС.(Ю.М. Юферева, Д.М. Аронов, П.А. Сломинской Полиморфизм гена АТФ - связывающего кассетного транспортера типа А 1 и риск развития коронарной болезни сердца // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. -2004, 5.-с. 109-113). Недостатком данного способа является низкая эффективность, т.к. полиморфизм гена АТФ связывающего кассетного транспортера типа А 1 не может служить прогностическим показателем предрасположенности к ИБС в популяции уйгур. Известен также способ ранней диагностики предрасположенности к заболеванию ишемической болезнью сердца у лиц уйгурской национальности мужского пола путем анализа венозной крови,выделения ДНК, проведения молекулярно генетического анализа и определения полиморфизма генов и аллелей АпоВ (1, Х 2) АпоС 111 (1, 2) и Апо (Е 2, ЕЗ, Е 4), и при наличии ген - генного взаимодействия аллелей 114 диагностируют предрасположенность к заболеванию ишемической болезнью сердца.(Предпатент 14038, кл. 01 33/50, публ. 16.02.2004, Б.2) Недостатком данного способа является сложность,т.к. для выявления предрасположенности необходимо определять полиморфизм трех генов, что при высокой стоимости ПЦР-диагностики делает способ экономически не выгодным. Задачей изобретения является создание упрощенного способа ранней молекулярногенетической диагностики ишемической болезни сердца у мужчин уйгурской национальности,выявляющего дополнительные прогностические маркеры, отличительные по расово - этническому составу, повы-шающие точность прогнозирования. Техническим результатом является упрощение способа и повышение точности прогнозирования. 2 Это достигается тем, что в способе ранней молекулярно-генетической диагностики ишемической болезни сердца у мужчин уйгурской национальности, включающем анализ венозной крови, выделение ДНК, проведение молекулярно генетического анализа, определение полиморфизма генов и аллелей, согласно изобретению, определяют полиморфизмы генов 1 и ЛПЛ, и при выявлении сочетания аллелягена ЛПЛ и аллеля гена 1 диагностируют предрасположенность к заболеванию ишемической болезнью сердца. Способ осуществляется следующим образом. У пациента берут 5 мл венозной крови,выделяют ДНК, проводят ее молекулярно генетический анализ, определяют полиморфизмы(/-) генов ЛПЛ и 191 1. Полиморфизмы генов 1 и ЛПЛ изучают методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием олигонуклеотидных праймеров. Частотное распределение аллелей и генотипов генов ЛПЛ и 1 оценивают с помощью критерия 2. Фрагменты ДНК амплифицируют на автоматическом термоциклере,подвергают рестрикции и определяют распределение генотипов и аллелей генов ЛПЛ и 1. На основании полученных данных сочетание аллелейигенов ЛПЛ, соответственно, рассматривают как молекулярно-генетический маркер ранней диагностики ишемической болезни сердца. Пример 1. Больной К., уйгур, 46 лет, поступил с жалобами на боли за грудиной, давящего,сжимающего характера, ирадиирующие в левую руку, подлопаточную область, купируются приемом нитроглицерина через 5 мин, общую слабость. В анамнезе крупноочаговый инфаркт миокарда с зубцомна задней стенке. У больного взяли 5 мл венозной крови и выделили ДНК. Методом полимеразной цепной реакции с использованием олигонуклеотидных праймеров определили полиморфизмы генов ЛПЛ и 1. У больного выявлен генотип (/) гена ЛПЛ и генотип гена 1,что дает возможность диагностировать ишемическую болезнь сердца. Пример 2. Больной К., уйгур, 50 лет. Поступил с жалобами на боли в области сердца давящего характера, возникающие при физической нагрузке,купируются в покое, одышку при подъеме на 2-ой этаж, общую слабость. В анамнезе крупноочаговый инфаркт миокарда передней стенки левого желудочка. У больного взяли 5 мл венозной крови, выделили ДНК и определили полиморфизмы генов ЛПЛ и 01. При молекулярно-генетическом анализе определили генотипы (/) гена ЛПЛ и генотипгена 1, что также дает возможность диагностировать ишемическую болезнь сердца. Пример 3. Пациент И., уйгур 44 лет. Жалоб не предъявляет. У пациента И. взяли 5 мл венозной крови,выделили ДНК и определили полиморфизмы генов ЛПЛ и 1. При молекулярно - генетическом анализе определили генотипы (-/-) гена ЛПЛ 21958 и генотипгена 1, что не подтверждает генетическую предрасположенность к заболеванию. Пример 4. Пациент К., уйгур 38 лет. Жалоб не предъявляет. У пациента К. взяли 5 мл венозной крови,выделили ДНК и определили полиморфизмы генов ЛПЛ и 1. При молекулярно - генетическом анализе определили генотипы (-/-) гена ЛПЛ и генотипгена 1, что также не подтверждает генетическую предрасположенность к заболеванию. Были обследованы 70 мужчин, уйгурской национальности, поступивших в НИИ Кардиологии и Внутренних болезней МЗ РК с перенесенным инфарктом миокарда (ИМ) в анамнезе, без сопутствующих заболеваний. Средний возраст больных составил 47,1 1,4 лет. В контрольную группу были включены 70 практически здоровых мужчин без клинических проявлений сердечно-сосудистых заболеваний, без отягощенной наследственности по вышеуказанному заболеванию, с нормальными показателям ЭхоКГ,ЭКГ и нагрузочных проб, средний возраст которых составил 42,72,1 лет. Был проведен анализ совместного влияния генотипов исследованных генов на развитие ИБС у мужчин уйгурской национальности. Таблица Ген-генные взаимодействия генов ЛПЛ и 1 у мужчин уйгурской национальности Группы Больные здоровые Больные здоровые Больные здоровые В результате анализа ген-генного взаимодействия генотипов гена ЛПЛ и 1 установлено, что у больных ИБС сочетание генотипов(/) гена ЛПЛ с генотипамигена 1, встречается в 86,8 случаев, а в группе практически здоровых лиц данное сочетание встречается лишь в 60,0 случаев, что в 1,5 раз реже. В то же время у практически здоровых лиц сочетание генотипагена 1 с генотипом(/) гена ЛПЛ встречается в 40,0 случаев, а у больных ИБС это сочетание обнаружено в 13,1,что в 3 раза меньше. Следовательно, наличие аллелягена ЛПЛ в сочетании с наличием аллелягена 1 достоверно чаще обнаружено в группе больных ИБС в сравнении с практически здоровыми лицами. Напротив наличие аллелягена 1 в сочетании с наличием аллелягена ЛПЛ достоверно чаще встречалось в группе здоровых лиц по сравнению с больными ИБС(26,8 р 0,05). Таким образом, в результате исследования выявлено прогностически неблагоприятное сочетание генотипов по генам 1 и ЛПЛ у мужчин уйгурской национальности. Одновременное сочетание аллелягена ЛПЛ с аллельюгена 1 можно отнести к маркеру повышенного риска развития ИБС в данной этнической группе,т.е. изучение межгенных взаимодействий дает более полную картину о молекулярно-генетических предрасположенностях к развитию ИБС. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ ранней модекулярно-генетической диагностики ишемической болезни сердца у мужчин уйгурской национальности, включающий анализ венозной крови, выделение ДНК, проведение молекулярно-генетического анализа, определение полиморфизма генов и аллелей, отличающийся тем, что определяют полиморфизмы генов 1 и ЛПЛ, и при выявлении сочетания аллелягена ЛПЛ и аллелягена 1 диагностируют предрасположенность к заболеванию ишемической болезнью сердца.