Способ культивирования рекомбинантного штамма А/АстанаRG/5:3/2009

(51) 61 39/145 (2010.01) 01 33/53 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Объектом изобретения является способ культивирования рекомбинантного штамма в развивающихся куриных эмбрионах для наработки биомассы вируса гриппа птиц, используемой в приготовлении диагностических и профилактических препаратов. В способе культивирования используется рекомбинантный штамм//53/2009 вируса гриппа, который является безвредным,реактогенным и иммуногенным. Культивирование штаммов вируса гриппа птиц проводили в КЭ, инкубировали при температуре 34,01 С в течение 72 час и сбор вирусной биомассы путем охлаждения при 2-4 С в течение 16-18 ч. Наработанная указанным способом вирусная суспензия имеет высокие титры и пригодна для использования при приготовлении диагностических и профилактических препаратов.(72) Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Абдураимов Ергали Орынбасарович Кыдырбаев Жайлаубай Кыдырбаевич Рыскельдинова Шолпан Жамбырбаевна Ершебулов Закир Джаппарович Табынов Кайсар Казыбаевич Жугунисов Куандык Даулетбаевич(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ШТАММА А/АСТАНА/53/2009 Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и вирусологии,может использоваться для культивирования и наработки биомассы вируса гриппа птиц в развивающихся куриных эмбрионах. Известен способ культивирования вируса в куриных эмбрионах (Ярыгина Е.И., Хашин О.В.,Кузнецов Д.П. Доклад РАСХН.-2004.- 6.-. 48-50 журнал Ветеринария, Реферативный журнал,4,2005 год, с. 1135). В данном эксперименте использовались штаммы вируса гриппа А птицы ГП 1-А/утка/Альберта/35/76, подтип 11 и ГП 9 А/индюк/Висконсин/1/66,подтип 92. Недостатком данного изобретения является то, что в эксперименте использовались вирулентные штаммы. Задачей данного изобретения является разработка параметров культивирования вируса гриппа /51 в развивающихся куриных эмбрионах. Техническим результатом предлагаемого изобретения является разработка способа культивирования вируса гриппа /51 в куриных эмбрионах для наработки активной вирусной биомассы,пригодной для изготовления диагностических наборов и профилактических препаратов для здравоохранения. Результаты,полученные в ходе выполнения проекта, будут внедрены в разрабатываемую технологию изготовления вакцинных препаратов. Отличием от вышеуказанного способа является то что, в нашем способе культивирования используется рекомбинантный штамм//53/2009 вируса гриппа, полученный методом обратной генетики из высокопатогенного штамма-донора ///6/05 (51) и высокорепродуктивного штаммадонора / Культивирование штаммов вируса гриппа птиц проводили в КЭ, инфицируя их в аллантоисную полость в объеме 0,2 мл. Инфицированные КЭ инкубировали при температуре 34,01 ос и относительной влажности воздуха 655 в течение 72 час. Овоскопирование инфицированных КЭ проводили через 24 часа после заражения. КЭ по истечении 72 ч инкубации помещали на охлаждение при температуре 2-4 ос в течение 16-18 ч. Пипеткой отбирали аллантоисную жидкость (АЖ) в стерильные флаконы. Для определения биологической (инфекционной) активности вируса используют 9-11 сут куриные эмбрионы. Десятикратным разведенным вирусом от 10-1 до 10-9 на стерильном физиологическом растворе заражают эмбрионы в аллантоисную полость по 0,2 см 3. Инкубируют при температуре 34,01 С с относительной влажностью воздуха 6065 в течение 72 час. По окончании эмбрионы охлаждают при температуре 2-6 С в течение 14-16 час. Затем каждый эмбрион проверяют в качественной реакции гемагглютинации. Титр вируса рассчитывают по Риду и Менчу (1938). Приготовленная по данному способу вирусная суспензия имеет биологическую активность не ниже 7,00 19 ЭИД 50/см 3. Предлагаемый способ культивирования рекомендован для наработки вирусной биомассы при приготовлении диагностических и профилактических препаратов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ культивирования рекомбинантного штамма А/Астана/53/2009,включающий культивирование в куриных эмбрионах,инкубирование, отличающийся тем, что проводят инкубирование при температуре 33,00,5 С,относительной влажности воздуха 655 в течение 72 ч. и охлаждении при температуре 2-4 С в течение 16-18 ч.