Штамм Mergus/KZ/Pavlodar/8/2014 вируса болезни Ньюкасла, семейства Paramixoviridae рода Avulavirus, предназначенный для приготовления отечественных иммунобиологических и профилактических препаратов против болезни Ньюкасла

(51) 12 7/00 (2006.01) 61 39/17 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА///8/2014 вируса болезни Ньюкасла, семействародагенотип 6, предназначенный для приготовления отечественных иммунобиологических препаратов против болезни Ньюкасла. Изобретение относится к области вирусологии и представляет собой новый штамм вируса болезни Ньюкасла, репродуцированный на 10 суточных куриных эмбрионах (КЭ) с биологической и гемагглютинирующей активностью 8,50 ЭИД 50/2 см 3 соответственно. Тесты на бактериальную и грибковую контаминацию показали стерильность штамма в отношении бактериальных и грибковых микроорганизмов. Полученный штамм ///8/2014 вируса болезни Ньюкасла депонирован вКоллекции микроорганизмов Республиканского государственного предприятия Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан (РГП НИИПББ КН МОН РК) под регистрационным номеромМ-33-15/и хранится в нативном виде при минус 70 С в криопробирках. Жизнеспособность штамма в стабильном состоянии поддерживается путем освежения на 10-суточных КЭ каждые 2 года.(72) Сансызбай Абылай Рысбайлы Орынбаев Мухит Бармаклы Рыстаева Рашида Аусекановна Омарова Замира Даулетызы Султанкулова Куляйсан Турлыбаевна Строчков Виталий Михайлович Керимбаев Аслан Амангелдиевич Копеев Сырым Калдыбаевич Шалгынбаев Эльдар Кайратович Мусаева Гульжан Каленовна Рябинникова Алена Игоревна Раметов Нуркуйса Мирзабекович(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский иститут проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(56)2482184 2, 20.05.20132482129 2, 20.05.2013 Репин П.И. и др. Биологические свойства изолятов вируса Ньюкаслской болезни, выделенных у голубей в Курской области // Научный журнал КубГАУ. 2013. 93(09), с.1-1083507 , 10.09.2013, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ И Изобретение относится к области вирусологии и представляет собой новый штамм вируса болезни Ньюкасла (БН), который может быть использован для производства средств диагностики и профилактики, а также изучения биологии вируса. БН является одним из опасных заболеваний птиц, способным вызывать массовые падежи,причиняя огромный вред сельскому хозяйству и нанося серьезный экономический ущерб в связи с чем внесен в список наиболее важных патогенов(группы А по МЭБ). В настоящее время БН распространена в различных регионах мира. БН вызывается РНК-содержащим парамиксовирусом птиц 1 серотипа (ПМВ-1), относящийся к родусемейства . По данным, вирус БН способен инфицировать птиц, относящихся к 241 виду, что создает значительную экологическую нишу для его сохранения в природе. ПМВ-1 обладают широким спектром вирулентности,включая асимптоматические варианты,а также низкопатогенные///8/2014 получен от клинически здорового крохаля. Представленный штамм может быть использован для получения антигена вируса БН пригодного для постановки серологических реакций, для гипериммунизации животных с целью получения вирусспецифической сыворотки,получения вакцинного препарата, в качестве контрольного при производстве вакцин, а также для изучения биологии возбудителя и выявления особенностей циркуляции изменившихся с течением эволюции вариантов вирусов БН, циркулирующих в Казахстане. Задачей настоящего изобретения является получение нового казахстанского штамма вируса болезни Ньюкасла циркулирующего в популяции диких птиц. Сущность изобретения состоит в том, что впервые в Республике Казахстан в результате вирусологических исследований в июле 2014 г. на 10-суточных куриных эмбрионах (КЭ) выделен вирус болезни Ньюкасла из трахеального смыва дикой птицы Крохаль из семейства утиные,доставленный из села 30-лет Успенского района,Павлодарской области. Из патологического материала, полученного от клинически здорового крохаля (селезенка, легкое, тонкий кишечник,головной мозг), был выделен изолят вируса болезни Ньюкасла, который получил название Штамм///8/2014. Вирус был выделен на РКЭ. Индикация вируса была проведена в РГА с эритроцитами петуха, но не агглютинировал эритроциты лошади показатели гемагглютинирующей активности составляли 1641128 ГАЕ/0,2 мл. Инфекционная активность выделенного вируса составляла 8,50 ЭИД 50/2 см 3 В настоящем изобретении представлены антигенные,биологические и молекулярногенетические свойства этого вируса. После заражения КЭ материалом от больной птицы максимальное накопление гемагглютинирующего агента с гибелью эмбрионов отмечено через 72 ч. Число пассажей к моменту паспортизации - 3. Штамм ///8/2014 обладает биологическими характеристиками, позволяющими использовать этот вирус для специфического выявления РНК вируса болезни Ньюкасла,подобного вирусу Ньюкасла с помощью ОТ-ПЦР, в конструировании рекомбинантных штаммов методом обратной генетики и разработке иммунобиологических препаратов (диагностических тест-систем, иммуноглобулина и вакцин), а также для оценки противовирусной активности различных лекарственных препаратов и новых соединений. Идентификация вируса. Первичная идентификация вируса осуществлялась методом ОТ-ПЦР с детекцией результатов в закрытой пробирке в режиме реального времени с использованием праймеров и зонда, специфичных к консервативным участкам М-гена вируса болезни Ньюкасла. Особенностями выделенного штамма являются Выделенный штамм ///8/2014 вируса болезни Ньюкасла аналогов в Республике Казахстан не имеет. Проведенный филогенетический анализ данного штамма подтверждает, что данный штамм принадлежит к 6 генотипу. Известными штаммами вируса болезни Ньюкасла являются Штамм (26 иС) вируса болезни Ньюкасла, которые используются для создания диагностических сывороток (Патент США 6719979, МПК А 61 39/295, опубл. 13.04.2004), и штамм вируса болезни Ньюкасла 1(.,-1. , 1997, .14301433, . 15, 12/13), используемый также для создания диагностических сывороток. Наиболее близкими аналогами (прототипом) является,штамм///13/2008 изолированный от клинически здорового голубя и депонированный в коллекции культур микроорганизмов Федерального государственного учреждения науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии Вектор Роспотребнадзора под регистрационным номером-513 и штамм вируса болезни Ньюкасла////2/13, изолированный от павшего голубя в курской области (Репин П.И., Чвала И.А.,Пчелкина И.П., Бахчин И.В., Дрыгин В.В. Биологические свойства изолятов вируса болезни Ньюкасла, выделенных у голубей в Курской области. КубГАУ, 2013 93(09). Данные штаммы относятся кгенотипу. Исследования показали, что представленный штамм относится к генотипу 6. Для точной диагностики заболеваний птиц указанным генотипом необходимо иметь антигенно соответствующие диагностические препараты(антигены,сыворотки). При использовании препаратов других генетических линий возможно получение ложноположительных результатов. Техническим результатом настоящего изобретения является создание отечественного штамма вируса БН,антигенно близкого современным патогенным штаммам вируса БН,которая позволяет получить высоко специфичные сыворотки для более точной диагностики вируса БН. Указанный технический результат достигается получением нового штамма вируса болезни Ньюкасла///8/2014 для приготовления средств диагностики. Предлагаемое изобретение включает штамм,совокупность существенных признаков которого обеспечивает получение следующих технических результатов 1) высокая способность продуцироваться в КЭ выделен из аллантоисной полости 10 суточных КЭ через 48 ч. при 34 С после заражения. Изолированный вирус характеризовался титром 1128 ГАЕ. Инфекционный титр в КЭ через 72 ч. составил 8,50 ЭИД 50/2 см 3 2) контроль контаминации штамм не контаминирован микрофлорой,грибами,посторонними вирусами 3) способ хранения, в нативном виде. Эмбриональную вируссодержащую аллантоисную жидкость, разлитую в криопробирки замораживают при температуре минус 70 С. Молекулярно-генетические свойства штамма Согласно филогенетическому анализу нуклеотидной последовательности -гена, данный штамм относится к генотипу . Сайт протеолитического расщепления -гена представлен последовательностью 112 117. Все полученные последовательности генов были депонированы в Международную базу данных. С помощью международной базы был определен генотип нового штамма. Патогенностъ для человека. Штаммы вируса болезни Ньюкасла не являются патогенными для человека. Патогенностъ для птицы. Штамм///8/2014 относится к умереннопатогенным вариантам вируса болезни Ньюкасла. Патогенностъ для млекопитающих. Штамм не проявляет патогенности для млекопитающих. Уникальные биологические свойства предлагаемого штамма обеспечивают технологическое преимущество по сравнению с другими, поскольку позволяют нарабатывать антиген высокого качества в большом количестве. Следует добавить, что предлагаемый штамм///8/2014 может быть использован совместно с другими известными для более детального исследования антигенных характеристик вновь выделяемых штаммов ВБН и серодиагностики сывороток крови животных. Выделенный штамм ///8/2014 вируса болезни Ньюкасла депонирован и хранится в Депозитарии возбудителей особо опасных инфекций Республиканского государственного предприятия Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан с регистрационным номером -33-15/. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм,депонирован в Депозитарии возбудителей особо опасных инфекций РГП Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности КН МОН РК под номером-33-15/,предназначенный для приготовления отечественных иммунобиологических и профилактических препаратов против болезни Ньюкасла.