Способ подготовки Т- розеткообразующих клеток крови для их светового и электронномикроскопического исследования на цитологических мазках – блоках.

НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО ПРИ КАБИНЕТЕ МИНИСТРОВ(531) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ Т-РОЗЕТКООБРАЗУЮЩИХ КЛЕТОК КРОВИ ДЛЯ ИХ СВЕТ ОВО ГО И ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКОГ О СЦель изобретения повышение точности выделения специализированных иммунных Т-розеткообразующик клеток.Поставленная цель достигается тем. что при осуществлении способа определения клеток крови на цитологических мазках-блоках при световом и электронномикроскопи ческом исследовании. включающего приготовление мазка. выбор клеток подлежащих электронномикроскопическому изучению. фиксацию. обезвоживание. заключение материала в эпоксидную смолу. специализированные иммунные Т-розеткообразующие клетки наносят на площадку пирамиды блоке. заточенного для ультратонкой резки. и обезвоживание материала осуществляют до выбора клеток подлежащих электронномикроскопическому исследованию.(57) Использование в области иммунологии. гематологии и цитологии. Сущность изобретения готовят мазки и затем проводят выбор Т-роэеткообразуюцдих клеток. подлежащих электронномикроскопическому изучению,фиксируют их. обезвоживает. заключают материал в эпоксидную смолу. причем мазки готовят на площадке пирамиды блока. заточенного для получения ультратонких срезов.а Фиксацию и обезвоживание клеток осуще ствляют до выбора клеток. подлежащих электронномикроскопическому изучению. Способ позволяет повысить точность исследования клеток, 1 ил.Предлагаемый способ осуществляютследующим образомИммунные Т-розеткообразующие клетки Т-системы иммунитета. полученные после завершения реакции розеткообразования фиксируют в пробирке в 1-ном растворе глютаральдегида на 0.1 М фосфатном буфере(рН 7,27.4) при 2025 С в течение 15 мин. затем. после кратковременной промывки в фосфатном буфере. в 1-ном растворе четырехокиси осмия на том же буфере на 10 мин. После промывки в буфере проводят дегидра тацию и инфильтрацию клеток в 70 спирте втечение 5 мин по 2 смены. в абсолютном ацетоне на 5 мин. затем клетки осаждают центрифугированием при 1000 об мин в течение 3 мин (при объеме взвеси клеток 0.2 смз). Надосадочный слой удаляют. Осадок клеток ресуспендиЪуют в 01341105 см абсолютногоЗЦЕТОНЗ. МЗЗКИ ГОТОВЯТ на площадке пира- имиды блока. заточенного для ультратонкой резки. Полученные мазки Т-клеток просмат 96901) (э) 21 (61)ривают в светооптическом микроскопе посредством объектива с увеличением в 20 раз. блоки для этого устанавливают на предметных стеклах ваертикальном положении. В таком положении Т-розетки достаточно освещены вьется проходящим. параллельно оси блока.При отсутствии интересующейклеткщплоидадку пирамиды блока очищаютОТ клеток ЗТНЫМ ТЗМПОНОМ И на ОЧИЩЕННУЮ ПОВЕРХНОСТЬ ВНОВЬ НЭНОСЯТ порцию КЛВТОК.Процесс повторяют до нахождения нужнойклетки. Когда интересующая клетка найдена. то на поверхность площадки наносят каплю эпоксидной смолы с катализатором. Полимериэацию материала производят при 60 С в течение 48 ч. Площадки для мазков готовят на блоках ранее использованных для электронномикроскопических исследований.Таким образом. предлагаемый способ позволяет с высокой точностью выделять специализированные иммунные Т-розеткообразующие клетки для получения высококачественных срезов в исследовательскойНа чертеже показана Т-розеткообразующая клетка, расположенная на площадке блока-шаблона. заточенного для ультратонкой резки. .Эритроцит 1 лимфоцит 2. Контакты между лимфоцитам и эритроцитом 3.Способ подготовки Т-розеткообразующих клеток для их светового и электронномикроскопического исследования на цитологических мазках-блоках. включающий приготовление мазка. выбор клеток. подлежащих изучению. их фиксацию. обезвоживание. нанесение на площадку пирамиды блока и заключения в эпоксидную смолу с последующим микроскопическим исследованием. о т л и ч а ю щ и я с я тем. что. с целью повышения точности исследования. мазки готовят на площадке пирамиды блока. заточенного для получения ультратонких срезов. при этом фиксацию и обезвоживание клеток проводят до выбора клеток. подлежащих изучению.Ответственная за выпуск Фаизова Э.З.