Способ доставки гноя при мыте лошадей для исследования методом полимеразно-цепной реакции

(51) 01 1/28 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ и др.), антитела (опсонины, преципитины,агглютинины), а также другие вещества, способные растворять бактерии, и нейтрализовать токсины. Вместе с бактерией лизируется и бактериальная ДНК. Проведение ПЦР анализа основано на манипуляциях с бактериальной ДНК. Выделенная геномная ДНК должна быть целостной,нефрагментированной, так как она служит матрицей для синтеза специфического продукта. Задачей изобретения является разработка способа доставки гноя при мыте лошадей для исследования методом ПЦР, который предотвращает быстрое разрушение ДНК возбудителя. Способ доставки гноя для исследования при мыте лошадей, включающий взятие и срочную доставку свежего гноя из невскрывшихся абсцессов лимфатических узлов в неконсервированном виде,отличающийся тем, что при разведении 0,85 физиологическим раствором в соотношении 11,взятого для исследования гноя, снижается концентрация гнойной сыворотки, что уменьшает лизирующее действие гноя на бактериальную ДНК,увеличивает срок доставки гноя для ПЦР исследования до 24 часов.(54) СПОСОБ ДОСТАВКИ ГНОЯ ПРИ МЫТЕ ЛОШАДЕЙ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНО-ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ(57) Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано при молекулярно- биологических, в том числе диагностических исследованиях методом полимеразной цепной реакции(ПЦР). Технический результат,обеспечиваемый изобретением выражается в разработке способа доставки гноя при мыте лошадей для исследования методом ПЦР, который предотвращает быстрое разрушение ДНК возбудителя. Гнойный экссудат состоит из двух частей гнойных телец и гнойной сыворотки. Гнойные тельца представляют собой лейкоциты в состоянии дегенерации и некроза, которые распадаясь,освобождают ферменты (протеазу, амилазу, липазу 22197 Изобретение относится к области ветеринарной медицины и может быть использовано при молекулярно - биологических, в том числе диагностических исследованиях методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР). Известен общий способ доставки гноя из абсцессов подчелюстных лимфоузлов и истечений из носовой полости для бактериологических исследований, описанный в следующих изданиях Антонов В.Я. Лабораторные исследования в ветеринарии. -М. Колос, 1971, с.199 Юров К.П. Инфекционные болезни лошадей. - М., Грааль, 2000. с.122 Орлов Ф.М. Инфекционные и инвазионные болезни лошадей. М. Колос, 1976, с.146, где материалом для исследования служит гной из невскрывшихся абсцессов лимфатических узлов в неконсервированном виде. Гной берут стерильно при помощи шприца после обработки места прокола. Если абсцессы уже вскрылись, то гной берут из носового истечения и вскрывшихся абсцессов ватным тампоном, увлажненным 25 водным раствором глицерина. Недостатком этого способа является то, что ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) возбудителя в гное сохраняется в течение 3-4 часов, а при более длительной транспортировке в лабораторию материал для исследования на ПЦР не пригоден. Для ПЦР исследования способы доставки патологического материала разработаны в общих чертах. Главным условием предложенных в рекомендации способов является свежесть материала, быстрота доставки материала для исследования, что не всегда бывает возможным. В Республике Казахстан методики по забору,транспортировке патологического материала для исследования методом ПЦР не разработаны. В методических рекомендациях Забор,транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики (Москва, 2003), способ доставки гноя для исследования также не описан. Задачей изобретения является разработка способа доставки гноя при мыте лошадей для исследования методом ПЦР, который предотвращает быстрое разрушение ДНК возбудителя. Техническим результатом является снижение концентрации гнойной сыворотки, продление срока доставки гноя для исследования методом ПЦР. При разбавлении гноя 0,85 физиологическим раствором в соотношении 1 1 происходит снижение концентрации гнойной сыворотки,процесс разрушения бактериальной ДНК идет медленнее,что продлевает срок доставки гноя для исследования на мыт до 24 часов. Аналогов нет, так как методы доставки гноя для исследования на мыт методом ПЦР в Казахстане и России еще не разработаны. Методы, описанные для бактериологических исследований, не отвечают требованиям проведения молекулярно - биологических исследований, к которым относится ПЦР. Сведения,подтверждающие возможность осуществления изобретения, относящегося к способу. Место прокола дезинфицируется 70 спиртом,стерильным одноразовым шприцем производится 2 прокол абсцесса лимфатического узла, гнойное содержимое набирается в шприц. Далее гной из шприца выдавливается в стерильную градуированную пробирку, закрытую стерильной завинчивающейся крышкой нужный объем стерильного физиологического раствора,соответствующий 11 объему гноя в пробирке,отмеривается с помощью стерильного щприца и добавляется в пробирку содержащую гной, взятый для исследования. Пробирку закрываем крышкой,осторожно встряхиваем,чтобы смешать содержимое. Затем пробирка при температуре не выше 25 С доставляется в лабораторию для исследования. Сущность способа заключается в следующем гнойный экссудат состоит из двух частей гнойных телец и гнойной сыворотки. Гнойные тельца представляют собой лейкоциты в состоянии дегенерации и некроза, которые распадаясь,освобождают ферменты (протеазу, амилазу, липазу и др.), антитела (опсонины, преципитины,агглютинины), а также другие вещества, способные растворять бактерии, и нейтрализовать токсины. Вместе с бактерией лизируется и бактериальная ДНК. Для проведения ПЦР анализа необходимо выделить ДНК. Для этого используют различные методики в зависимости от поставленных задач. Их суть заключается в экстракции (извлечении) ДНК из биопрепарата и удалении или нейтрализации посторонних примесей для получения препарата ДНК с чистотой, пригодной для постановки ПЦР. Получить чистую геномную ДНК можно только одним способом выделением ядер и освобождением из них ДНК. Для этого разрушают плазматическую и ядерную мембраны и освобождаются от клеточных белков. Основным критерием в методах выделения ДНК является то, что нуклеиновая кислота должна быть максимально очищенной от примесей клеточных ДНК и белков. Выделенная геномная ДНК должна быть нефрагментированной,так как она служит матрицей для синтеза специфического продукта. Для того чтобы снизить разрушающее действие гноя на бактериальную ДНК, взятый для исследования гной разбавляется физиологическим раствором в соотношении 11. Преимущество данного способа заключается в том, что увеличивается срок доставки материала для исследования до 24 часов при комнатной температуре. Таким образом,технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в том,что при снижении концентрации гнойной сыворотки процесс разрушения бактериальной ДНК идет медленнее, что продлевает срок доставки гноя для исследования на мыт до 24 часов. 22197 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ доставки гноя для исследования при мыте лошадей, включающий взятие и срочную доставку свежего гноя из невскрывшихся абсцессов лимфатических узлов в неконсервированном виде,отличающийся тем, что взятый для исследования гной разбавляют с 0,85 физиологическим раствором в соотношении 11.