Способ культивирования штаммов микроскопических грибовМикроскопиялық саңырауқұлақтардың штамдарын өсіру әдісі

(51) 12 1/14 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ нефтеперерабатывающих предприятиях для очистки почв, загрязненных нефтяными отходами. Способ культивирования штаммов микроскопических грибов, включающем введение суспензии штаммов микроскопических грибов в питательную среду БИМ, в качестве которой используют следующий состав, г/л Сахароза - 20-30, 3 - 1-3, КН 2 РО 4 - 0,5-1,4 7 Н 2 О - 0,5, 4-0,01, КС 1 - 2,0-3,5, агар 20, панкреатический гидролизат рыбной муки - 3-6,242 Н 2 О - 0,2, глюкоза - 2,0-3,5,бромтимоловый синий -0,04, вода дистиллированная до 1000 мл,введение суспензии штаммов осуществляют в соотношении питательная среда суспензия штамма, равном (8-10) 1, выращивание биомассы осуществляют при температуре 29-32 С. Способ позволяет сократить сроки культивирования микроскопических грибов и выявить таксономические признаки грибов на ранней стадии развития.(72) Исаева Акмарал Умирбековна Бишимбаев Валихан Козыкеевич Макулбекова Меруерт Мейрамбековна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Южно-Казахстанский Государственный университет им. М. Ауезова Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ШТАММОВ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ГРИБОВ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и экологии, а именно к разработке способа культивирования штаммов микроскопических грибов, применяемых для биологической утилизации нефти и нефтепродуктов. Оно может быть использовано на 21215 Изобретение относится к области биотехнологии и экологии, а именно к разработке способа культивирования штаммов микроскопических грибов,применяемых для биологической утилизации нефти и нефтепродуктов. Оно может быть использовано на нефтеперерабатывающих предприятиях для очистки почв, загрязненных нефтяными отходами. Известен способ культивирования биомассы штаммов микроскопических грибов, включающий внесение суспензии штаммов микроскопических грибов в питательную среду Ролэна (Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии Учебное пособие/Под.ред. Н.П. Елинова. -М. Медицина, 1988. -с. 208), заключающийся во внесении суспензии клеток мицелия в среду,которая готовится следующим образом в 1500 мл дистиллированной воды растворяют фосфорнокислый аммоний -0,6 г сернокислый аммоний - 0,25 г углекислый калий - 0,6 г углекислый магний - 0,4 г азотнокислый аммоний 4 г сернокислый цинк (47 Н 2 О) - 0,7 г 4 0,07 г кремнекислый калий - 0,07 г винная кислота 4 г сахароза - 70 г. Способ обладает следующими существенными недостатками- Труднодоступность и дороговизна используемых реактивов (сернокислый цинк, сернокислый аммоний)- Длительность периода инкубации (более 7 суток)- способ малопригоден для промышленного выращивания биомассы штаммов вследствие трудоемкости процесса культивирования. Наиболее близким к изобретению является способ культивирования микроскопических грибов,в частности, грибана жидкой агаризованной среде Чапека (А.с. СССР 184781, Б.16, 1966 г МПК С 12 К 01/06 С 12 к),заключающийся во введении сухой конидиальной массы, мицелием или суспензией конидий грибов в питательную среду, содержащую сахарозу, 3,24, 4 72, КС 1, 4, агар, при этом питательная среда включает в г/л Сахарозу- 30 3 - 2 КН 2 РО 4-1 47 Н 2 О - 0,5 КС 1 - 0,5 4 - 0,01 Агар - 15 Вода дистиллированная до 1000 мл Грибы выращивают при температуре 26-28 С. Способ обладает следующими существенными недостатками длительный срок инкубации - более 10-14 суток, на ранней стадии (менее 10 суток) таксономические признаки разных грибов невозможно отличить. Задача изобретения - разработка способа культивирования штаммов микроскопических грибов,позволяющего культивировать как отдельные штаммы, так и их композиции, сократить время выращивания биомассы и обеспечивающего 2 возможность таксономического анализа на ранних этапах роста. Поставленная задача решается тем, что в способе культивирования штаммов микроскопических грибов, включающем введение суспензии штаммов микроскопических грибов в питательную среду,содержащую сахарозу,3,24,472, 1, О 4 агар, выращивание биомассы, согласно изобретению, в питательную среду вводят дополнительные источники питания глюкозу,2422,панкреатический гидролизат рыбной муки и краситель бромтимоловый синий, при этом питательная среда БИМ включает в г/л Сахароза - 20-30 3 - 1-3 КН 2 РО 4 - 0,5-1 472 - 0,5 4 - 0,01 1- 2,0-3,5 Агар - 20 Панкреатический гидролизат рыбной муки - 3-6 2422-0,2 Глюкоза-2,0-3,5 Бромтимоловый синий - 0,04 Вода дистиллированная до 1000 мл,введение суспензии штаммов осуществляют в соотношении питательная среда суспензия штамма,равном(8-10)1,выращивание биомассы осуществляют при температуре 29-32 С. Питательной среде указанного состава дано условное название БИМ. При этом достигается следующий технический результат- способ культивирования позволяет получать биомассу как отдельных штаммов микроскопических грибов, так и их композиций,позволяет сократить время выращивания биомассы- способ позволяет быстро выявить таксономические признаки грибов на ранней стадии развития. Существенностью отличий предлагаемого способа от прототипа является- дополнительно вводят источники питания глюкозу, панкреатический гидролизат рыбной муки и 2422, позволяющие выделить все группы микроскопических грибов из субстрата.- дополнительно введенный краситель бромтимоловый синий из-за изменения цвета среды при росте определенных групп микроскопических грибов дает возможность проведения таксономического анализа грибов на ранней стадии развития. Культивирование биомассы штаммов микроскопических грибов, представленное ниже в примерах, осуществляли в лабораторных и укрупненно лабораторных условиях с использованием инокулятов биомассы, питательной рабочей среды, чашки Петри, стеклянных емкостей. В чашки Петри вносили питательную минеральную среду и инокулят микроскопических грибов в объемном соотношении (8-10)1, при температуре 29- 32 С и рН 2,0-2,5. Через определенные промежутки времени отбирали пробы 21215 культуральной жидкости, количество клеток определяли методом предельных разведений на среде БИМ. При достижении первоначального титра вводимого инокулята процесс ферментации завершался. Пример 1. Культивировалась суспензия клеток представителя микроскопического гриба 2,0107 кл/мл и 1,0 л среды следующего состава Сахароза - 20 г 3 - 1 г КН 2 РО 4-0,5 г 472-0,5 г 4-0,01 г КС 1-2 г Панкреатический гидролизат рыбной муки - 3 г 2422-0,2 г Глюкоза - 2 г Бромтимоловый синий - 0,04 г Вода дистиллированная до 1000 мл введение суспензии штаммов осуществляют в соотношении питательная среда суспензия штамма,равном 81, выращивание осуществляют при температуре 29 С. Исходный титр микроорганизмов 2,0107 кл/мл достигается через 36 часа. Пример 2 осуществляется аналогично примеру 1. В качестве представителя микроскопического гриба используют. Исходный титр микроорганизмов 2,0107 кл/мл достигается через 36 часа, при этом представители иосветляют среду на ранних этапах развития. Пример 3. Микроскопические грибы культивировались на питательной среде БИМ следующего состава Сахароза-30 г 3 - 3 г КН 2 РО 4-1 г 472-0,5 г 4-0,01 г КС 1-3,5 г Панкреатический гидролизат рыбной муки - 6 г 2422-0,2 г Глюкоза- 3,5 г Бромтимоловый синий - 0,04 г Вода дистиллированная до 1000 мл введение суспензии штаммов осуществляют в соотношении питательная среда суспензия штамма,равном 101, выращивание осуществляют при температуре 32 С. Исходный титр микроорганизмов 4107 кл/мл достигается через 24 часа. Пример 4 осуществляется аналогично примеру 3. В качестве представителя микроскопических грибов используют. Исходный титр микроорганизмов 4107 кл/мл достигается через 24 часа, микромицеты ицвет среды не меняют. Таким образом, использование предлагаемого изобретения позволяет сократить время выращивания и дает возможность проведения таксономического анализа грибов на ранней стадии развития. Разработанный способ культивирования микроскопических грибов на среде БИМ освоен в лабораторных и укрупненно - лабораторных условиях Научно-исследовательского института промышленной экологии и биотехнологии ЮКГУ имени М. Ауезова. Он позволяет внедрить биотехнологию крупнотоннажного производства биомассы микроскопических грибов для биологической очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ культивирования штаммов микроскопических грибов, включающий введение суспензии штаммов микроскопических грибов в питательную среду, содержащую сахарозу, О 3,24, 4 2, КС 1, О 4, агар и выращивание биомассы, отличающийся тем, что в питательную среду вводят дополнительные источники питания - глюкозу, 2 О 422,панкреатический гидролизат рыбной муки и краситель-бромтимоловый синий,при этом питательная среда БИМ включает в г/л Сахароза 20-30 3 1-3 КН 2 РО 4 0,5-1 47 Н 2 О 0,5 4 0,01 КС 2,0,3,5 агар 20 панкреатический гидролизат рыбной муки 3-6 24-22 0,2 глюкоза -2,0-3,5, бромтимоловый синий 0,04 вода дистиллированная до 1000 мл введение суспензии штаммов осуществляют в соотношении питательная среда суспензия штамма,равном(8-10)1,выращивание биомассы осуществляют при температуре 29-32 С.