Способ получения антифаговой сыворотки

(51) 61 35/16 (2006.01) 61 39/395 (2006.01) 61 10/00 (2006.01) 61 31/04 (2006.01) 01 33/49 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ высокоактивной антифаговой иммунной сыворотки для приготовления антительного эритроцитарного диагностикума при индикации бруцеллезного фага в реакции непрямой гемагглютинации. Способ получения антифаговой иммунной сыворотки, включающий подкожное введение кроликам в область нижней части каждой лапки бактериофага,бактериофаг предварительно концентрируют высокомолекулярным полиэтиленгликолем 6000, устанавливают предельный титр бактериофага не менее 10-50, затем полученный препарат вводят подкожно в дозе 2,0 см 3 в задние лапки кролика двукратно с интервалом 3 суток,после чего через 15 суток животных иммунизируют повторно путем внутривенного введения бактериофага в дозе 2,0 см 3, по истечении 15 суток после начала иммунизации кроликов обескровливают, отделяют сыворотку и получают целевой продукт.(72) Барамова Шолпан Аузаровна Султанов Ахметжан Акиевич Оспанов Ержан Калиолдинович Адамбаева Акмарал Ауелхановна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Габрилович И.М. Практическое пособие по бактериофагии. Минск, Вышейше школа, 1968,с. 57-58(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИФАГОВОЙ СЫВОРОТКИ(57) Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано для получения антифаговой иммунной сыворотки. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении двукратно в дозе 2,0 см 3 с интервалом 3 суток, после чего через 15 суток животных иммунизируют повторно путем внутривенного введения бактериофага в дозе 2,0 см 3, по истечении 15 суток сначала иммунизации кроликов обескровливают, отделяют сыворотку и получают целевой продукт. По окончании цикла иммунизации проводят пробное взятие из краевой вены уха. Полученную сыворотку исследуют в реакции нейтрализации. Для этого сыворотку разводят в той же среде, что и фаг. После чего к 0,9 см 3 добавляют 0,1 см 3 фага с титром не менее 10-6. Затем смесь фаг-сыворотка инкубируют при 37 С, при этом через разные промежутки времени из данной смеси берут пробы и вносят в 9,9 см 3 охлажденной среды для прекращения реакции нейтрализации. Параллельно инкубируют, разводят и титруют контрольную пробу,содержащую 0,1 см 3 фага и 0,9 см 3 среды. Полученные суспензии разводят в 10 раз и 1,0 см 3 каждого разведения засевают методом агаровых слоев. Подсчитывают количество негативных колоний фага до и после контакта с сывороткой. При низкой активности сыворотки проводят повторный цикл, но при этом бактериофаг вводят внутривенно 1-2 раза. Результаты реакции нейтрализации предельных титров антифаговых антител в иммунных сыворотках полученных по предложенному и известному способам представлены в таблице 1. Как видно из данных таблицы 1, опытная и контрольная антифаговые сыворотки в разведении от 1 40 до 1 640 полностью нейтрализуют фаговые корпускулы. Лизис индикаторного штамма 19 специфическим фагом отмечаем, начиная с разведения опытной и контрольной антифаговых сывороток 1 1280, при этом видим отдельные негативные колонии. В разведении сывороток 12560 наблюдаем полный лизис культуры бруцелл. Таким образом, заявляемый способ имеет значительные преимущества перед известным по трудоемкости, себестоимости при достижении высоких титров готового препарата, при этом упрощается технология получения антифаговых иммунных сывороток, в сравнении с ранее известным. Таблица 1 Результаты титрации антифаговых иммунных сывороток, полученных после иммунизации бруцеллезным фагом Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано для получения антифаговой иммунной сыворотки. Известен способ получения антифаговой иммунной сыворотки, включающий подкожное введение кроликам в область нижней части каждой лапки бактериофага(Габрилович И.М. Практическое пособие по бактериофагии. - Минск Вышейше школа, 1968. - с.5758.). Недостатком указанного способа получения антифаговой иммунной сыворотки является сложность иммунизации животных и большой расход антигена. Задачей изобретения является разработка упрощенного способа получения антифаговой иммунной сыворотки для реакции непрямой гемагглютинации,обеспечивающий эффективность целевого продукта, а также снижение стоимости готового препарата при достижении достаточно высоких значений его чувствительности. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении высокоактивной антифаговой иммунной сыворотки для приготовления антительного эритроцитарного диагностикума при индикации бруцеллезного фага в реакции непрямой гемагглютинации. Способ получения антифаговой иммунной сыворотки, включающий подкожное введение кроликам в область нижней части каждой лапки бактериофага,бактериофаг предварительно концентрируют высокомолекулярным полиэтилен-гликолем 6000,устанавливают предельный титр бактериофага не менее 10-50, затем полученный препарат вводят подкожно в дозе 2,0 см 3 в задние лапки кролика двукратно с интервалом 3 суток, после чего через 15 суток животных иммунизируют повторно путем внутривенного введения бактериофага в дозе 2,0 см 3, по истечении 15 суток после начала иммунизации кроликов обескровливают,отделяют сыворотку и получают целевой продукт. Способ осуществляют следующим образом. Пример. Кроликам в задние лапки вводят подкожно бактериофаг с предельным титром не менее 10-50 концентрированный полиэтилен-гликолем-6000, Наименование Разведение антифаговых сывороток сывороток 140 180 1160 1320 1640 11280 12560 Примечание -наличие лизиса, - отсутствие лизиса,отдельные негативные колонки. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения антифаговой сыворотки,включающий подкожное введение кроликам в область нижней части каждой лапки бактериофага,отличающийся тем, что бактериофаг предваритель-но концентрируют высокомолекулярным полиэтиленгликолем 6000, устанавливают предельный титр бактериофага не менее 10-50, затем полученный препарат вводят подкожно в дозе 2,0 см 3 в задние лапки кролика двукратно с интервалом 3 суток, после чего через 15 суток животных иммунизируют повторно путем внутривенного введения бактериофага в дозе 2,0 см 3, по истечении 15 суток после начала иммунизации кроликов обескровливают, отделяют сыворотку и получают целевой продукт.