Штамм А/золотистая щурка/Чокпак/7а/07 (H5N1) М-5-09/Д вируса гриппа птиц семейства Orthomyxoviridae рода Influenzavirus типа А подтипа H5N1 предназначенный для научно-исследовательских работ

(51) 61 39/145 (2010.01) 12 7/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ культуре клеток ФЭК при температуре 350,5 С и 370,5 С, соответственно. Проведена адаптация штамма на 12-суточных РКЭ и в культуре клеток ФЭК путем проведения четырех последовательных пассажей. Биологическая и гемагглютинирующая активность вируса на РКЭ составила 8,000,25 ЭИД 50/см 3 и 1256, соответственно, а в культуре клеток ФЭК эти показатели соответствовали 9,000,25 ТЦД 50/см 3 и 1128, соответственно. При интраназальном ведении штамма в дозе 106 ЭИД 50 уткам и гусям, никаких характерных клинических признаков болезни не обнаружено. Штамм относится к апатогенному варианту. Интравенозный индекс патогенности штамма на 42-суточных цыплятах составил 0,00. У инфицированных птиц низкопатогенным штаммом А/золотистая щурка/Чокпак/7 а/07 (51) ВГП после 14 дней заражение титр сыворотки крови в серологических реакциях составляет в РТГА 140-160 и в ИФА 1801160. Выделенный штамм А/золотистая щурка/Чокпак/7 а/07 (51) ВГП депонирован в Депозитарии особо опасных инфекции Научноисследовательского института проблем биологической безопасности (НИИПББ) Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан под регистрационным номером М-5-09/Д и хранится при температуре минус 40-70 С в лиофилизированном виде в ампулах ШПБ-6 под вакуумом с защитной средой(6,5 пептона) в соотношении 11, имеющий рН 7,27,6. Жизнеспособность штамма в стабильном состоянии поддерживается путем ежегодного освежения на 12-суточных РКЭ и культуре клеток ФЭК.(72) Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Азанбекова Молдир Абдилдаевна Кыдырбаев Жайлаубай Кыдырбаевич Мамбеталиев Муратбай Рыскельдинова Шолпан Жанбырбаевна Булатов Ербол Акенович Табынов Кайрат Казыбаевич Табынов Кайсар Казыбаевич Копоченя Алексей Анатольевич Абсатова Жаркынай Серикбаевна Абсеитова Зульфия Сериковна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(51) М-5-09/Д ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ СЕМЕЙСТВА РОДАТИПА А ПОДТИПА 51 ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ НАУЧНОИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИХ РАБОТ(57) Получен высокорепродуктивный штамм А/золотистая щурка/Чокпак/233/07 (Н 51)М-5-09/Д вируса гриппа птиц(ВГП),семействародатипа А подтипа 51,предназначенный для научноисследовательских работ. Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и представляет собой новый штамм ВГП,репродуцированный на 12-суточных РКЭ и в Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и представляет собой новый штамм вируса гриппа птиц /51,используемый для научно-исследовательских работ. Известен штамм / //45072-2/06(51) вируса гриппа птиц (ВГП), выделенный в Северной Америке, репродуцируемый на 9 суточных развивающихся куриных эмбрионах(РКЭ). Биологическая и гемагглютинирующая активность вируса при температуре культивирования 370,5 С и относительной влажности воздуха 65-70 достигает до 6,00 ЭИД 50/см 3 и 164,соответственно. Путем секвенирования гена гемагглютинина штамма(51) ВГП,подтвержден низкопатогенный фенотип вируса. При интраназальном ведении штамма ///45072-2/06 (51) ВГП в дозе 106 ЭИД 50 домашним видам птиц, таким как куры (4 недельного возраста), утки (2-недельного возраста) и индюки (3-недельного возраста), никаких характерных клинических признаков болезни не отмечено. Заболевание проходило в легкой форме и на 7 сутки после инфицирования у всех испытанных видов птиц обнаружен антиген в трахеальных и клоачных смывах в титре не превышающий 4,50 ЭИД 50/см 3. Интравенозный индекс патогенности (ИВИП) штамма ///45072-2/06 (51) ВГП на цыплятах был равен 0,00. ( .., 2007, сайт /////.01368-07.1.) Приведенный выше аналог является наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков и признан в качестве прототипа. Недостаток штамма / //45072-2/06(51) выделенного в Северной Америке состоит в низкой биологической и гемагглютинирующей активности, которая составляет 6,00 ЭИД 50/см 3 и 164, соответственно. Задачей настоящего изобретения являлось получение штамма ВГП, обладающего высокой репродуктивной активностью в системе культивирования и низкой патогенностью для птиц,пригодного для научно-исследовательских работ. Предлагаемое изобретение включает штамм,совокупность существенных признаков которого обеспечивает получение следующих технических результатов. Штамм А/золотистая щурка/Чокпак/7 а/07 (51) ВГП выделен в 2007 г. на 12-суточных РКЭ из пробы клоачного смыва золотистой щурки, доставленной из орнитологической станции Чокпак Жуалинского района Жамбылской области Республики Казахстан. Штамм принадлежит к семейству , роду ,типу А, подтипу 51. Штамм А/золотистая щурка/Чокпак/7 а/07 (51) активно репродуцируется в РКЭ и культуре клеток фибробластов эмбриона кур (ФЭК) при температуре 350,5 С и 370,5 С, соответственно. Проведена адаптация штамма на 12-суточных РКЭ и в культуре клеток ФЭК путем последовательных пассажей. Биологическая и гемагглютинирующая активность вируса на четвертом пассаже на РКЭ составила 8,000,25 ЭИД 50/см и 1256, соответственно, а в культуре клеток ФЭК эти показатели соответствовали 9,000,25 ТЦД 50/см 3 и 1128,соответственно. Штамм А/золотистая щурка/Чокпак/7 а/07(51) относится к апатогенному варианту, так как его интравенозный индекс патогенности на 42-суточных цыплятах составил 0,00 и при интраназальном ведении домашним птицам, таким как утки и гуси, в дозе 106 ЭИД 50 не вызывал характерных клинических признаков болезни. При секвенировании установлена нуклеотидная последовательность гена гемагглютинина штамма, которая подтверждает низкопатогенный фенотип вируса. У инфицированных птиц низкопатогенным штаммом А/золотистая щурка/Чокпак/7 а/07 (51) ВГП после 14 дней заражение титр сыворотки крови в серологических реакциях составляет в РТГА 140160 и в ИФА 180-1160. Выделенный штамм А/золотистая щурка/Чокпак/7 а/07 (51) ВГП депонирован в Депозитарии особо опасных инфекции Научноисследовательского института проблем биологической безопасности (НИИПББ) Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан под регистрационным номером М-5-09/Д и хранится при температуре минус 40-70 С в лиофилизированном виде в ампулах ШПБ-6 под вакуумом с защитной средой(6,5 пептона) в соотношении 11, имеющий рН 7,27,6. Жизнеспособность штамма в стабильном состоянии поддерживается путем ежегодного освежения на 12-суточных РКЭ и культуре клеток ФЭК. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм А/золотистая щурка/Чокпак/7 а/07 вируса гриппа птиц семействародатипа А подтипа 51,депонированный в коллекции НИИПББ КН МОН РК подМ-5-09/Д, предназначенный для научноисследовательских работ.