Экспресс-способ серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота на основе иммунохроматографического анализа

(51) 61 39/40 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(72) Ескендирова Сауле Зиядиновна Дзантиев Борис Борисович Бызова Надежда Алексеевна Сотников Дмитрий Васильевич Балтин Кайрат Канатович Жердев Анатолий Виталиевич Раманкулов Ерлан Мирхайдарович Муканов Касым Касенович Булашев Айтпай Кабыкешович Шенжанов Канат Толюбаевич Унышева Гульхан Бекбергеновна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитет науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(56) Львов В.Л, Маликов В.Е, Шашков А.С.,Драновская Е.А., Дмитриев Б.А. Соматические антигены рода . Строение О-специфической полисахаридной цепи липополисахарида// Биорганическая химия-1985.-7.-т. 11 с.963-969(54) ЭКСПРЕСС-СПОСОБ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА НА ОСНОВЕ ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА(57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в ветеринарии для серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Технической задачей изобретения является разработка экспресс-способа серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота на основе иммунохроматографического анализа с использованием липополисахаридного антигенаштамм 19. Анализируемый образец сыворотки крови абсорбируется поглощающим участком тестполоски. При наличии в образце специфических антител против возбудителя инфекции они вступают в реакцию с антивидовыми антителами против иммуноглобулинов крупного рогатого скота,конъюгированными с коллоидным золотом и нанесенными на стартовую зону тест-полоски,образуя комплекс специфические антителаантивидовые антитела, меченные коллоидным золотом. Этот комплекс вступает в реакцию иммобилизованным в виде аналитической линии(линия теста) на мембране липополисахаридным антигеномштамм 19, образуя тройной комплекс. Далее на тест-полоске в виде контрольной линии нанесены антитела против антивидовых иммуноглобулинов, благодаря чему на ней образуется комплекс иммобилизованные антитела-антивидовые антитела,меченные коллоидным золотом, независимо от наличия в тестируемой сыворотке антител, специфичных к возбудителю инфекции (линия контроля). Таким образом, при наличии в тестируемой сыворотке антител, специфичных к возбудителю инфекции, в тестовой зоне образуются две параллельные окрашенные линии (аналитическая и контрольная). В случае отсутствия в анализируемом образце сыворотки крови антител, специфичных к возбудителю инфекции, в тестовой зоне образуется одна окрашенная линия (контрольная). Результаты апробации разработанного метода ИХА на основе липополисахаридного антигена 19 свидетельствует о возможности экспресс - обнаружения противобруцеллезных антител с высокой чувствительностью и специфичностью, что значительно повышает эффективность серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в ветеринарии как экспрессметод серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Бруцеллез для Республики Казахстан до настоящего времени остается актуальной и нерешенной проблемой,имеющей особое социально-экономическое значение. 60 эпизоотических очагов бруцеллеза, выявленных в СНГ в течение последних лет, приходится на Казахстан. Стабильно высокий уровень заболеваемости бруцеллезом людей, обусловленный крайне напряженной эпизоотической ситуацией, и большой социально-экономический ущерб определяют особую значимость этой инфекции в общей структуре патологий Краткий обзор эпизоотической ситуации в мире по особо опасным болезням животных// Информационноаналитический обзор. - Россельхознадзор. ФГУ ВНИИЗЖ. - Владимир, 2008. - С. 58 Абуталип А.А. Эпизоотическая ситуация по особо опасным болезням животных в Республике Казахстан // 17-й Международный ветеринарный конгресс. - Москва,2009. В связи с этим крайне востребованы методы,обеспечивающие эффективную серологическую диагностику этого заболевания сельскохозяйственных животных. Серологические методы диагностики бруцеллеза основаны на обнаружении антител к бруцеллезному антигену в сыворотке крови животных. В отличие от бактериологического и биологического методов,основанных на выделении бруцелл, серологические тесты представляют доказательства присутствия в исследуемом материале искомого агента на основании регистрации специфического взаимодействия антиген-антитело. Важным преимуществом серологических методов является возможность индикации не только корпускулярных,но и субкорпускулярных и растворимых антигенов К настоящему времени предложены и используются разнообразные серологические тесты,позволяющие выявлять как антигены бруцелл, так и специфические антитела. Агглютинационные тесты(реакция агглютинации - РА) используются для обнаружения как антигена, так и антител в зависимости от того,какой реагент связывается с носителем. Реагирующие с определяемым компонентом соединения могут быть адсорбированы на разных носителях - эритроцитах, латексе, угле, ализарине и т.д. Существуют прямой (образование осадка) и конкурентный (ингибирование образования осадка) варианты РА. Агглютинационные тесты просты в исполнении, не требуют сложного оборудования Таран И.Ф., Лямкин Г.И. Бруцеллез. - Ставрополь,1996. - 173 с Борисов В.А., Малов И.В., Аитов К.А. и др. Современное состояние проблемы бруцеллеза(лекция для практических врачей) // Журн. инфекционной патол. - 2000. -1-2. - с. 57-79. Однако по чувствительности они значительно уступают современным иммунохимическим методам. Диагностическую ценность РА снижает возможность ошибочных результатов из-за действия неспецифических факторов,вызывающих агглютинацию. В основе метода иммунодиффузии лежит встречная (линейная или радиальная) диффузия антигена и антител в агарозном геле, приводящая к образованию зон (полос) преципитации, видимых невооруженным глазом - .,С.,- В..// . . . - 1994. - . 32,5. - . 1159-1165 - , - .,- .... . - 1998. - . 40,3-4. - . 124127. Недостатком иммунодиффузии является значительное время, необходимое для получения результата, поскольку формирование преципитата при взаимодействии антиген-антитело требует нескольких часов или даже суток. Принцип иммуноэритроадсорбционного метода(ИЭАМ) состоит в аффинной адсорбции седиментирующих маркерных эритроцитов на стенках - или -образной лунки планшета со специфически связанным лигандом (антигеном или антителами). Впервые ИЭАМ для обнаружения антигена -бруцелл с использованиемиз кроличьих гипериммунных противобруцеллезных сывороток применил Д.Ю. Плаксин Плаксин Д.Ю. Ультрамикрометод иммуноэритроадсорбции (ЭИА) в камерах Терасаки - новый высокочувствительный инструмент скоростного иммунохимического скрининга, удобный для рутинных исследований в области инфекционной иммунологии // Теоретич. пробл. эпидемиол. и инфекционной иммунол. на современном этапе Тез. докл. конф. - Нальчик,1986. - с. 155. ИЭАМ эффективно сочетает преимущества микропланшетов и прямой визуальной оценки результатов с помощью дешевой и доступной корпускулярной метки(эритроциты). Радиоиммуноанализ (РИА) для идентификации токсического компонента В.впервые применили .и соавт..,., // . . - 1968. - . 95,2.- . 612-617. Позже для обнаружения .с помощью специфических антител, связанных с радиоактивной меткой,был предложен твердофазный анализ, чувствительность которого составила 100 пг,, //. . . - 1977. - . 10,3. - . 281-292. Высокая чувствительность метода обусловливает целесообразность его применения при отрицательных результатах традиционных тестов, а также для исключения диагноза бруцеллеза при отсутствии специфических антител или низком их уровне. Несмотря на высокую чувствительность и специфичность, этот метод не нашел широкого применения в практической медицине и ветеринарии,поскольку его внедрение 2 ограничивается необходимостью использования сложной и дорогостоящей аппаратуры, а также защиты от излучения. Эта ситуация вызвала необходимость поиска альтернативных маркеров ферментов, коллоидных металлов, красителей и т.д. Иммунофлуоресцентный метод анализа (ИФТ) основан на использовании специфических антигенов или антител,меченных флуоресцирующими веществами, чаще всего флуоресцеинизотиоцианатом. Данный метод применяется в прямом и непрямом вариантах и позволяет определять как антиген, так и антитела в разнообразном материале.,, .// . . . - 1988. . 182,1. - . 18-21,, .// . . . . - 1989. . 7, . 6. - . 316-320 Мельниченко Л.П., Ниязов У.Э., Ромахов В.А. Сравнительная оценка серологических тестов для диагностики инфекционного эпидидимита баранов // Актуал. вопр. профилакт. бруцеллеза и организация мед. помощи больнымТез докл. Всесоюз. конф. - М.,1989. -С. 142-144,,- . 20,6. - . 1023-1027. Несмотря на положительные качества, ИФТ мало используется для диагностики бруцеллеза. Помимо неоднозначной оценки его чувствительности,известную роль в этом сыграли такие недостатки,как ограниченная пригодность для определения растворимых антигенов, необходимость дорогого оборудования, высокая стоимость анализа. В дот-иммуноанализе (ДИА) антиген или антитела в минимальных объемах наносят на нитроцеллюлозную мембрану в виде одной или серии точек. Результаты реакции учитывают визуально, что исключает необходимость в дорогих фотометрах. Простота и экономичность,стабильность компонентов реакции позволяют осуществлять ДИА за пределами лаборатории - в домашних или полевых условиях,,.-// . .. - 2000. - . 32, 3.-. 155-163. ДИА является одним из простых и надежных методов лабораторной диагностики бруцеллеза, идеально подходящим для лабораторной практики. К недостаткам теста относится невозможность исследования окрашенного материала (кровь,экскременты, желчь и т.п.) из-за неспецифического окрашивания мембран. При проведении твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) происходит образование специфических иммунных комплексов на твердом носителе, включение в его состав ферментной метки и выявление метки посредством внесения соответствующего субстрата.,.,..()// . . - 2001. - . 149,3. - . 88-90,.,.-// . . . -2001. - . 20,3. - . 749-756. ИФА - экспрессный, надежный, легко выполнимый, экономичный, воспроизводимый аналитический метод, который может быть автоматизирован и использован для скрининга большого количества сывороток людей и животных,что особенно полезно в районах с низкой эпизоотологической и эпидемиологической информированностью.,К.,..// . . . - 2000. - . 36,3. - . 469476. ИФА по чувствительности, специфичности и диагностической значимости превосходит традиционные серологические тестыА.О., .,..// . . 2001. - . 13, . 1. - . 54-59. Вместе с тем показатели чувствительности и специфичности анализа могут зависеть от модификации метода,использования грубоочищенных или низкоспецифичных антигенов для сенсибилизации лунок планшетов, качества объекта исследования и его предварительной подготовки, а также других факторов. Необходимо отметить, что использование в качестве антигена в рассмотренных выше иммунохимических тестах цельных инактивированных клеток -формы бруцелл снижает достоверность анализов. Эти клеточные препараты содержат на своей поверхности антигенные детерминанты, общие для бруцелл и других грамотрицательных микроорганизмов 09,,,группыи др., что приводит к получению ложноположительных результатов и может быть причиной необоснованного убоя животных Касымов Е.И., Касымов Е.Ж.,Сравнительная оценка эффективности серологических методов диагностики бруцеллеза // Материалы международной конференции Состояние и перспективы диагностики инфекционных болезней животных. - Астана, 2008.- с. 261 Сансызбай А.Р., Тургенбаев К.А. Научное обеспечение ветеринарного благополучия животноводства в РК // Материалы международной конференции Состояние и перспективы развития производства ветеринарных препаратов. - Алматы,2006. - с. 20. В практике массовых обследований животных,проводимых в нашей стране для ранней диагностики бруцеллеза животных, используется иммуноферментный анализ, который утвержден в качестве официального серологического теста(приказ Министра сельского хозяйства Республики 3 Казахстан от 5 ноября 2004 года 632). Первоначально в ветеринарных лабораториях использовали иммуноферментные тест-системы для диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота,предлагаемые российскими (НПО Нарвак и НПО Вектор) и украинскими (НПО Ветдиапроф) производителями, которые основаны на выявлении в сыворотке крови животных постинфекционных антител против ЛПС (липополисахарида) иммунодоминантного антигена возбудителя бруцеллеза. В настоящее время в Республике Казахстан налажен выпуск аналогичной отечественной иммуноферментной тест-системы(ТОО Биоцентр, г. Степногорск, СТТОО 40244539-0032008). Однако комплексные диагностические исследования данным методом могут проводить только специализированные ветеринарные лаборатории,оснащенные современным оборудованием и подготовленными специалистами,что создает дополнительные трудности при проведении профилактических и карантинных мероприятий. Султанов А.А. Эпизоотическая ситуация и научные обеспечение ветеринарных проблем животноводства Казахстана // Материалы международной научно-практической конференции Состояние и перспективы развития ветеринарной науки и практики - Алматы, 2003. - С. 9-19 Мамадалиев СМ., Троицкий Е.Н., Хайруллин Б.М. и др. Современные данные мониторинга особо опасных заболеваний на территории Республики Казахстан // Материалы Международной научнопрактической конференции Биотехнология в Казахстане проблемы и перспективы инновационного развития. -Алматы, 2008.-549 с. Развитие методов иммунологической диагностики в последние 10-15 лет показало, что наряду с увеличением чувствительности и повышением специфичности наблюдается тенденция упрощения иммунологического определения, обеспечения возможности проведения анализов во внелабораторных условиях. Немаловажную роль играет также снижение стоимости определения, что необходимо при скрининге большого количества образцов в целях массовой диагностики, локализации и ликвидации очагов инфекции. Перечисленным условиям на сегодняшний день в наибольшей степени удовлетворяет иммунохроматографический анализ (ИХА). В иммунохроматографической системе все необходимые для анализа реагенты предварительно нанесены на мембранные компоненты тест-полоски,и ее контакт с тестируемой пробой инициирует движение фронта жидкости вдоль мембран,сопровождающееся специфическими взаимодействиями и окрашиванием определенных зон тест-полоски. Таким образом,иммунохроматографический анализ может быть проведен без использования каких-либо дополнительных приборов и реагентов, а его результаты зарегистрированы визуально. Этот метод диагностики обладает высокой чувствительностью,не требует сложного оборудования и хорошо подходит для проведения анализов в массовых количествах,что обеспечивает возможность проведения своевременных противоэпизоотических мероприятий. Исключение необходимости посылать биологический материал(сыворотка крови, молоко, патматериал) в лабораторию уменьшает время постановки диагноза, которое в некоторых случаях имеет решающее значение. Методическая простота,экспрессность (10-15 мин) и чувствительность иммунохроматографии обусловила ее активное применение для решения разнообразных диагностических задач. Принцип иммунохроматографического определения специфических антител против возбудителя того или иного инфекционного заболевания активно используется в настоящее время для разработки иммунодиагностических тестсистем нового поколения. Известен способ экспресс - диагностики бруцеллеза человека на основе иммунохроматографического анализа(ИХА),основанный на определении специфическихиантител в образцах сывороток от больных пациентов с достоверно подтвержденным диагнозом. Сравнительная оценка диагностической ценности метода с общепринятыми методами диагностики - выделение культуры возбудителя,реакции агглютинации и реакции Кумбса показало эффективность применения ИХА для обнаружения острых и хронических форм и мониторинга лечения заболевания. Чувствительность теста составила 96 и специфичность 99. Однако данный способ предназначен сугубо для определения противобруцеллезных антител в сыворотке крови человека, что обусловлено использованием при конструировании теста специфических антивидовых антител, меченных коллоидным золотом и иммуноглобулинов человека ( и ) для индикации контрольной линии ., Т.Н.//- 2003.01.10.-.6.- . 1141 - 1146. Впоследствии эти исследователи адаптировали ИХА тест с целью обнаружения противобруцеллезных антител в сыворотке крови крупного рогатого скота, овец, коз и свиней. Каждый вариант тест предусматривал использование в качестве захватывающих антител антивидовых антител против иммуноглобулинов тестируемого вида животных и аналогичные препараты иммуноглобулинов для детекции контроля. Чувствительность метода при исследовании сывороток крови крупного рогатого скота, овец, коз и свиней с бактериологически подтвержденным бруцеллезом составила 90,100, 90 и 73 соответственно. Высокая специфичность теста была подтверждена отсутствием реакции у здоровых животных Т. 4., ., .. . .//.-2008.-.130.-. 312-329. Сравнительное испытание ИХА теста на 1375 образцах сывороток крови крупного рогатого скота из неблагополучных по бруцеллезу стад с конкурентным ИФА подтвердило его информативность и эффективность. Высокая достоверность результатов статистической оценки специфичности и чувствительности обеих тестов позволили авторам рекомендовать ИХА- тест для контроля эпизоотической ситуации.//.-20094.- . 95-100. В качестве специфического антигена в вышеупомянутых тестах используется липополисахаридный антигенштамм 1119-3, - основной иммунодоминантный комплекс клеток бруцелл,что позволяет детектировать антитела,специфичные для бруцеллеза крупного рогатого скота. Однако штамм 1119-3 широко используется для научно-практических целей медицины и ветеринарии лишь в странах Европы и Америки. С помощью ЯМР - спектроскопии и методом метилирования исследователями установлена полная идентичность строения липополисахаридного антигена слабовирулентного 19 и 565 являющегося представителем наиболее патогенного для человека вида бруцелл. Кроме того, по всем химическим и спектральным характеристикам ЛПС 1119-3 и 19 также оказались идентичны. М.. Строение О-специфической полисахаридной цепи липополисахарида// Биоорганическая химия - 1985.- 7.- т. 11- С.963-969. Технической задачей изобретения является разработка экспресс-способа серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота на основе иммунохроматографического анализа с использованием липополисахаридного антигена из слабовирулентногоштамм 19,который адаптирован для местных условий и широко используется для изготовления вакцины и бруцеллезных диагностических препаратов в регионе стран СНГ, в том числе в Республике Казахстан. Анализируемый образец сыворотки крови абсорбируется поглощающим участком тестполоски. При наличии в образце специфических антител против возбудителя инфекции они вступают в реакцию с антивидовыми антителами против иммуноглобулинов крупного рогатого скота,конъюгированными с коллоидным золотом и нанесенными на стартовую зону тест-полоски,образуя комплекс специфические антителаантивидовые антитела, меченные коллоидным золотом. Этот комплекс вступает в реакцию с иммобилизованным в виде аналитической линии(линия теста) на мембране липополиса.харидным антигеномштамм 19, образуя тройной комплекс. Далее на тест-полоске в виде контрольной линии нанесены антитела против антивидовых иммуноглобулинов, благодаря чему на ней образуется комплекс иммобилизованные антитела-антивидовые антитела,меченные коллоидным золотом, независимо от наличия в тестируемой сыворотке антител, специфичных к возбудителю инфекции (линия контроля). Таким образом, при наличии в тестируемой сыворотке антител, специфичных к возбудителю инфекции, в тестовой зоне образуются две параллельные окрашенные линии (аналитическая и контрольная). В случае отсутствия в анализируемом образце сыворотки крови антител, специфичных к возбудителю инфекции, в тестовой зоне образуется одна окрашенная линия (контрольная) (фиг. 1) В предлагаемом аналитическом методе серодиагностики бруцеллеза на тест-полоске формируются комплексы, в состав которых входят молекулы антигена -липополисахарида 19, специфичные к ним антитела,содержащиеся в тестируемой пробе,и конъюгированные с антивидовыми антителами частицы коллоидного золота, связывание которых регистрируется визуально. С использованием данной тест-системы возможно дифференцирование тестируемых проб на положительные и отрицательные (наличие или отсутствие окрашивания аналитической линии), а также оценка уровня и аффинности специфических антител, исходя из интенсивности окрашивания, что демонстрируется тест-полосками, приведенными на фиг. 2. Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Иммунохроматографическая тестполоска состоит из мембраны нитроцеллюлозной,мембраны стекловолоконной (подложка для конъюгата поликлональные антитела - коллоидное золото) и фильтров бумажных (подложка для пробы и адсорбирующая подложка), наклеенных на твердую основу из пластика белого цвета. На стекловолоконную мембрану тест-полоски нанесены и высушены специфические поликлональные кроличьи антитела против иммуноглобулинов крупного рогатого скота, конъюгированные с частицами коллоидного золота. На тестовую зону нитроцеллюлозной мембраны нанесены липополисахаридный антиген 19 и поликлональные антитела против иммуноглобулинов кролика. Тест-полоска может быть помещена в планшет из пластика листового белого цвета с прямоугольным окном для контроля 5 окрашивания контрольной и аналитической зон и круглым окном - для нанесения пробы на бумажный фильтр - подложку для образца. Пример 2. Для получения липополисахаридного антигена 5 г лиофильновысушенных инактивированных клеток 19 экстрагируют в 175 мл свежеприготовленного 45 раствора фенола в течение 15 мин при температуре(602). Охлаждают полученный экстракт до 510 и центрифугируют его в течение часа при 6000. Отделяют фенольный слой, добавляют к нему равный объем горячей дистиллированной воды(602) и повторяют экстракцию в том же режиме. Фенольную фазу охлаждают до 5-10 и диализуют против 10 объемов водопроводной воды в течение суток, а затем против 10 объемов дистиллированной воды для удаления фенола и низкомолекулярных примесей. Перед лиофилизацией концентрируют раствор антигена в роторном испарителе под вакуумом до концентрации 1 мг/мл (концентрацию антигена определяют серно-фенольным методом по показателям оптической плотности в каждой пробе при длине волны 492 нм против контрольного образца (раствор глюкозы). Пример 3. Анализируемые образцы сыворотки крови и иммунохроматографическая тест-полоска при проведении анализа должны быть выдержаны при комнатной температуре (18-25). Проведение анализа В чистую сухую емкость вносят анализируемую пробу сыворотки крови. Вскрывают упаковку, разрывая ее вдоль прорези,извлекают тест-полоску и помещают ее в емкость с пробой. При использовании тест - полосок, помещенных в планшет, пробу наносят в круглое окно планшета. Возможно использование как цельной, так и разведенной в несколько раз сыворотки (для полосок, помещенных в планшет посредством последовательного нанесения пробы сыворотки и буфера). Результат анализа оценивают через 15-20 мин(максимально допустимое время - 20 мин). Выявление в тестовой зоне двух параллельных линий розового цвета (фиг. 3, полоска 1) свидетельствует о положительном результате анализа, т.е. о наличии в образце специфических антител к возбудителю бруцеллеза. Выявление в тестовой зоне одной верхней линии розового цвета (фиг. 3, полоска 2) свидетельствует об отрицательном результате анализа, т.е. об отсутствии в образце специфических антител к возбудителю бруцеллеза. Если ни одной окрашенной линии не образуется(Фиг. 3, полоска 3) или образуется только нижняя линия (фиг. 3, полоска 4), результат анализа признается недействительным. При этом анализ следует повторить с использованием другой тестполоски. Пример 4. Сравнительное испытание предлагаемого экспресс-способа серологической диагностики бруцеллеза иммунохроматографического анализа (ИХА) проводили путем тестирования 40 позитивных и 10 негативных сывороток крови крупного рогатого скота (по данным РА и ИФА). Результаты тестирования суммированы в таблице 1. Таблица 1 Результаты сравнительного тестирования сывороток крови крупного рогатого скота методами РА, ИФА и ИХА(100) результатов тестирования испытуемых сывороток в РА, ИФА и ИХА. С помощью ИХА положительный результат был получен для всех 40 сывороток,позитивных по данным ИФА и РА ( 1-40),отрицательный результат - для всех 10 сывороток,негативных по данным ИФА и РА ( 41-50). Таким образом,результаты апробации разработанного метода ИХА на основе липополисахаридного антигена 19 свидетельствует о возможности экспрессобнаружения противобруцеллезных антител с высокой чувствительностью и специфичностью, что значительно повышает эффективность серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Экспресс-способ серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота на основе иммунохроматографического анализа, включающий использование специфического антигена,предварительное нанесение иммунореагентов на мембранные компоненты тест-полоски, а ее контакт с тестируемой пробой инициирует движение фронта жидкости вдоль мембраны, сопровождающееся специфическими взаимодействиями и затем окрашивание аналитической зоны тест-полоски,отличающийся тем, что в качестве специфического антигена используют липоополисахаридный антиген из слабовирулентного штамма 19