Применение димера лизоцима в качестве лекарственного средства и содержащая его композиция

(51)7 61 38/46 НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(73) НИКА ХЕЛТ ПРОДАКТС ЛИМИТЕД(54) ПРИМЕНЕНИЕ ДИМЕРА ЛИЗОЦИМА В КАЧЕСТВЕ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА И СОДЕРЖАЩАЯ ЕГО КОМПОЗИЦИЯ(57) Изобретение относится к медицине. Предложено применение димера лизоцима для модуляции естественных защитных механизмов у животных или человека. Вещество ингибирует высвобождение фактора некроза опухоли, усиливает фагоцитоз, увеличивает высвобождение интерферона и интерлейкина-6.Настоящее изобретение касается применения димера лизоцима по новому назначению и составов, содержащих такой димер, а шаенно для лечения определенных дисфункций естественных защитных механизмов.Терапевтическая эффективность мономерных форм ферментов при лечении различных болезней известна уже в течение длительного времени. Лизоцим обнаружен Флемингом в 1922 юду, но до 1950 года его ферментативные функции не были выявлены. Начиная с этою времени, появляются сообщения о его различных терапевтических эффектах. Известны противовирусные, противобактериальные, противовоспалительные И ПРОТИВОГИСТЗМИННЫС СВОЙСТВЗ ЛИЗОЦИМа. ОДНЗКО ТСраПБВТИЧССКОС ПРИМСНСНИС ЛИЗОЦИ ма ограничено из-за отрицательных побочных эффектов мономерной формы.Известно, что изолированные димеризаванные формы ферментов при сохранении всех благоприятных свойств известных мономерных форм не обладают никакими отрицательными побочными эффектами при ИСПОЛЪЗОБЗНИИ В ТВРЗПСВТИЧВСКИХ дозах. Противовирусные и противобактериальные составы, включающие в качестве активного ингредиента димер лизоцима или другие димеризованные ферменты, описаны в международной патентной заявке 9/0 89/ 11294. В ней сообщается, что при тестах 11 тго димер лизоцима ингибирует пролиферацию ряда бактериальных штаммов, культивируемых на образцах культура взятых у пациентов, в концентрациях 5 - 20 мг/мл. Известно об эффективности димера при лечении инфекции парвовируса бешенства(СРУ) при оральном введении ею дважды в день в дозе 1-2 мг/кг веса тела.При клинических испытаниях, направленных на подтверждение противобактериальной и противовирусной эффективности димера лизоцима, обнаружено, что димер оказывает неожиданно сильное действие при лечении острых форм заболеваний пищеварительного и дыхательного трактов.Известно, что бактериальные токсины составляют одну группу большого количества факторов вирулентности, которыми бактерии вызывают болезни. Некоторые последние открытия в области бактериальных токсинов касаются их взаимодействия с иммунной системой хозяина. Это взаимодействие вначале приводит к иммуномодуляции, а затем к высвобождению цитокинов и других посредников, которые являются причиной большого количества физиологических нарушений, вызванных токсинами. Последнийэффект специально изучали в отношении действий эндотоксина, который играет важную роль в патогенезе грамотрицательного сепсиса (см. Ваузтоп, 13.17., Со 11 еп, 1. Вастегйа епаотохйпз апо спггепт сопсертз йп Не айадповйз апо гетгеатшепт о епоотохаешйа 1. Мед. М 1 сгоЬ 1 о 1. 1990, 31 73 - 83). Известна роль экзотоксинов в инфекциях, вызываемых Бтарппососсиз ашепз и Зтгертососсцз руовепез, признание токсического шокового синдрома стафилококка вызывает повышенный интерес к экзотоксинам, вырабатываеМЫМ ЭТИМИ ОРГИНИЗМЗМИ.Токсический шок - это серьезная болезнь,характеризующаяся высокой температурой,гипотензией, капиллярными кровотечениями,диффузной эритродермией, слизисгой эритемой почечной недостаточностью, гипокальцемией, гипоальбуминемией и шелушением при красной сыпи кожи. Многие случаи синдрома токсического шока связаны с ПРИМСНСНИСМ ВЗГИНЗЛЬНЫХ ТЗМПОНОВ В ТСЧС ние менструации, однако чаще всего синдром описывают у обоих полов в несвязанных с менструацией условиях, зачастую после хирургических процедур, когда оставляют на месте перевязочный материал (например,носовые салфетки после ринопластики или сильного кровотечения). Обнаружено, что штаммы стафилококка, взятые из вагины пациентов, перенесших синдром токсического шока (ТБЗ), продуцируют токсин 1 синдрома токсического шока (ТЗЗТ-Ю, но источником микроорганизма, вырабатывающего ТЗБТ-1,также может быть скрытая инфекция. Начальная бактеремия может иметь скрытую форму, но по прошествии недель и даже месяцев это может привести к развитию локализованных инфекций. Таким инфекциям могут сопутствовать случаи синдрома сепсиса или септического шока. Реже встречающаяся, но более тяжелая форма бактеремии может встречаться при отсутствии доступа микроорганизмов в орган или при местной инфекции, и в таких ситуациях могут наблюдаться шок, эндокардит, распространенная внутрисосудистая коагулопатия и прекращение функционирования многих органов (см. Зтеуепз, 0.1 ет а 1. Стат-роение зноен Сцггеш Орйшопз ш 1 п 1 ест 1 оп 5 Вйзеавез,1992, 5 355 - 363).Известно также, что подобные наблюдения относятся и к другой грамположительной бактерии. Например, инфекция Зтгергососсиз руозепез вызывает шок и в 30 случаев приводит к смерти. Зтгертососсцз рпепшоп 1 а 1 вызывает пневмонию, которую зарегистрируют как имеющую высокий уровень устойчи вости к пенициллину и тенденцию к развитию синдрома шока. Кроме того,пациенты, больные СПИДом, имеют более частые случаи пневмококковых инфекций,чем все население в целом.Инфекция, вызванная грамотрицательной бактерией, может также приводить к сепсису и септическому шоку. Грамотрицательная бацилла и вибрион являются источником наиболее важных энтеротоксинов. Энтеротоксин представляет собой липопотшсахаридный(ЬРБ) компонент внешней мембраны клеточных стенок грамотрицательных бактерий. Энтеротоксины прежде всего оказывают влияние на кишечный тракт и обычно вызывают понос. Наиболее частыми инфекциями, вызываемыми грамотрицательными бактериями у животных И людей, являются инфекции, вызываемые кишечной палочкой. Сопровождающее такие инфекции сильное обезвоживание может привести к смерти инфицированного индивидуума. Согласно статистике в развивающихся странах от острого поноса каждый год погибает приблизительно 3,2 миллиона детей. Приблизительно 3 О всех случаев сепсиса вызваны грамотрицательной бактерией.Из-за сепсиса инфекции, вызываемые грамположительными и грамотрицательными бактериями, представляют собой всегда серьезное заболевание во всех странах.В Соединенных Штатах ежегодно регистрируют около 400000 случаев заболеваний приблизительно с 50-ной смертностью.Сепсис и септический шок являются предметом большого количества публикаций. Известно, что в патофизиологии септического шока, эндотоксимии и в других бактериальных интоксикациях главную роль играют посредники. К ним относятся фактор некроза опухоли (ТИР), интерлейкин-1 (1 Ь-1), интерферон (ШЫ), фактор деятельности тромбоцитов и ейсозапош (производные арахидоновой кислоты) причем наиболее важный из них ТЫР, который оказывает влияние на метаболизм, а также на иммунную и фагоцитарную системы (см. Веткоттв, Р.Е. Вастегш тохйпв ш ратподепезйв оР йпгесйопв Сщтепт Оршйопв шЕпгеспопз Вйзеазез, 1991, 4 332 - 337). Показано, что погибшие от септического шока пациенты имеют более высокиеконцентрации ТМР и интерлейкина-1. Известно о повышенных уровнях ТМР - а в плазме и в крови пациентов после септического шока. А также, что токсический эффект ТМР - о может в большой степени не зависеть ни от концентраций ТМР, ни от их присутствия в организме.Исследована возможность модуляции каскада цитокинов в сепсисе и септическом шоке. Известно применение моноклональных антител против ТЫР и нейтрализация липополисахарида с помощью антилипополисахаридных средств. Однако антитела не повышают гибель бактерий. Частично благоприятные эффекты также наблюдаются при применении таких агентов, как дексаметазон и пентоксифилин, которые блокируют продукцию ТЫР макрофагами.Известно, что другие цитокины также способствуют септическому шоку. В этой ситуации вводят препараты, которые модулируют каскад цитокинов при септическом шоке и обладают способностью воздействовать на возбудителя инфекции, так как защита хозяина зависит от тех же самых цитокинов, вызванных воспалением. Поиск средств для предотвращения септического шока является главной задачей, цель которой заключается в оказании помощи большому количеству пациентов. Для этих целей существенным является управление уровнем ТЫР.Такой же критической является роль ТЫР и в другом защитном механизме лихорадке, которая является типичной физиологической реакцией на инфекцию факТИЧССКИ ДЛЯ ВСЕХ ВЫСШИХ ЖИВОТНЫХ И человека. Пять пирогенных цитокинов (интерлейкин-1, ТЫР, интерферон, интерлейкин-2 и интерлейкин-б) в настоящее время СЧИТЗЮТСЯ ОСНОВНЫМИ ЭНДОГВННЫМИ ПОСРЕДниками лихорадочной реакции, ингибирующей преоптичсские термочувствительные нейроны, которые обычно облегчают снижение высокой температуры и подавляют резкое повышение температуры в организме человека. Лихорадка и ее медиаторы могут причинять вред как органу, в который они вторгаются, так и хозяину. За последние годы накоплено значительное количество данных, подтверждающих, что интерлейкин 1, ТМ и интерлейкин-6 являются медиаторами патофизиологических нарушений при инфекциях. Поскольку эндогенные пирогены способствуют патологическому процессу при различных инфекциях, то потенциальный вред хозяину причиняют как медиаторы, так и лихорадочная реакция. Наиболее убедительное свидетельство этого получено при изучении грамотрицательного сепсиса. Имеется доказательство, что эндогенные пиротеНЫ ЯВЛЯЮТСЯ ПРОМСЖУТОЧНЫМ ЗВСНОМ ДЛЯ системных и локальных проявлений сепсиса,ВЫЗВЗННЬХХ ИНФЕКЦИЯМИ ГРЗМПОЛОЖИТСЛЬНЫХ бактерий, СПИДом, инфекциями спирохет,менингитом, респираторным дистресс-синдро 10018мом у взрослых, гнойным артритом и микобактериозом. Хотя приведенные данные противоречат наблюдению, что лихорадочная реакция непосредственно повышает сопротивление инфекции у экспериментальных животных, тем не менее сущность процесса эволюции заключается больше в сохранении видов, чем в выживании индивидуума. Очевидно, вредные системные воздействия пирогенных цитокинов на последствия подавления инфекций (например, грамотрицательного сепсиса) адаптируются как благоприятные локальные воздействия лихорадки при менее внезапных и быстро развивающихся инфекциях. Поэтому, ускоряя гибель безнадежно инфицированных индивидуумов, природа убивает индивидуумов, которые являются опасными для видов. Таким путем виды в целом могут быть защищены от эпидемических болезней (см. Маскотак, Р.А. Месьапйзш о Реуег Спггепт Орйпйопз 11 шгестйоцв Вйвеазез, 1992, 5 348-354).Фундаментальная концепция лихорадки,вызванной патогенными микроорганизмами,заключается в том, что экзогенные пирогены,независимо от их происхождения или структуры, вызывают лихорадку, индуцируя клетки хозяина (прежде всего макрофаги) вырабатывать эндогенные пирогены. Соответственно могут быть эффективны терапевтические методы, основанные на применении антиэндогенных антител пирогена и антагонистов эндогенных рецепторов пирогена. Одна из возможностей заключается в блокировании биосинтеза ТМР. Исследования на животных показывают, что в каскаде реакции на инфекционную болезнь ТЫР может быть синтезирован прежде П.-1 и других цитокинов. Известно, что ингибирование биосинтеза ТМР также означает и прекращение биосинтеза 1 Ь-1. Но ингибирование биосинтеза ТЫР также означает, что прекращаются вредные воздействия некоторых внезапных и безнадежных инфекционных болезней.ТЫР также известен как один из посредников воспалительных процессов. Во многих случаях воспаление - это первая стадия болезни с естественным течением,сопровождающаяся развитием септического шока. В случаях, когда нарушена целостность тканей, например, при ранах, восприимчивых к инфекции, ранениях, в особенности брюшных ранах (перитоните),болезнях желудочно-кишечного тракта, таких как острые инфекции, сопровождающие аппендицит, острых бактериальных и вирусных инфекциях, наблюдаемых при послег риппозной пневмонии, опухолевых болезнях,особенно в фазе разложения опухолей, и т.п., воспаление является первым симптомом увеличения синтеза ТЫР. Таким образом управление уровнем ТЫР является желательным при лечении таких инфекционных болезней.Еще более значительной является роль ТЫР непосредственно при заболевании СПИДом. СПИД характеризуется сильно выраженным иммунодефицитом. Главный показатель СПИДа - это уменьшение числа лимфоцитов СВ 4. Число клеток, инфицированных ВИЧ, этиологическим возбудителем СПИДа, относительно невелико (51 из 100 - 1000) даже в моноядерных клетках периферической крови (РВМС) пациентов,больных СПИДом. В то время, как инфицированы в основном лимфоциты С 1 Э 4 эти клетки не являются исключительными мишенями для поражения ВИЧ. Недавно получены доказательства того, что спектр клеток - мишеней для ВИЧ может быть весьма широк. Явные различия наблюдаются в последствиях действия инфекционной болезни ВИЧ на моноциты (макрофаги) по сравнению с Т-лимфоцитами. В то время,как Т-лимфоциты имеют тенденцию разрушаться, моноциты (макрофаги) устойчивы к длительному заболеванию. Поэтому моноциты (макрофаги) могут сохранять ВИЧ внутри себя подобно другим клеткам организма. Тип реакции моноцита (макрофага) на инфекцию ВИЧ может влиять на установление скрытого состояния инфекции в хозяине причем эта реакция может также приводить к патогенным нарушениям, вызываемым растворимыми факторами, синтезируемыми инфицированными клетками (см. Тазшгишй Ыатвиуаша е а 1. Сутошпез апд НЦ/ штестйоп 13 АПЭЗ а Тишог Ыесгозйв Расгог айвеазе АШЗ 1991, 5 1405-1417). Многие ученые сообщают, что линии Т-клеток человека,инфицированные вирусом человеческого Тклеточного лейкоза (НТЬУ-1) высоко чувствительны к инфекции ВИЧ и вызывают сильное действие, относящееся к заболеванию клетки, вместе с повышенной репликацией ВИЧ. Кроме того, инфицированные ВИЧ клетки чувствительны к повреждениям этих клеток супернатантом. Анализ титра вируса после лечения этим супернатантом показывает, что фактор, синтезируемый Т-клетками (МТ-З), Човышает репликацию ВИЧ. Фактор идентифицирован и обозначен как ТМР - о и это открытие совпадает с сообщениями о том, что Т-клетки (МТ 2) синтезируют ТЫР - В. То же самое действиенаблюдается при использовании ТЫР - а. ТЫР - 13 и ТЫР - а выборочно уничтожают инфицированные ВИЧ клетки и повышают репликацию ВИЧ. Известно, что тшнии Т-клеток, инфицированных ВИЧ, а также свежие изолированные клетки линии РВМС от инфицированных ВИЧ индивидуумов дают на ТЫР реакцию, приводящую к повышенным уровням ТЫР. Можно предположить,что такое же самое повышение экспрессии ВИЧ должно происходить йп жги/о. Фактически, повышающее действие ТЫР может быть нейтрализовано антителами против ТМР. Повышение репликации ВИЧ после лечения ТЫР - а и ТЫР - 13 доходит до величины около 10 (см. Уакагпаш, А. е а 1. Тишог песгозйз тастогз (ад/З) йпапсеа Ьу Н 1 У-1 11 регйрпета 1 Ыоос шопосе 11 п 1 аг се 11 з ротептате Упав герЦсатйоп АШБ 1990, 421 - 427). Имеются также подтверждения, что различные цитокины могут воздействовать на репликацию ВИЧ. При применении очищенных моноядерных фагоцитов из нормальной периферийной крови в течение нескольких часов после экспозиции вируса ВИЧ наблюдают индукцию как Цгб, так и ТЫР - а. Такую индукцию цитокина также наблюдают при использовании ВИЧ, инактивированного высокой температурой. На основании многих наблюдений, а также сообщений Тозшгишй Матзиуаша ет а 1. (ор. сйт.) сделан вывод, что СПИД представляет собой болезнь, вызываемую цитокином или ТЫР. При СПИДе среди множества цитокинов основными молекулами, повышающими репликацию ВИЧ, и индуцирующими их собственную экспрессию, а также экспрессшо других цитокинов, являются ТЫР В и ТМР- а. Доказано, что ТЫ - а стимулирует высвобождение других цитокинов в клетках различных типов и поэтому является ключевым цитокином каскада цитокинов в первом защитном механизме. предположено, что многие симптомы,связанные со СПИДом, можно объяснить высвобождением цитокинов, имеющих различные биологические функции. Повышение синтеза двух хорошо известных пирогенов,таких как П-1 и ТЫР - а, может объяснить наличие лихорадки, наблюдаемой у пациентов, больных СПИДом. ТЫР может участвовать в кахексии, связанной со СПИДом. Как ТЫ - а, так и ТЫР - В работают как иммуномодуляторы и молекулы-эффекторы при цитотоксичности, вызываемой моноцитом-медиатором. Кроме того, ТЫР отвечает за активацию иммунного ответа и может непосредственно уничтожать инфицированные ВИЧ клетки, повышая таким образомрепликацию ВИЧ. Предложен также иммунологический механизм для объяснения истощения клеток СВ 4 Т при СПИДе(Натзиуаша ет а 1., ор. см). Известно, что саркома Карозй, относящаяся к СПИДу,также вызвана ТЫР - а. ТЫР может быть получен из кератиноцитов с помощью физиологических стимулов типа ультрафиолетового света, который способствует индукции Ц-6 в коже и развитию саркомы Карозг при СПИДе. В испытаниях 111 что ТМР а может повреждать Миелин и олигодендроциты к тому же обнаружено, что некоторые линии клеток, полученные из глиомы,чувствительны к антипролиферативному действию ТЫР - а. Можно сделать вывод, что дисфункция центральной нервной системы у больных СПИДом является результатом действия ТЫР - а. Некоторые сообщения указывают, что уровни ТМР - а и Ц.-1 в сыворотках существенно повышаются с развитием СПИДа и АКС (комплекс болезней,связанных со СПИДом), причем они попадают в диапазон нормальных контрольных значений при испытаниях сыворотки бессимптомных носителей ВИЧ. Согласно Матзиуаша ет а 1. (ор. сп.) СПИД - это болезнь, вызываемая как ТМР, так и ВИЧ. Это показывает, что установление контроля над индукцией ТМ может привести к осуществлению эффективной терапии для пациентов, больных СПИДом.Следующие основные открытия позволяют решить вышеописанные проблемы и найти новые терапевтические применения димера лизоцима при вышеупомянутых патологических состояниях1. Димер лизоцима ингибирует синтез ТЫЕ.2. Димер лизоцима стимулирует синтез РЫ- а.3. Димер лизоцима повышает фагоцитарную активность.Соответственно целью настоящего изобретения является создание фармацевтических составов, терапевтически пригодных для лечения болезней, связанных с чрезмерно высокими уровнями описанного выше ТЫРДругой целью настоящего изобретения является создание фармацевтических составов, пригодных для профилактики болезней,связанных с чрезмерно высокими уровнями описанного выше ТЫР.Еще одной целью настоящею изобретения является создание фармацевтических составов и гигиенических изделий, пригодных для терапии и предотвращения болезней, связан