Опиоидные пептиды каппа-рецепторов

(51)7 07 5/10, 61 38/07, 61 25/04 ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Созданы пептиды, которые проявляют высокую селективность к каппа опиоидному рецептору(КОР) и большую продолжительность периферического действия без значительного проникновения в головной мозг, которые представляют собой после довательности четырех -изомерных аминокислотных остатков, имеющих С-конец, который является моно- или дизамещенным амидом. Типичные соединения, которые обладают сродством к КОР, которое по меньшей мере в 1000 раз больше, чем их сродство к мю опиоидному рецептору, и 50, не превышающей 0,5 мг/кг, включают в себя Н, морфолинил, 4-пиколил, , -РеРеА-тиоморфолинил, 2, ,НРеРееОморфолинил, 44 пиколил,циклопропил,НАа-(2 Т)3,4 Срае-А-морфолинил,Реморфолинил,, Реморфолинил,пиперазинил и Н. 11088 Данное изобретение в общем относится к синтетическим опиоидным пептидам, в особенности к опиоидным пептидам, которые являются высокоселективными агонистами каппа рецепторов и, точнее,к таким агонистам, которые (а) не проникают в головной мозг и (б) проявляют длительную антиноцицептивную активность. Предпосылки изобретения Каппа опиоидные рецепторы (КОР) присутствуют в головном мозге, в спинном мозге, на центральных и периферических окончаниях и телах клеток первичных сенсорных афферентов (соматических и висцеральных), а также на иммунных клетках. Молекулы, которые активируют КОР, обычно называют каппа агонистами. Активация КОР, которые расположены в головном мозге, как показано, вызывает аналгетический эффект. Это открытие привело к попыткам разработать непептидные каппа агонисты, проникающие в головной мозг, для применения в качестве оригинальных аналгетиков, которые были бы лишены нежелательных побочных эффектов (запора, угнетения дыхания, зависимости и привыкания) морфиновых аналогов, которые действуют на мю опиоидные рецепторы (МОР). Аналгетическая активность так же, как и отсутствие мю-опиоид подобных побочных эффектов этого класса соединений, установлена как у животных, так и у людей. Однако разработка системных каппа агонистов была прекращена, так как было показано, что они также вызывают специфические побочные эффекты, такие, как диурез,седативный эффект и дисфория, опосредованные каппа рецепторами, расположенными в головном мозге. Кроме супраспинальных КОР, КОР, расположенные либо на периферии, либо в спинном мозге,также могут вызывать аналгезию. Однако ни периферические, ни спинномозговые КОР не были связаны с какими-либо побочными эффектами системных каппа агонистов. Поэтому, поскольку возможно создание опиоидных агонистов каппа рецепторов,которые не проникают в головной мозг (либо после периферического, либо после спонномозгового введения), то было бы возможно получить и безвредные оригинальные аналгетики. Каппа агонисты вызывают периферическую антиноцицепцию на моделях кишечной гипералгезии,а также гипералгезии ободочной кишки, индуцированных слабым и местным воспалением, а синдром раздраженной толстой кишки (СРТК), который включает в себя усиленную висцеральную боль,обусловленную висцеральной гиперчувствительностью, возможно связанной с местным воспалением,также представляет собой мишень для периферического каппа агониста. Кроме желудочно-кишечного тракта, другие внутренние органы, показывающие патологическое состояние, которое вовлекает активацию и/или сенсибилизацию (то есть местное воспаление) первичных сенсорных афферентов, как полагают, также считаются подходящими мишенями для такого опиоида каппа рецептора. К тому же,каппа агонисты препятствуют нейрогенному воспа 2 лению в соматических тканях посредством ингибирования высвобождения вещества Р из первичных сенсорных афферентов и вместе с тем, как известно,действуют на иммунную систему и оказывают преимущественно ингибирующее влияние на иммунные клетки. Пептиды, которые не будут проникать в головной мозг, которые проявляют высокое сродство к КОР, по сравнению с МОР, которые обладают высокой активностью и эффективностью и большой продолжительностью действия, особенно требуются. В патенте США 5,610,271 раскрыты тетрапептиды, содержащие четыре -изомерных аминокислотных остатка, которые связываются с КОР, но такие пептиды не проявляют всех желаемых свойств, изложенных выше. Краткое изложение сущности изобретения Открыт род пептидов, которые проявляют высокую селективность к КОР и большую продолжительность действияи которые не демонстрируют значительного проникновения в головной мозг. Эти пептиды включают в себя последовательность из четырех -изомерных аминокислот,имеющих С-конец, который представляет собой либо моно-, либо дизамещенный амид. Эти соединения имеют следующую общую формулу Н-Хаа 1-Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4 - замещенный амид,где 1 представляет собой -, , -, - или -Аа(циклопентил или тиенил), причем А представляет собой Н, 2, ,или СН 3 Хаа 2 представляет собой -, 1, -2, - или -Тр, причем А представляет собой А или 3,42 Хаа 3 представляет собой ,-, -, -, -, - или-Аа(циклопентил) причем В представляет собой Н или СМе Хаа 4 представляет собой -, -,-, -, -, -(2), -(2), -,-, -, - или -. Предпочтительные амиды включают в себя этиламид, морфолид, тиоморфолид, 4-пиколиламид,пиперазид, пропиламид, циклопропиламид, диэтиламид и замещенный бензиламид. Согласно одному аспекту изобретения предложен амидный синтетический опиоидный пептид или его фармацевтически приемлемая соль, имеющий сродство к каппа опиоидному рецептору, которое,по меньшей мере, в 1000 раз превышает его сродство к мю опиоидному рецептору, и проявляющий большую продолжительность действия, причем пептид имеет формулу-(циклопентил) причем В представляет собой Н или СМе Хаа 4 представляет собой -, -,-, -, -, -(2), -(2), -,-, -, - или - ипредставляет 11088 собой 12, морфолинил, тиоморфолинил,(С)пиперидинил, пиперазинил, 4-моно- или 4,4 дизамещенный пиперазинил, или -лизил, причем 1 представляет собой низший алкил, замещенный низший алкил, бензил, замещенный бензил, аминоциклогексил, 2-тиазолил, 2-пиколил, 3-пиколил, 4 пиколил, -(ациламино)-полиметиленовую или поли(оксиэтиленовую) группу, и 2 представляет собой Н или низший алкил, причем С представляет собой Н, 4-гидрокси или 4-оксо. Согласно другому аспекту изобретения предложено применение этих соединений при лечении пациентов - людей, страдающих от висцеральной боли и тому подобного, подвижности мочевого пузыря или тому подобного, воспалительного кишечного заболевания (ВКЗ) или аутоиммунных заболеваний,а также при аналогичном лечении млекопитающих кроме человека. Краткое описание предпочтительных воплощений Номенклатура, использованная для характеристики пептидов, представляет собой номенклатуру,уточненную Шредером и Лубке (.// . . 1965), где, согласно традиционному представлению, -конец оказывается слева, а С-конец справа. Там, где аминокислотный остаток имеет изомерные формы, представлена именно -изомерная форма аминокислоты, если точно не указано иначе. Как указано выше, согласно изобретению, предложены пептиды, которые селективны в отношении КОР и проявляют не только сильное сродство к КОР, но и большую продолжительность биологической активности. Эти каппа селективные опиоидные пептиды имеют, по меньшей мере, в 1000 раз большее сродство к связыванию с КОР,чем с МОР, многие соединения имеют, по меньшей мере, в 10000 раз большее сродство, а некоторые соединения проявляют в 20000 и более раз большее сродство. Однако для многих показаний важно, чтобы вместе с такой высокой селективностью каппа агонисты проявляли как отсутствие значительного проникновения в головной мозг, так и пролонгированную продолжительность антиноцицептивной активности. Поэтому, кроме вышеупомянутой селективности, предпочтительные соединения не проявляют значительного проникновения в головной мозг, несмотря на сохранение значительной активности, по меньшей мере, приблизительно в течение одного часа, более предпочтительные соединения остаются значительно активными, по меньшей мере, приблизительно в течение 2 часов, а самые предпочтительные соединения проявляют такую значительную активность в течение 3 часов или дольше. В этом документе использованы изложенные ниже сокращения. Под - подразумевают норлейцин,- представляет собой гомолейцин. -На представляет собой гомоаргинин,- представляет собой нораргинин, который на один углерод короче, чем-А. Под - подразумевают -изомер алани на, который замещен нафтилом по -углероду. Предпочтительно, используют -2, то есть присоединение к нафталину идет по положению-2 на циклической структуре, однако также может быть использован -1. - и - использованы для обозначения хлор и фтор, соответственно, причем -4, -2, -3 и -4 являются предпочтительными. - обозначает нитро, а -Мра используют для обозначения метил. -3,4 обозначает 3,4-дихлор-. - представляет собой -Аа(циклопентил).-,где положение-4 замещено СН 2 НС(Н)Н 2. Под - подразумевают 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновую кислоту. Впредставляет собой тиенильную группу, которая предпочтительно связывается с аланином в своем положении-2, хотя 3-тиенил представляет собой эквивалент. Под у и , соответственно, подразумевают изопропилу и изопропилО, где аминогруппа боковой цепи алкилирована изопропилом. Под низшим алкилом подразумевают 1-6, и низший алкил включает в себя циклоалкил, предпочтительными являются С 1-С 4, включающие в себя циклопропил и циклобутил. , , Р, , , Р ииспользуют для обозначения метила, этила,пропила, изопропила, бутила, пентила и бензила. Под Сур подразумевают циклопропил, а подподразумевают циклобутил. Хотя предпочтительна связь с концом алкильной цепи, связь может быть расположена и в ином положении в цепи, например 3-пентил, который также может быть назван этилпропилом.представляет собой 6-амино-гексил,(2)6-2. 4 используют для обозначения 4 аминоциклогексила,используют для обозначения гидроксиэтила, то есть -СН 2 СН 2 Н. Замещенный бензил включает в себя 4 и 4, которые представляют собой 4-нитробензил и 4-аминобензил, а Ае используют для обозначения 4-(2 амино-2-карбоксиэтил)бензила, то есть Под 2-, 3- и 4-пиколилом (2, 3 и 4) подразумевают метилпиридиновые группы, причем присоединение идет через метилен в положение-2,-3 или -4. Под Мо подразумевают морфолинил, то есть Подподразумевают пиперидинил (пиперидил), а под 4-НуР и ОхР подразумевают 4 гидроксипиперидин-1-ил и 4-оксо-пиперидин-1-ил. Подподразумевают пиперазинил. Еср представляет собой 4-этилкарбамоил-пиперазин-1-ил Рср представляет собой 4-фенилкарбамоилпиперазин-1 ил. Четвертичные аммониевые группировки, такие,как 4,4-диметилпиперазин-1-илили другие дизамещения низшими алкилами, также могут быть использованы. Под 2 подразумевают 2-тиазолил,то есть Подподразумевают -лизил, где аминогруппа боковой цепи -лизина связана амидной связью с С-концом. Как указано выше, 1 может представлять собой(ациламино)полиметиленовую группу или поли(оксиэтиленовую) группу, такую, как Аао, Аоои .представляет собой 8(ацетиламино)-3,6-диоксаокт-1-ил, то есть 22-2222 с. Аоо представляет собой 8-амино-3,6-диоксаокт-1-ил, то есть 22-2222-2.представляет собой 6-(-гидрооротиламино)-гекс-1-ил, то есть (СН 2)6 Н-(-гидрооротил) -гидрооротовая кислота представляет собой 425-2-СООН.представляет собой 6-(-глюкониламино)-гексил, то есть (2)64-2.представляет собой 6-(-глюкониламино)-3,6-диоксаокт-1 ил, то есть 222222-4-2.- или -, замещенный в положении-1,является предпочтительным. Фенильное кольцо может быть замещено по положению-2, -3 и/или -4,и замещения хлором или фтором по положению-2 или -4 обычно являются предпочтительными. Углеродный атом также может быть метилирован. Могут быть использованы также и другие эквивалентные остатки, которые подобны -, и эти остатки включают в себя -Аа(тиенил), Аа(циклопентил), -Ту и -. Остаток в положении-2 также предпочтительно представляет собой- или замещенный -, причем такие замещения включают в себя заместитель предпочтительно по углероду фенильного кольца в положении-4 или в положении-3 и -4. В качестве альтернативы может быть использован -аланин, замещенный нафтилом, а также - и -. Положение-3 предпочтительно занято таким остатком, как -,-, -, -, - или - однако также могут быть использованы(циклопентил) и -. - (который может быть замещен диэтилом) и - (который может быть алкилирован по его дельта-аминогруппе, например изопропилом) обычно предпочтительны для положения-4, однако могут быть использованы 4 и другие эквивалентные остатки, такие, как(который также может быть алкилирован по его эпсилон-аминогруппе) и -На (который может быть замещен диэтилом). Кроме того, также могут быть использованы -, -, -4 и -. Хотя можно было бы предположить, что достаточная продолжительность биологического действия происходит из-за использования последовательности 4 -изомерных аминокислот, неожиданно было обнаружено, что продолжительность действия была довольно короткой для незамещенного амида и что большую продолжительность действия получали только при введении в С-конец замещенного амида. Монозамещения могут быть представлены в форме этила, метила, пропила, циклопропила и пиколила, а также других эквивалентных остатков,таких, как гидроксиэтил, тиазолил, аминоциклогексил, бензил и замещенный бензил. Обычно для монозамещенных амидов предпочтительны заместители низший алкил или пиколил. Альтернативой монозамещенному амиду является диалкильное замещение, например диэтиламино, однако такой дизамещенный С-конец предпочтительно занят морфолинильной, тиоморфолинильной или пиперидинильной группировкой, причем последняя представляет собой незамещенную или замещенную 4 гидроксигруппой или 4-оксогруппой. Пиперазинильная или 4-моно- или 4,4-дизамещенная пиперазинильная группировка также может быть использована, как и -лизил. Обнаружено, что связывание обычно представляет собой свойство аминокислотной последовательности тетрапептида, и предпочтительно, чтобы селективные опиоидные пептиды каппа рецепторов должны проявлять такое сродство к связыванию с каппа рецепторами, чтобы его К равнялась приблизительно 2 нМ или менее. Большая продолжительность действия, которая, как полагают, представляет собой прежде всего свойство структуры амида, присоединенного к С-концу, может быть эффективно исследована путем антиноцицептивного количественного анализа, описанного ниже, наиболее предпочтительные пептиды проявляют значительную биологическую активность в течение двух или трех часов и не оказывают значительного эффекта на головной мозг. Предпочтительный подрод изложенного выше рода опиоидных пептидов имеет формулу Н-Хаа 1-Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4-,где Хаа 1 представляет собой - (незамещенный или замещенный СМе, 2, 4 или 4) или, ,или 4-пиколил,2 представляет собой Н или . Дополнительный предпочтительный подрод. каппа опиоидных пептидов имеет формулу, причем 1 представляет собой , , , Сурили 4,2 представляет собойили . Другой предпочтительный подрод каппа опиоидных пептидов имеет формулу-представляет собой 1, Мо, ,или , причем 1 представляет собой , Р или 4. Еще один предпочтительный подрод каппа опиоидных пептидов имеет формулу-1-2-3-4-,где 1 представляет собой -, -4, -2 или -(2) 2 представляет собой -,-1, -2 или -, причем А представляет собой 3,42 или 4 С Хаа 3 представляет собойили - Хаа 4 представляет собой -,или -представляет собой 1, Мо ,или 2, причем 1 представляет собой , Р, Сур, 4,или . Установлено, что вышеупомянутые род и подроды опиоидных пептидов имеют большую продолжительность антиноцицептивной активностикак следствие введения замещенного амида в Сконец аминокислотного остатка в положении-4. Это особенное неожиданное свойство делает такие пептиды особенно ценными, поскольку некоторые из них остаются активнымив течение периода трех часов и дольше. Некоторые тетрапептиды,имеющие вышеупомянутую последовательность, но имеющие простой С-концевой амид, также демонстрируют высокую селективность к КОР, по сравнению с МОР, однако они обычно проявляют только кратковременную продолжительность действия. По меньшей мере, предполагают, что такие опиоидные пептиды будут проявлять длительный период продолжительности действия, если они синтезированы таким образом, чтобы иметь на С-конце замещенный амид, такой, как морфолид. Впоследствии было обнаружено, что когда первичный амид тетрапептида демонстрирует высокое и селективное связывание с КОР, соответствующее замещенным амидам, таким, как, например, этиламид и морфолид,тогда синтезированный тетрапептид будет проявлять антиноцицептивную активность в течение дли тельного периода, измеряемого часами, то есть, по меньшей мере, в течение 1 часа, без значительного проникновения в головной мозг. Хотя предпочтительные аминокислотные последовательности изложены в вышеупомянутых формулах, тем, кто имеет обычную квалификацию в области химии пептидов, должно быть понятно, что один или более чем один из перечисленных аминокислотных остатков может быть замещен консервативной аминокислотной заменой, например, одна основная аминокислота на другую, или одна гидрофобная аминокислота на другую, например - на-. Подобным образом также могут быть модифицированы некоторые из остатков, как общеизвестно в данной области, например - (как указано ранее) может быть модифицирован путем введения галогена или нитрогруппы обычно в положение-3 или положение-4, или в оба положения, или может быть метилирован по -углероду. Считают, что такие модификации дают эквивалентные опиоидные пептиды каппа рецепторов. Пептиды могут быть синтезированы любым подходящим способом, таким, как способы исключительно твердофазные или классические способы присоединения в растворе, или альтернативно, частично твердофазными способами или способами конденсации фрагментов. Например, способы исключительно твердофазного синтеза пептидов, , , 1984, и иллюстрированы примерами,раскрытыми в патенте США 4,105,603. Способ синтеза конденсацией фрагментов проиллюстрирован в патенте США 3,972,859, а другие доступные синтезы проиллюстрированы примерами, раскрытыми в патентах США 3,842,067 и 3,862,925. Классический синтез присоединением в растворе подробно описан Боданзским и др. (.) в, 2 .,,, 1976. Общим для химического синтеза по типу закрепления является защита любой лабильной боковой цепи закрепляемой аминокислоты, а также обычно защита -аминогруппы, чтобы присоединение происходило по карбоксильной группе отдельной аминокислоты или дипептида или трипептида, которые присоединяются. Такие защитные группы являются известными в данной области, а трет-бутилоксикарбонил (БОК), бензилоксикарбонили 9 флуоренилметоксикарбонил (ФМОК) часто используют в качестве предпочтительных защитных групп-аминогруппы в ТФСП или в классическом синтезе в растворе, хотя существует большое множество других защитных групп -аминогруппы, которые могут быть использованы в качестве альтернативы. При использовании ТФСП С-концевой аминокислотный остаток закрепляют на твердом полимерном носителе,таком,как-СН 2 полистирольный носитель,О-СН 2-бензилполиамидный полимерный носитель,-бензгидриламиновый (БГА) полимерный носитель или -Н-пара-метилбензгидриламиновый (МБГА) 5 11088 полимерный носитель. Когда требуется незамещенный амид, часто предпочтительно использование БГА и МБГА полимеров, поскольку расщепление непосредственно дает С-концевой амид. Когда требуется -метиламид, таковой может быть образован из -метилБГА полимера. Другие монозамещенные амиды могут быть синтезированы по методике, изложенной У. Конрейхом и др. (..) в. .., 25 414-420, 1985, а также в патенте США 4,701,499. Пептиды, имеющие на С-конце дизамещенные амиды, такие, как морфолинил или -пиперидинил, получают предпочтительно путем классического синтеза в растворе или путем конденсации фрагментов в растворе. Когда эти тетрапептиды синтезированы, их легко очищают, используя известную в данной области серию способов очистки коротких пептидов, например, высокоэффективную жидкостную хроматографию с обращенной фазой (ОФ-ВЭЖХ) или другие подходящие способы. Такая очистка подробно описана Дж. Ривье и др. (..) в ., 228 303-328, 1984, и С. Миллером и Дж. Ривье (С.. ) в 40 265-317 (1996), а конкретные примеры такой очистки после твердофазного синтеза или тому подобного представлены в патенте США 5,098,995. Ряд количественных анализов может быть использован, чтобы проверить, проявляют ли тетрапептиды высокую селективность к КОР, сильную антиноцицептивную биологическую активность,большую продолжительность биологической активностии отсутствие проникновения в головной мозг. Количественные анализы рецепторов являются известными в данной области, и недавно были клонированы КОР мышей, крыс, морских свинок и человека. За исключением КОР морских свинок, клонированные КОР очень похожи, все они содержат приблизительно 380 аминокислот. Аминокислотная последовательность КОР человека имеет 93,9 и 93,4 гомологию с КОР крыс и КОР мышей, соответственно. КОР человека, напротив, значительно отличаются от МОР человека и от дельта опиоидных рецепторов человека (ДОР), имея только 60,2 и 59,1 идентичность аминокислотной последовательности, соответственно. КОР так же, как и другие опиоидные рецепторы, являются классическими, семь раз пересекающими мембрану рецепторами, сопряженными с -белками . Эти клонированные рецепторы легко позволяют отыскать конкретный пептид-кандидат, например, для определения селективности скрининг может быть проведен как по КОР, так и по МОР. КОР, МОР и ДОР человека стабильно экспрессировали в линии мышиных раковых клеток, имеющей происхождение от гиппокампальной нейробластомы (ГН. 9. 10), и пригодны для использования в скрининге. Также существует ряд вполне приемлемых тестов, которые большей частью стали стандартными для определения антиноцицептивной активности опиоидного соединения. В этих тестах обычно используют мышей, и эти тесты включают в себя тест 6, 224 7-12 (1983) описан ряд таких тестов для опиоидных соединений. Сродство к связыванию относится к силе взаимодействия между лигандом и рецептором. Для того, чтобы продемонстрировать сродство к связыванию с опиоидными рецепторами, пептиды по изобретению оценивали, используя исследования конкурентного связывания. Эти исследования выполняли, используя клонированные каппа (КОР) и мю(МОР) опиоидные рецепторы человека, экспрессированные в стабильно трансформированных клеточных линиях (ГН. 9. 10, имеющей происхождение от мышиной гиппокампальной нейробластомы). В этих исследованиях тестируемые соединения (немеченые или холодные лиганды) используют в возрастающих концентрациях для замещения специфического связывания меченного радиоактивным изотопом лиганда, который обладает высоким сродством и селективностью к исследуемому рецептору. В исследованиях КОР и МОР человека в качестве лигандов использовали 369,593 и 3-, соответственно. Оба лиганда имеются в продаже .представляет собой сокращение для -2, МеРе 4, -ол 5-энкефалина. Сродство радиолигандов определяют по концентрации радиолиганда (К), которая дает специфическое связывание, составляющее половину от максимального, в исследованиях насыщенности. К связывания 3-69,593 с КОР человека и 3- с МОР человека составляют приблизительно 0,3 нМ и 3,0 нМ,соответственно. Сродство тестируемого соединения(немеченого или холодного лиганда) определяют в исследованиях конкурентного связывания путем расчета ингибирующей константы (К) по следующей формуле 50,1( /) где 50 - концентрация холодного лиганда, которая ингибирует 50 специфического связывания радиолиганда- концентрация свободного лиганда К - сродство радиолиганда, определенное в исследованиях насыщенности. При выполнении этих количественных анализов в конкретных условиях с относительно низкими концентрациями рецептора , рассчитанная для тестируемого соединения, значительно приближается к его константе диссоциации К, которая представляет собой концентрацию лиганда, необходимую для оккупации половины (50 ) сайтов связывания. Низкое значение К, лежащее в интервале наномолярного или субнаномолярного, как полагают, идентифицирует лиганд с высоким сродством в опиоидном поле. Предпочтительные аналоги имеютдля КОР, равную приблизительно 2 нМ или менее, тогда как более предпочтительные аналоги имеют , равную приблизительно 1 нМ или менее. 11088 Поскольку КОР широко распределены по всему организму, опиоидные пептиды каппа рецепторов будут оказывать существенный эффект при модуляции многих периферических функций, и если они являются высокоселективными в отношении КОР, они будут иметь минимальные побочные эффекты и должны быть физиологически полезными лекарствами. Эти количественные анализы связывания с использованием КОР и МОР просты в выполнении и могут быть легко проведены с предварительно идентифицированными или синтезированными пептидами, чтобы определить, являются ли такие пептиды селективными в отношении КОР и имеют ли высокое сродство. Такие количественные анализы можно выполнить с помощью разнообразных методов, известных каждому специалисту в данной области, а подробный пример количественного анализа связывания общего типа изложен М. Перрином и др. ( .,.) в , 118 1171-1179,1986. Кроме того, данное изобретение описано примерами, которые следуют далее. Однако такие примеры не должны быть истолкованы как ограничивающие как в отношении сущности, так и в отношении объема данного изобретения, которые раскрыты в формуле изобретения. Пример 1 Пептид, имеющий формулу , синтезируют подходящим способом, как известно из области синтеза пептидов. Например, трипептид (защитная группа -аминогруппы)-РеРе(защитная группа карбоксила), вначале синтезируют, используя классическую химию в растворе. Например, трипептид можно получить путем растворения в диметилформамиде (ДМФА) и добавления -этилморфолина (Э) или тому подобного для установления рН. Затем этот раствор объединяют с раствором защищенного БОК в ДМФА, содержащем Э. К этой реакционной смеси добавляют активирующий или сочетающий агент, такой,как бензотриазол-1-ил-окси-трис-(диметиламино)фосфонийгексафторфосфат (БОФ) или смесь ,диизопропилкарбодиимида (ДИК) и -гидроксибензотиазола (ГОБТ). После окончания реакции среду упаривают досуха и затем продукт очищают подходящим способом и перекристаллизовывают. БОК-защитную группу удаляют трифторуксусной кислотой (ТФУ), а дипептид вновь растворяют в ДМФА. Добавляют раствор защищенного БОК-, растворенного в ДМФА с Э. Реакцию повторяют, используя БОФ, как описано выше, для получения трипептида, который после того, как раствор упарили досуха, очищают и перекристаллизовывают. Продукт, который получен в результате,представляет собой БОКОСН 3. Затем этот метиловый эфир подходящим способом превращают в свободную кислоту, например, путем растворения в смеси диоксана или диметилсульфоксида (ДМСО) и воды и добавления гидроксида натрия. После окончания реакции отделение, очистка и перекристаллизация дают трипептид БО. Этот трипептид растворяют в ДМФА, содержащем , и подвергают взаимодействию с, вновь используя БОФ в качестве сочетающего агента. В качестве альтернативы, если необходимо, метиловый эфир трипептида можно превратить в азид путем обработки 80 -ным раствором гидрата гидразина для образования гидразида, который выделяют, а затем обрабатывают нитритом натрия и неорганической кислотой в ДМФА. Азид немедленно подвергают взаимодействию с в растворе ДМФА, содержащем триэтиламин. После окончания реакции смесь упаривают досуха, затем очищают подходящим способом и перекристаллизовывают. Затем удаляют защиту с -конца и боковой цепи - и вновь проводят очистку и перекристаллизацию с образованием желаемого этиламида тетрапептида (пептид 1). На основании ВЭЖХ с обращенной фазой с использованием двух различных подвижных фаз градиент ацетонитрила в воде, содержащей 0,1 -ную трифторуксусную кислоту, и градиент ацетонитрила в триэтиламинфосфатном буфере, рН 7, а также капиллярного электрофореза с применением кварцевого капилляра и фосфатного буфера, рН 2,5, пептид считают гомогенным. Чистота пептида, оцененная этими методами, составила более 98 . Массспектрометрия при использовании ионизации путем электроразбрызгивания и анализ методом ионной ловушки показали псевдомолекулярный ион МН с / 609,4, что согласуется с рассчитанной массой/ 609,5 для этого тетрапептида. Фрагментационный анализ псевдомолекулярного иона показал серию ионов с отношениями /, согласующимися с последовательностью аминокислот, ожидаемой для полученной структуры. Количественные анализы связывания с клетками,экспрессирующими КОР и МОР человека, выполняют, как упоминалось выше. Сродство тестируемого пептида к КОР и МОР человека, стабильно экспрессируемым в клетках мышиной гиппокампальной нейробластомы (ГН. 9.10), определяют путем конкурентного замещения 369-593-для КОР человека или 3- для МОР человека, как описано выше. Данные, по меньшей мере, 3 экспериментов объединяют и рассчитывают значения ингибирующей константы диссоциации К (в пределах 95 доверительного интервала), используя подходящую прграмму, такую, как программа(, . ., 107 220-239, 1980). Клонированный КОР связывает пептид 1 с высоким сродством, как определено путем конкурентного замещения связанного радиолиганда, и определяют К, которая составляет приблизительно 0,050,02 нМ. Различие в сродстве является резковыраженным при сравнении с подобными стабильно трансфицируемыми раковыми клетками,экспрессирующими МОР человека, где К составляет 1890990 нМ. Таким образом, пептид 1 связы 7 11088 вается сильнее с КОР человека, чем с МОР человека, на коэффициент приблизительно 38000. Исследование пептида путем количественного анализа уксусных корчей у мышей, как описано ниже, показывает 50, равную приблизительно 0,09 мг/кг, и что по истечении 3 часов пептид продолжает проявлять антиноцицепцию, превышающую 50 . Таким образом, считают, что пептид 1 проявляет очень большую продолжительность действия. Пример 2 Опиоидные пептиды, имеющие общую формулу Считают, что пептиды 2-15 проявляют большую продолжительность антиноцицептивной биологической активности. Пример 3 Опиоидные пептиды, имеющие общую формулу Н-Хаа 1-Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4-, как показано в табл. Б,синтезируют и исследуют, как описано в примере 1. Таблица Б 11088 Считают, что пептиды 16-39 проявляют большую продолжительность антиноцицептивной биологической активности. Пример 4 Опиоидные пептиды, имеющие общую формулу Н-Хаа 1-Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4-, как показано в табл. В,синтезируют и исследуют, как описано в примере 1. Таблица В Считают, что пептиды 40-53 проявляют большую продолжительность антиноцицептивной биологической активности. Пример 5 Считают, что пептиды 54-58 проявляют большую продолжительность антиноцицептивной биологической активности. Пример 6 Считают, что пептиды 59-65 проявляют большую продолжительность антиноцицептивной биологической активности. 11088 Опиоидные пептиды, имеющие общую формулу Н-Хаа 1-Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4-, как показано в табл. Е, 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 Считают, что опиоидные пептиды табл. Е демонстрируют высокую селективность к КОР, по сравнению с МОР, и проявляют антиноцицептивную биологическую активность. Пример 8 Опиоидные пептиды, имеющие общую формулу Н-Хаа 1-Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4-, как показано в табл. Ж,синтезируют и исследуют, как описано в примере 1. Таблица Ж Считают, что пептиды 88-108 проявляют большую продолжительность антиноцицептивной биологической активности. Пример 9 10 Выбранные пептиды, которые указаны в таблицах А-Ж, дополнительно подвергли исследованиюконкретным образом для определения продолжительности действия их опиоидных свойств, а результаты сведены в табл. 3, приведенную ниже. 11088 Номера пептидов соответствуют номерам, приведенным в предыдущих таблицах, а количественные показатели, касающиеся отношения /, перенесены просто в справочных целях. Исследованиевыполняют, используя тест корчей у мышей, который больше всего подходит для определения продолжительности антиноцицептивной биологической активности. Этот тест подробно описан в статье Бентлей и др. (. ..) в . . .,73 325-332, 1981, и в нем используют находящихся в сознании мышей-самцов , которые приобретены уи которые весят 20 и 30 грамм. Мышей подвергают голоданию в течение 12-16 часов перед началом исследования. Ноцицептивное поведение,то есть корчи, которое будут наблюдать, вызывают внутрибрюшинным (в/б) введением разбавленной уксусной кислоты. На кг массы тела используют 10 миллилитров 0,6 -ной водной уксусной кислоты. Корчи подсчитывают в течение 15 минут после введения уксусной кислоты. На первом этапе соедине ния исследуют в 3-4 возрастающих дозах, вводя внутривенным путем и в одно специфическое время предварительной обработки (за 5 минут до инъекции уксусной кислоты). Этот этап используют для определения активности (-50, то есть 50 в тесте корчей), а также субмаксимальную эффективную дозу (антиноцицепция приблизительно 8090 ). На втором этапе эту субмаксимальную эффективную дозу для каждого пептида вводят в разное время предварительной обработки (то есть за 5 минут, за 60 минут, за 120 минут и за 180 минут) до введения уксусной кислоты, чтобы определить продолжительность действия. В исследовании используют контрольную группу мышей, которым вводят только наполнитель без пептида-кандидата. Количество корчей подсчитывают в течение 15-минутного периода, начиная от момента инъекции уксусной кислоты, а биологическую активность, то есть антиноцицепцию, выражают в процентах и рассчитывают следующим образом Поскольку каждая субмаксимальная доза, вероятно, будет изменяться так, что она не может быть непосредственно сравнимой, результаты стандартизируют математически, как известно в данной области, чтобы получить сравнимые значения, которые изложены в табл. 3. В табл. 3 антиноцицептивная активность, сохраняющаяся через 1, 2 и 3 часа,выражена в процентах от активности, обнаруженной за 5 минут. Значения выше 100 свидетельствуют о большей антиноцицепции, чем антиноцицепция в начале эксперимента. Полагают, что опиоидный пептид должен быть эффективен для уменьшения корчей, по меньшей мере, на 25 в течение часа, чтобы их считали имеющими большую продолжительность действия. Кроме использования этого теста для определения продолжительности антиноцицептивной активности, его также используют для измерения биологической активности (кратковременной) пептида. Эта величина дана в таблице под заголовком-50 в миллиграммах на кг массы тела. Эта величина представляет собой меру дозы, необходимой для уменьшения количества корчей у испытуемой мыши на 50(по сравнению с контрольной мышью) в течение периода 15 минут. Таблица 3 Опиоидные пептиды полезны в качестве аналгетиков и для другого фармакологического применения, касающегося лечения патологий, связанных с системой КОР. Они имеют преимущество над болеутоляющими средствами на основе -агонистов,например морфином, который оказывает нежелательные эффекты, такие, как запор, угнетение дыхания и зуд. Для защиты от возможных побочных эффектов, которые могут возникнуть, весьма желательно, чтобы эти опоидные пептиды в значительной степени не проникали через гематоэнцефалический барьер. Безвредность этих соединений в отношении проникновения в головной мозг оценивают путем сравнения их способности вызывать периферические эффекты со способностью вызывать центральные эффекты. Периферические эффекты измеряют, используя ранее описанный тест корчи у мышей . Центральные эффекты, обусловленные действием на расположенные в головном мозге каппа рецепторы, измеряют, используя тест отдергивания хвоста . Тест отдергивания хвоста представляет собой количественный анализ острой соматической боли,разработанный для оценки активности и продолжительности действия центральнодействующих аналгетиков. Ноцицепция, вызванная погружением хвоста в горячую воду (52 С), приводит в результате к 12 быстрому извлечению хвоста, также известному как отдергивание хвоста. Центральнодействующие аналгетические соединения, как полагают, дозозависимо увеличивают латентный период извлечения (отдергивания) хвоста. Тест описан Вандером и др. (, Т. ..) в . . ., 262 190-197, 1992. Безвредность оценивают путем использования показателя проникновения в головной мозг, где ППГМ-50 значения 50 представляют собой дозы, которые вызывают эффект, равный половине максимального эффекта в тесте корчи у мышей (-50) и в тесте отдергивание хвоста у мышей (-50), соответственно, при введении внутривенным путем. Высокое значение ППГМ свидетельствует о низком значении проникновения в головной мозг и показывает, что соединение, вероятно, обладает большим запасом безвредности (отсутствие побочных эффектов в отношении головного мозга) при использовании для целей, описанных в этой заявке. Предпочтительные опиоидные пептиды имеют значения ППГМ, равные или выше 100, а более предпочтительные опиоидные пептиды имеют зна 11088 чения ППГМ выше 300. Непептидные системные каппа агонисты (например Энадолин и -69,593) имеют значения ППГМ ниже 5, что свидетельствует о значительном проникновении в головной мозг,проявляющемся также, как доказано, побочнымипептида 1 3 5 6 7 8 15 49 53 57 58 61 88 96 98 99 102 105 Поскольку эти пептиды сильно связываются с КОР, они также применимы в количественных анализах для исследования рецепторов и для определения, какие рецепторы могут присутствовать в конкретном образце ткани. Таким образом, в этом отношении они полезны для диагностики и, возможно,также для диагностики. Эти опиоидные соединения большей частью могут быть использованы для достижения антиноцицепции при лечении висцеральной боли, а также при лечении ревматоидного артрита. Особенно они полезны при лечении абдоминальных послеоперационных симптомов, таких, как пищеварительные расстройства и боли. Их также считают эффективными для лечения СРТК, подвижности мочевого пузыря,недержания и при других показаниях, когда местное воспаление приводит к болевым состояниям в кишечнике или в других внутренних органах, например воспалительном кишечном заболевании (ВКЗ) и дисменореи. Способность опиоидных пептидов снижать иммунный ответ была бы полезна для борьбы с ВКЗ и другими симптомами, такими, как аутоиммунные заболевания. Введение пептидов может быть использовано для обеспечения местной аналгетической активности как в отношении острых, так и в отношении хронических воспалительных состояний. Они могут быть использованы для лечения пищеварительного илеуса, имеющего такие симптомы, как вздутие живота, тошнота или задержки прохождения содержимого через кишечник,связанные с болью, например кишечной непроходимости, возможно вызванной спастическими сокращениями. Опиоидные пептиды также эффективны при обеспечении периферической аналгезии, и они могут быть показаны для облегчения послеопе эффектами (диурез, дисфория и седативный эффект), которые они вызывают при клиническом использовании. Значения ППГМ для некоторых типичных опиоидных пептидов показаны в табл. 1,которая следует ниже. Таблица 1 рационной боли, а также хронической боли, такой,как боль, вызванная воспалением желудочнокишечных и висцеральных тканей и, кроме того, для обеспечения облегчения во время абстиненции из-за привыкания к чрезмерному употреблению лекарств. Соединения по изобретению можно вводить в форме фармацевтически приемлемых нетоксичных солей, таких, как соли присоединения кислоты, которые известны в данной области. Иллюстративными примерами таких солей присоединения кислоты являются гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, нитрат, оксалат, фумарат, глюконат, таннат,памоат, малеинат, ацетат, цитрат, бензоат, сукцинат,альгинат, малат, аскорбат, тартрат и тому подобное. Если активный ингредиент должен быть введен в форме таблетки, таблетка может содержать фармацевтически приемлемый нетоксичный разбавитель,который включает в себя связывающее вещество,такое, как трагакант, кукурузный крахмал или желатин. Внутривенное введение в изотоническом физиологическом растворе, фосфатном буфере, растворах маннита или глюкозы также может быть эффективно. Фармацевтические композиции обычно содержат эффективное количество пептида, объединенного с традиционным фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Обычно композиция содержит антиноцицептивное количество, то есть количество, которое эффективно для прекращения боли. Обычно дозировка составляет приблизительно от 1 микрограмма до 10 миллиграммов пептида на килограмм массы тела хозяина при внутривенном введении. Композиции могут быть введены введены таким образом, как это необходимо, например их можно вводить повторно с интервалом в 3-6 часов. 13 11088 Природа этих соединений, вероятно, может допустить эффективное пероральное введение, однако пероральные дозировки могли бы быть более высокими. При необходимости доставки опиоидного пептида в течение длительных периодов времени,например в течение одной недели или более, от однократного введения можно использовать лекарственные формы с медленным высвобождением, деполекарственные формы или имплантируемые лекарственные формы. Например, подходящий депопрепарат с медленным высвобождением для инъекции может содержать пептид или его соль, диспергированные или инкапсулированные в медленнораспадающемся нетоксичном или неантигенном полимере, таком, как полимер полимолочной кислоты/полигликолевой кислоты, как описано в патенте США 3,773,919. К тому же известно, что введение путем медленного высвобождения может быть достигнуто с помощью силастикового имплантата. Эти соединения можно вводить млекопитающим, включая людей, внутривенно, подкожно,внутримышечно, чрескожно, интраназально, внутрилегочно, перорально, местно, интраректально,интравагинально или путем спинномозгового введения определенными дозами для достижения такой антиноцицепции, которая может устранить задержку прохождения содержимого через желудочнокишечный тракт, вызванную перитонеальным раздражением. Их также можно использовать для облегчения послеоперационной боли. Эффективные дозировки будут изменяться с формой введения и конкретными видами млекопитающих, проходящих курс лечения. Примером типичной лекарственной формы является бактериостатический водный раствор с рН приблизительно 3-8, например приблизительно 6, содержащий пептид, причем раствор непрерывно вводят парентеральным путем для обеспечения дозы, лежащей в пределах от приблизительно 0,3 мкг до 3 мг/кг массы тела в день. Эти соединения считаются хорошо переносимыми, и их считают весьма подходящими для введения путем подкожной инъекции в бактериостатическом водном растворе или тому подобном. Хотя изобретение описано в отношении его предпочтительных воплощений, следует понимать,что изменения и модификации, как должно быть очевидно специалисту, имеющему обычную квалификацию в данной области, могут быть внесены, не выходя за рамки объема изобретения, изложенного в формуле изобретения. Например, в пептидах по изобретению могут быть использованы другие замещения, известные в данной области, которые в значительной степени не уменьшают эффективность пептидов. В положении-2 могут быть использованы и другие замещенные - остатки, такие, как-(2) считаются эквивалентами - и (2). -конец тетрапептида может быть перметилирован, как известно в данной области, если это необходимо. Диаминосоединения могут быть использованы в качестве линкеров для образования димеров 2 амидов тетрапептидов. Линкеры, которые 14 успешно использовали, включают в себя 1,6 диаминогексан, 1,5-диамино-3-оксапентан и 1,8 диамино-3,6-диоксаоктан. Полученные в результате димеры считаются эквивалентами соответствующих мономеров. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Амидный синтетический опиоидный пептид или его фармацевтически приемлемая соль, имеющие сродство к каппа опиоидному рецептору, которое по меньшей мере в 1000 раз превышает его сродство к мю опиоидному рецептору, и проявляющий большую продолжительность действия при введении, причем пептид имеет формулу Н-1-Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4-,где 1 представляет собой -, , -, - или - (циклопентил или тиенил), причем А представляет собой Н, О 2, ,или СН 3 Хаа 2 представляет собой -, -, 2, - или -, причем А представляет собой А или 3,4 С 2 Хаа 3 представляет собой -, -, -,-, -, - или -Аа(циклопентил), где В представляет собой Н или СМе Хаа 4 представляет собой -, -, -,-, -, -(2), -(2), -, -,-, - или -представляет собой 12, морфолинил, тиоморфолинил, (С) пиперидинил, пиперазинил, 4-моно- или 4,4-дизамещенный пиперазинил или -лизил, где 1 представляет собой низший алкил, замещенный низший алкил, бензил,замещенный бензил, аминоциклогексил, 2-тиазолил,2-пиколил, 3-пиколил, 4-пиколил, -(ациламино)полиметиленовую или поли(оксиэтиленовую) группу, 2 представляет собой Н или низший алкил,а С представляет собой Н, 4-гидрокси или 4-оксо. 2. Синтетический пептид по п. 1, где Хаа 2 представляет собой -, Хаа 3 представляет собойили -, а Хаа 4 представляет собой - или-. 3. Синтетический пептид по п. 1 или 2, гдепредставляет собой 1,1 представляет собой этил, пропил, бутил, циклопропил или циклобутил. 4. Синтетический пептид по п. 1 или 2, гдепредставляет собой морфолинил или тиоморфолинил. 5. Синтетический пептид по п. 1 или 2, гдепредставляет собой 1,1 представляет собой 4-пиколил. 6. Синтетический пептид по п. 1 или 2, гдепредставляет собой 2, ,или . 7. Синтетический пептид по п. 1 или 2, гдепредставляет собой 1,1 представляет собой Аао, Аоо, ,или . 8. Синтетический пептид по любому из пп. 1-7,где 1 представляет собой -, В-А 1 а(2 тиенил) или -4. 9. Синтетический пептид по п. 1, где Хаа 4 представляет собой -. 11088 10. Синтетический пептид по п. 1, где Хаа 2 представляет собой -4 или -3,4 Сра. 11. Синтетический опиоидный пептид по п. 1,имеющий -50 (50) в тесте корчи у мышей,равную приблизительно 0,5 мг/кг или менее, причем пептид имеет формулу Н-Хаа 1-Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4-,где 1 представляет собой - (незамещенный или замещенный СМе, 2, 4 или 4) или А 1 а(циклопентил или тиенил) Хаа 2 представляет собой -, -1, 2 или -, причем А представляет собой Н,4, 4, 42 или 3,4 С 2 Хаа 3 представляет собой -, -, -,- или -Аср 4 представляет собой -, -(2), , -, -, -(2), -, -, -,-, - ипредставляет собой 12, Мо, , , 4, ОхР или , где 1 представляет собой , , , ,или 4-пиколил,2 представляет собой Н или . 12. Синтетический пептид по п. 11, где Хаа 2 представляет собой -, -4 или -3,4,Хаа 3 представляет собой - или -, а Хаа 4 представляет собой -, - или -. 13. Синтетический пептид по п. 11 или 12, гдепредставляет собой 1,1 представляет собой, ,или 4-пиколил. 14. Синтетический пептид по п. 11 или 12, гдепредставляет собой (2) или . 15. Синтетический пептид по п. 11 или 12, гдепредставляет собой морфолинил или тиоморфолинил. 16. Синтетический пептид по п. 11 или 12, гдепредставляет собой 1,1 представляет собой этил или 4-пиколил. 17. Синтетический пептид по п. 11 или 12, гдепредставляет собой , с или . 18. Синтетический пептид по любому из пп. 1117, где 1 представляет собой -, или -Аа(2 тиенил), или -. 19. Синтетический пептид по п. 1, имеющий одну из следующих формул. 20. Синтетический опиоидный пептид по п. 1,имеющий Е 50, равную приблизительно 0,5 мг/кг или менее, причем пептид имеет формулу Н-Хаа 1-Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4-,где 1 представляет собой -, -4, -2,- или -(2) Хаа 2 представляет собой -, -, 2 или -, причем А представляет собой 4 или 4 С 1 Хаа 3 представляет собой -, - илиХаа 4 представляет собой -, -, -,-, - илипредставляет собой 1, Мо, ,или, причем 1 представляет собой ,или 4. 21. Синтетический опиоидный пептид по п. 1,имеющий 50, равную приблизительно 0,5 мг/кг или менее, причем пептид имеет формулу Н-1- Хаа 2-Хаа 3-Хаа 4-,где 1 представляет собой -, -4, -2 или -(2) Хаа 2 представляет собой -, -1, 2 или -, причем А представляет собой 3, 4 С 2 или 4 С Хаа 3 представляет собой - или Хаа 4 представляет собой -, - или ,апредставляет собой 1, Мо, , Рср, или 2, причем 1 представляет собой , Р,Сур, 4,или . 22. Фармацевтическая композиция, обладающая агонистической активностью в отношении каппа рецепторов, включающая в себя активный ингредиент и фармацевтически приемлемый носитель для него, отличающаяся тем, что она в качестве активного ингредиента содержит синтетический пептид по любому из пп. 1-10 в антивно-цицептивном количестве. 23. Способ антиноцицепции при висцеральной боли, ревматоидном артрите, абдоминальных послеоперационных симптомах либо острой или хронической боли, подвижности мочевого пузыря, недержании или пищеварительном илеусе, воспалительном кишечном заболевании (ВКЗ) или аутоиммунных заболеваниях, при котором вводят количество фармацевтической композиции, эффективное для достижения антиноцицепции, отличающийся тем, что в качестве указанной фармацевтической композиции используют композицию по п. 22.