Способ получения иммуноглобулинов G1 и G2 из сыворотки крови крупного рогатого скота

(51) 61 39/395 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения иммуноглобулинов 1 и 2 из сыворотки крови крупного рогатого скота включает выделение иммуноглобулинов из сыворотки крови с помощью органического вещества - каприловой кислоты, после чего выделенные иммуноглобулины подвергают препаративному электрофорезу в агаровом геле. Чистота полученных белков доказана аналитическим электрофорезом в агаровом геле, иммуноэлектрофорезом и с помощью моноспецифической иммунной сыворотки к иммуноглобулинучеловека.(76) Джанабекова Гульмира Кумискалиевна ,Жумашев Жайгали Жумашевич , Салханова Сауле Насибеденовна , Кенжеев Шукирхан Толенович , Джунусова Райхан Жексенбаевна(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ 1 И 2 ИЗ СЫВОРОТКИ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 21670 Изобретение относится к ветеринарии, в частности к иммунохимии и биохимии. Иммуноглобулины - белки животного происхождения, обладающие свойствами антител. Они вырабатываются в организме человека и животных,как ответная реакция на внедрение в организм чужеродных белков, вирусов и бактерий. У сельскохозяйственных животных обнаружены и идентифицированы три класса иммуноглобулиновМ и А, причем иммуноглобулинсуществует в виде двух подклассов - 1 и 2. Иммуноглобулинысоставляют основную массу антител против вирусов и бактерий. Около 70-80 всех иммуноглобулинов крови приходится на долю иммуноглобулинов . Известны способы выделения иммуноглобулиновиз сыворотки крови животных высаливание сульфатом аммония и натрия, осаждение спиртом и полиэтиленгликолем, гель-фильтрацией. Известен способ выделения иммуноглобулинаиз сыворотки крови кур (а.с. СССР 1695931, кл. А 61 К 39/395, 1991), по которому осаждение полиэтиленгликолем (ПЭГ-6000) проводят дважды,первый раз при концентрации 13 , а второй раз при концентрации ПЭГа-6000 10 при рН 4,4-4,6 с последующим подтитровыванием надосадка при рН 5,6-5,8. Однако способ не обеспечивает высокую чистоту препарата и позволяет выделить только иммуноглобулин , не разделяя его на подклассы. Известен способ получения иммуноглобулинового препарата путем осаждения спиртом(-фракция Кона), который позволяет получить препараты иммуноглобулинов , однако содержащие примеси других иммуноглобулинов (а.с. СССР 1815820, Кл. А 61 К 39/395, 1996). Задачей является разработка способа получения иммуноглобулинов 1 и 2 из сыворотки крови крупного рогатого скота, позволяющего получить основные защитные белки крупного рогатого скота иммуноглобулиныи его подклассов 1 и 2 в высокоочищенном состоянии. Способ получения иммуноглобулинов 1 и 2 из сыворотки крови крупного рогатого скота включает выделение иммуноглобулинов из сыворотки крови с помощью органического вещества - каприловой кислоты, после чего выделенные иммуноглобулины подвергают препаративному электрофорезу в агаровом геле. Пример. На первом этапе нормальную сыворотку крови крупного рогатого скота разбавляют 0,1 Н раствором уксусной кислоты до содержания белка 50 г/л, при этом рН смеси составляет около 5,0. К сыворотке при постоянном перемешивании на магнитной мешалке добавляют по каплям каприловую кислоту из расчета 3,3 см на 100 см разбавленной сыворотки. Перемешивание смеси продолжают до 30 мин. Осадок удаляют центрифугированием при 5000 об/мин в течение 20 мин. рН надосадочной жидкости доводят до 7,3 и используют в качестве препарата. На втором этапе используется препаративный электрофорез в агаровом геле, для чего приме 2 няются корсаковский агар и электрофоретическая камера, сделанная из плексигласа. В качестве буферногораствора применяется боратно-ацетатный буфер следующего состава ацетат натрия - 43,56 г,борная кислота -52,56 г, бура - 76,28 г на 10 л воды. Все реактивы марки Х.Ч. рН такого раствора - 8,57. Электрофорез проводится следующим образом. Гель агара заливается толщиной около 1 см, а раствор белка в количестве 30 см 3 разбавляют 20 см 3 2 агара и заливают в сплошную траншею. Поверхность траншеи заправляют 2 агаром. Электрофорез проводят в течение 6 часов, при напряжении 220 В, силе тока 220-240 мА в холодильнике. Сегменты геля, соответствующие зонам иммуноглобулинов 1 и 2, замораживают в морозильнике холодильника, оттаивают при комнатной температуре и используют как иммуноглобулины 1 и 2. Чистота выделенных белков проверялась электрофорезом в агаровом геле и иммуноэлектрофорезом, где были получены чистые пятна указанных белков при электрофорезе и четкие линии преципитации при иммуноэлектрофорезе. Полученные результаты показаны на чертежах,где- электрофоретическое изучение иммуноглобулинов 1 и 2 крупного рогатого скота 1. Нормальная сыворотка крови крупного рогатого скота 2. Иммуноглобулин 2 3. Иммуноглобулин 1 4. Промежуточная зона, содержащая смесь 1 и 2 5. Смесь чистых 1 и 2- иммуноэлектрофоретическое изучение иммуноглобулинов 1 и 2 1. Иммуноглобулин 2 2. Иммуноглобулин 1 3. Антисыворотка к белкам крупного рогатого скота- идентификация иммуноглобулинов 1 и 2 крупного рогатого скота 1. Сыворотка крови крупного рогатого скота а) антисыворотка против белков крупного рогатого скота б) антисыворотка против иммуноглобулиначеловека. Чистые препараты иммуноглобулинов могут быть использованы для различных целей и прежде всего для получения моноспецифических иммунных сывороток. Моноспецифические иммунные сыворотки нужны для качественного и количественного определения иммуноглобулинов в нормальных,патологических, лечебных, диагностических сыворотках, молозиве, молоке и других жидкостях организма. Они также могут быть использованы с профилактической и лечебной целью при гипо- и гамма-глобулинемии молодняка с/х животных. Изобретение отличается относительной простотой, быстротой и хорошей воспроизводимостью результатов. 21670 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения иммуноглобулинов 1 и 2 из сыворотки крови крупного рогатого скота,включающий выделение иммуноглобулинов из сыворотки крови с помощью органического вещества, отличающийся тем, что в качестве органического вещества используют каприловую кислоту и дополнительно выделенные иммуноглобулины подвергают препаративному электрофорезу в агаровом геле.