Способ доставки биоматериала при пастереллезе животных для исследования методом полимеразно-цепной реакции

(51) 61 39/102 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ и бактериальная ДНК. Проведение ПЦР анализа основано на манипуляциях с бактериальной ДНК. Экстрагированная геномная ДНК должна быть целостной, нефрагментированной. При кратковременном кипячении разрушаются ферменты слюны, носовой слизи и клеточные оболочки бактериальная ДНК выделяется из клетки в свободном виде, добавление этилового спирта консервирует ДНК и подавляет рост посторонней микрофлоры, что продлевает срок доставки материала для исследования на пастереллез до 24 часов. Задачей изобретения является разработка способа доставки истечений из носовой и ротовой полостей при пастереллезе животных для исследования методом ПЦР, который позволяет сохранить ДНК возбудителя более длительное время. Способ доставки биоматериала при пастереллезе животных, включающий взятие и срочную доставку свежих истечений из носовой и ротовой полостей,отличающийся тем, что взятые для исследования истечения подвергают кратковременному кипячению в течении 10 минут на водяной бане,затем добавляют 96 этиловый спирт в соотношении 14 и проводят исследование методом полимеразноцепной реакции.(72) Чужебаева Гульжаган Джамбуловна Кайыпбай Беркжан Балапанлы(54) СПОСОБ ДОСТАВКИ БИОМАТЕРИАЛА ПРИ ПАСТЕРЕЛЛЕЗЕ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ(57) Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано при молекулярно - биологических, в том числе диагностических исследованиях методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Технический результат,обеспечиваемый изобретением выражается в разработке способа доставки ротовых и носовых истечений при пастереллезе животных для исследования методом ПЦР, который позволяет продлить срок доставки истечений. В слюне и носовой слизи содержатся ферменты,выполняющие бактериолитические функции лизоцим, протеазы, пептидазы, щелочная и кислая фосфатазы, РНКазы. Вместе с бактерией лизируется Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано при молекулярно - биологических, в том числе диагностических исследованиях методом полимеразноцепной реакции (ПЦР). Известны способы доставки патологического материала от павших животных, описанные в следующих изданиях Орлов Ф.М. Ветеринарная лабораторная практика.- М., Колос, 1963, с. 201 Антонов В.Я. Лабораторные исследования в ветеринарии. - М Колос, 1971, с. 199. Способы доставки материала для прижизненной диагностики пастереллеза описаны в общих чертах Покровский В.И. Руководство по зоонозам. Ленинград, Медицина, 1983, с. 191, где материалом для исследования служат истечения из носовой и ротовой полостей в неконсервированном виде. Истечения берут стерильным ватным тампоном, увлажненным 25 водным раствором глицерина. Недостатком этого способа является то, что ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) возбудителя в биоматериале сохраняется в течение 3-4 часов, а при более длительной транспортировке в лабораторию материал для исследования на ПЦР не пригоден. В методических указаниях по проведению ПЦР исследований приводятся общие принципы доставки биоматериала. Материал для исследования должен быть свежим и доставлен в лабораторию в кратчайшие сроки- в течение 2-3 часов, что не всегда бывает возможным. В Республике Казахстан методики по забору,транспортировке патологического материала для исследования методом ПЦР не разработаны. В методических рекомендациях Забор,транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики (Москва, 2003), способ доставки носовых и ротовых истечений для исследования на пастереллез также не описан. Задачей изобретения является разработка способа доставки истечений из носовой и ротовой полостей для исследования методом ПЦР, который позволяет сохранить ДНК возбудителя более длительное время. Техническим результатом является устранение лизирующего действия ферментов слюны и носовой слизи на ДНК, продление срока доставки истечений для исследования методом ПЦР. При кратковременном кипячении разрушаются ферменты слюны и клеточные оболочки, бактериальная ДНК выделяется из клетки в свободном виде, добавление этилового спирта консервирует ДНК и подавляет рост посторонней микрофлоры, что продлевает срок доставки материала для исследования на пастереллез до 24 часов. Аналогов нет, так как методы доставки истечений из ротовой и носовой полостей для исследования на пастереллез методом ПЦР в Казахстане и России еще не разработаны. Методы,описанные для бактериологических исследований, не отвечают требованиям проведения молекулярно - биологических исследований, к которым относится ПЦР. Сведения,подтверждающие возможность осуществления изобретения, относящегося к способу истечения из носовой и ротовой полостей берутся стерильным ватным тампоном, увлажненным 25 водным раствором глицерина. Далее ватные тампоны помещаются в стерильные пробирки с 5 мл стерильного 0,9 физиологического раствора. Каждую пробирку осторожно встряхивают, чтобы смешать содержимое. Пробирки с физиологическим раствором помещают в кипящую водяную баню и выдерживают 10 минут. После остывания в каждую пробирку добавляют 20 мл 96 этилового спирта. Затем пробирка при температуре не выше 25 С доставляется в лабораторию для исследования. Сущность способа заключается в следующем в слюне и носовой слизи содержатся ферменты,выполняющие бактериолитические функции лизоцим,протеазы, пептидазы, щелочная и кислая фосфатазы,РНКазы. Вместе с бактерией лизируется и бактериальная ДНК. Для проведения ПЦР анализа необходимо наличие целостной, не фрагментированной ДНК. Получить чистую геномную ДНК можно только одним способом выделением ядер и освобождением из них ДНК. Для этого известными способами разрушают клеточные мембраны и освобождаются от клеточных белков. Их суть заключается в экстракции (извлечении) ДНК из биопрепарата и удалении или нейтрализации посторонних примесей для получения препарата ДНК с чистотой, пригодной для постановки ПЦР. Кратковременное кипячение на водяной бане устраняет разрушающее действие ферментов слюны и носовой слизи, способствует выделению ДНК,дальнейшая очистка ДНК от белков и примесей должна проводиться в лаборатории непосредственно перед исследованием. Выделенная ДНК консервируется этиловым спиртом. Преимущество данного способа заключается в том, что увеличивается срок доставки материала для исследования до 24 часов при комнатной температуре. Таким образом,технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в том, что при кратковременном кипячении лизируются ферменты слюны и носовой слизи и выделяется ДНК, которая консервируется добавлением этилового спирта в соотношении 14, что продлевает срок доставки истечений для исследования на пастереллез до 24 часов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ доставки биоматериала при пастереллезе животных, включающий взятие и срочную доставку свежих истечений из носовой и ротовой полостей,отличающийся тем, что взятые для исследования истечения подвергают кратковременному кипячению в течение 10 минут на водяной бане, затем добавляют 96 этиловый спирт в соотношении 14 и проводят исследование методом полимеразно-цепной реакции.