Способ получения противоопухолевого средства “Арглабин-лиофилизированный”

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН Задачей изобретения является создание способа получения противоопухолевого препарата на основе природного сесквитерпенового лактона, заключающегося в комплексной химической переработке, растительного сырья, позволяющий существенно повысить выход продукта -арглабина. Способ заключается в следующем первоначально из растительного сырья полыни гладкой извлекают эфирное масло, что позволяет улучшить технологию получения сесквитерпенового лактона арглабина и приводит к повышению выхода целевого продукта. Сухое сырье после извлечения эфирного масла экстрагируют и получают смолку из растительного сырья. Для очистки смолки от балласта(хлорофилл, белковые вещества и т.д.) проводят водно-спиртовую обработку полученной суммы экстрактивных веществ. Смолку, полученную после водно-спиртовой обработки, делят методом колоночной хроматографии на колонке на индивидуальные компоненты. Следующие стадии представляют процессы перекристаллизации арглабина и получения аминоарглабина. После реакции аминирования аминоарглабин подвергают гидрохлорированию и фильтрации. Затем полученный целевой продукт сушат над ангидроном под вакуумом, растворяют апирогеной дистиллированной водой из расчета 2 г сухого вещества - 100 мл воды. Полученный раствор лиофилизируют. Стерильный раствор охлаждают до комнатной температуры, стерильно разливают во флаконы и сушат в лиофильной сушилке. После лиофилизации в каждом флаконе содержится 0,04 г препарата. Количественное и качественное определение субстанции и лекарственной формы проводится согласно Фармакопейным статьям (ФСРК-244- 99, ФС-РК-245-99).(56) Предварительный патент РК 10913, кл. 07 307/93, А 61 К 31/365, 15.11.2001(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО СРЕДСТВА АРГЛАБИНЛИОФИЛИЗИРОВАННЫЙ(57) Изобретение относится к медицине, в частности, к способу получения лекарственных препаратов из растительного сырья, а именно противоопухолевого препарата Арглабин на основе сесквитерпенового лактона гидрохлорида 1, 10-эпокси-13 диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олида лиофилизированного формулы (1), которое может быть использовано при создании новых препаратов для химиотерапии злокачественных опухолей 13247 Изобретение относится к медицине, в частности,к способу получения лекарственных препаратов из растительного сырья, а именно, противоопухолевого препарата Арглабин на основе сесквитерпенового лактона 1, 10-эпокси-13-диметиламино-гвай 3(4) -ен-6,12-олида формулы (1), которое может быть использовано при создании новых препаратов для химиотерапии злокачественных опухолей. Известны способы получения препарата Арглабин патент РК 909 1, 10-эпокси-13 диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олида предпатент РК 5277 1, 10-эпокси-13-диметиламино-гвай 3(4)-ен-6,12-олид - арглабин-лиофилизированный,обладающий противоопухолевой и иммуномодулирующей активностью предпатент РК 10913. Способ получения гидрохлорида 1, 10-эпокси 13-диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олида лиофилизированного, противоопухолевого средства Арглабин, устройство для его осуществления, включающий экстракцию растительного сырья (надземная часть. . ) хлороформом, очистку суммы экстрактивных веществ от балластных компонентов, разделение смолки на индивидуальные соединения методом колоночной хроматографии, в результате которой получают нативный арглабин, который далее подвергают перекристаллизации, аминированию, гидрохлорированию с получением гидрохлорида диметиламино арглабина и последующей его перекристаллизацией, лиофильной сушкой и установлением подлинности препарата. Выход целевого продукта - 90-95. Задачей изобретения является создание способа получения противоопухолевого препарата на основе природного сесквитерпенового лактона, заключающегося в комплексной химической переработке растительного сырья, позволяющей повысить выход целевого продукта. В предлагаемом способе получения противоопухолевого средства Арглабин-лиофилизированный,включающего комплексную химическую переработку растительного сырья, а именно, извлечение эфирного масла из растительного сырья на установке УЭМ-Э (фиг. 1), а затем экстракцию сырья на модернизированной установке УЭРС-8 М (фиг. 2). Для получения аминопроизводного арглабина исходное кристаллическое вещество (арглабин) растворяют в спирте и добавляют в полученный спиртовой раствор диметиламин. Из раствора, содержащего продукт реакции, отгоняют спирт и оставшуюся массу заливают хлороформом, осушителем удаляют следы оставшейся воды, выпаривают хлоро 2 форм, добавляют спирт и барботируют хлористым водородом до рН раствора 5,0-6,60,5, выпаривают спирт и перекристаллизовывают этилацетатом, в результате получают гидрохлорид диметиламиноарглабина, который подвергают высушиванию и лиофилизации, затем устанавливают подлинность препарата. Выход целевого продукта - 95-100. Данный способ позволяет сохранить биологически активные вещества, содержащиеся в сырье после извлечения эфирных масел. Установка для извлечения эфирного масла из состоит из запарника 5 с крышкой 7, контейнера 6 с перфорированными днищем и крышкой. Для генерации низкотемпературного пара используется котел 2, установка подготовки воды 1 и устройство дополнительного подогрева пара 3. Температура рабочего пара на входе в запарнике 5 контролируется термометром 4, вакуум или давление в запарник 5 контролируется вакуумным манометром 8. Для конденсации паров воды с эфирными маслами используется холодильник 9. Сконденсированные пар и эфирные масла подаются в приемникотстойник 10 для их разделения по плотности. Тяжелые масла с конденсированным паром подаются в приемник 11. Отделившиеся эфирные масла собираются в приемнике эфирных масел 12. А конденсат отработанного пара после отделения от эфирных масел собирается в приемнике 13. Несконденсировавшиеся пары эфирных масел подаются в низкотемпературный конденсатор 14. Пары эфирных масел, которые несконденсированы конденсатором 14, нейтрализуются в установке 15. Все устройства установки герметично обвязаны трубопроводами и подключены к устройству вакуумирования. Эфирное масло извлекают в двух режимах работы установки при перегонке с водяным паром при атмосферном давлении (режим ) и при создании вакуума от -0,6 до -0,9 кгс/см 2, т.е. уменьшении температуры в запарнике до 48 С (режим ) для обеспечения безотходного производства обрабатываемого растительного сырья и повышения выхода целевого вещества - арглабина. Для режиманадземную часть полыни гладкой(до 10 кг) загружают в кассету, где она при помощи вращающегося устройства распределяется по всему объему кассеты. Пар из парогенератора подают острый. Перегонку проводят в течение 3 часов при 100 С. Выход эфирного масла - 0,7. Компонентный состав эфирного масла полыни гладкой, определенный с помощью капиллярной ГЖХ на неполярной метисиликоновой неподвижной фазе с использованием пламенно-ионизационного детектора,насчитывает 70 соединений, из числа которых в большем количестве присутствуют 1,8-цинеол(10,2), линалоол (10,8), -терпинеол (4,6). При данном режиме эфирное масло получают синезеленого цвета, что обусловлено присутствием хамазулена, содержание которого составляет 1,2. Хамазулен образуется из прохамазуленов при обработке растительного сырья паром, что приводит к деструкции сесквитерпеновых лактонов гваянового типа, и соответственно выход арглабина после из 13247 в установке давление до -0,9 кгс/с 2, температура до 48 оС. Время отгонки - 3 часа. Эфирное масло представляет жидкость желтого цвета с приятным запахом. Выход - 0,65. Хамазулен в эфирном масле не обнаружен. Таблица Влияние способа извлечения эфирного масла полыни гладкой на выход нативного арглабина влечения эфирного масла составляет всего 0,19 на воздушно-сухое сырье, т.е. уменьшается в несколько раз. Для режиманадземную часть полыни гладкой Режимы выделения эфирных масел на установке УЭМ-Э Выход эфирного мас- Выход арглабинана лана воздушно- воздушно-сухое сырье сухое сырье Получение эфирного масла при перегонке с водя 0.7 0.19 ным паром,100 С Получение эфирного масла при перегонке при дав 0.7 0.8 лении -0,6 кгс/с 2,59 С Получение эфирного масла при перегонке при дав 0.65 1.01 лении -0.9 кгс/с 2,48 С Таким образом, после предварительной отгонки эфирного масла за счет подачи пара при пониженной температуре под вакуумом удаляются не только компоненты летучей фракции, но и освобождается доступ растворителя к местам локализации лактонов в сырье, вследствие чего увеличивается выход и чистота сесквитерпенового лактона - арглабина до 1,01. Такой подход позволяет не только улучшить технологию производства арглабина, но и осуществить получение эфирного масла, обладающего противомикробной, антивирусной активностями. В целом способ получения арглабиналиофилизированного осуществляют следующим образом. Получение Арглабина-лиофилизированного проходит по следующей форме производства. Стадию ТП-1 (извлечение эфирного масла) осуществляют в установке для получения эфирного масла из растительного сырья УЭМ-Э (фиг. 1). Сухое измельченное растительное сырье (цветочные корзинки и листья полыни гладкой ) до 10 кг загружают в кассету и изменяют параметры в установке давление до -0,9 кгс/см 2,температура - до 48 С. Время отгонки - 3 часа. Эфирное масло представляет собой жидкость желтого цвета с приятным запахом. После извлечения эфирного масла оставшийся шрот высушивают. Стадию ТП-2 (получение смолки из растительного сырья) осуществляют в модернизированной экстракционной установке УЭРС-8 М (фиг. 2). Ранее предложенная установка УЭРС-8, описанная в предпатенте 10913 Способ получения гидрохлорида 1,10-эпокси-13-диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олидалиофилизированного, противоопухолевого средства Арглабин, устройство для его осуществления имеет ряд недостатков 1. Предполагалось, что после охлаждения экстракта через холодильную установку хлороформа в отходящих газах будет достаточно мало и выбросы после вентилятора направляли в зону вытяжной вентиляции. Практически в отходящих газах сохранялось много паров хлороформа и принятая схема вы вода газов из реакторной зоны вела к потерям хлороформа до 40 2. Морозильная камера холодильной установки УЭРС-8 была изготовлена из алюминия, который оказался неустойчивым к хлороформу 3. Проблемы возникли при заправке морозильной камеры холодильной установки фреоном и удалении влаги. Вода в капиллярах морозильной камеры замерзала, что снижало производительность экстрактора, происходили простои, пока вода в капилляре не оттаивала. В экстракционной установке УЭРС-8 М изменено движение газов газы, образующиеся в результате нагревания хлороформа, проходя через морозильную камеру холодильной установки, вентилятор,расположенный после холодильной установки, направляют обратно в реактор, и дополнительно в нее введено устройство со сменными соплами для подачи газов в третью секцию реактора, что ускоряет циркуляцию газов в реакторе и увеличивает выход сконденсированного хлороформа. Морозильная камера изготовлена из нержавеющей стали. В системе охлаждения используется хладоагент-фреон 22, что дает эффективную конденсацию паров хлороформа. Установка состоит из противоточного секционного экстрактора непрерывного действия, разделенного на секции (2-1, 2-2, 2-3), продолжением которого является сушилка 3 с общим приводом 4. На экстракторе установлено загрузочное устройство,состоящее из промежуточного бункера 5, питателя 6 с приводом 7 и канала 8. На промежуточный бункер 5 устанавливается сменная емкость 9 с сырьем, в качестве которой используется стандартный крафтмешок. Насос 10 предназначен для подачи экстракта из экстрактора в фильтрующую центрифугу 11, установленную на экстракторе. Для сгущения экстракта предназначен испаритель 14 пленочного типа со встроенным парогенератором. Сгущенный экстракт из испарителя 14 периодически сливается в сменные емкости 15. На испарителе 14 установлен водоохлаждаемый конденсатор 16. Экстрактор оборудован системой газоудаления, состоящей из кон 3 13247 денсатора 20, охлаждаемого тосолом, вымораживателя 21, который одновременно является испарителем фреоновой холодильной машины 12, в качестве которой использован холодильный агрегат от бытового холодильника, и вентилятора 22. Сброс газов,удаляемых из экстрактора и очищенных от паров экстрагента, осуществляется обратно в реактор, что ускоряет циркуляцию газов в реакторе и увеличивает выход сконденсированного хлороформа. Отработанный и высушенный шрот собирается в легкосъемную сменную емкость 23, в качестве которой также используется стандартный крафтмешок. Буферный бак 17 предназначен для сбора дистиллированного экстрагента из конденсатора 16 и подачи его в экстрактор. Бак 17 оборудован уровнемером, расходомером и регулятором расхода экстрагента. Приборы управления, регулирования, контроля, сигнализации и защиты установки смонтированы на пульте 28. Все аппараты установки работают под разряжением, что исключает попадание паров экстрагента в помещение. Все составные части установки смонтированы на общей раме. Высушенный шрот непрерывно из сменной емкости 9 ссыпается в промежуточный бункер 5, откуда питателем 6, производительность которого регулируется в широких пределах, равномерно ссыпается через канал 8 в первую секцию экстрактора 2-1,где интенсивно перемешивается с экстрагентом и начинается процесс экстракции. Сырье постепенно продвигается по экстрактору, последовательно проходя три ступени экстрагирования, и перегружается в сушилку 3. Чистый экстрагент из бака 17 подается в конец последней ступени экстрактора и движется против движения сырья к первой ступени, экстрагируя целевые вещества из сырья. Экстракт, (экстрагент, насыщенный экстрагируемыми веществами) пройдя отстойник, расположенный в начале первой ступени экстрактора, выводится из экстрактора и насосом 10 подается в испаритель 14 для сгущения. Отцентрифугированные частицы (осадок) из экстракта сбрасываются из центрифуги 11 в последнюю ступень экстрактора. Нижняя часть экстрактора в области экстракционной смеси оборудована водяной рубашкой, что позволяет поддерживать заданную температуру экстракции. Шрот, насыщенный экстрагентом, из экстрактора 1 перегружается в сушилку 3, стенки которой обогреваются электронагревателями. В сушилке шрот также интенсивно перемешивается, контактирует с горячими стенками, при этом экстрагент испаряется и пары его поступают в паровое пространство (верхнюю часть) экстрактора. Шрот в сушилке постепенно перемещается в противоположный конец сушилки и выгружается в сменную емкость 23. Стенки парового пространства экстрактора охлаждаются водой, в результате чего на них конденсируются пары экстрагента, поступающие из сушилки 3, а конденсат стекает в экстракционную смесь. Большая часть паров конденсируется в третьей (промывочной) ступени экстрактора, в результате чего в ней поддерживается низкая концентрация 4 экстрагируемых веществ, что способствует более полному извлечению их из шрота. Неконденсируемые газы (воздух, поступающий в экстрактор с сырьем и воздух, подаваемый на проветривание в сушилку) поступает в конденсатор 20,охлаждаемый водой, где избыток паров экстрагента,несконденсировавшихся на стенках экстрактора,конденсируются. Далее газы поступают в вымораживатель 21, температура стенок которого поддерживается на уровне отрицательных температур - 1520 С холодильной машиной 15, за счет чего на них конденсируются оставшиеся в газах пары экстрагента. Далее газы, практически полностью освобожденные от паров экстрагента, вентилятором 22 сбрасываются обратно в реактор. Вентилятор 22 обеспечивает разряжение в полостях экстрактора, сушилки 3 и других аппаратах,связанных с ними, благодаря чему исключается проникновение паров экстрагента в помещение. В течение рабочего дня нарабатывается 0,539 кг смолки (суммы экстрактивных веществ), что составляет 7 в пересчете на сухое сырье. Наработанная смолка передается на стадию ТП-, где подвергается очистке от балластных веществ. В применяемой на данной стадии экстракционной установке управление работой и контроль основных ее параметров осуществляется с пульта 20. Все аппараты установки работают под разряжением,что исключает попадание паров экстрагента в помещение. Установка снабжена системами управления, регулирования, контроля и сигнализации основных параметров установки. Кроме того, в установке использованы следующие автоматические системы система автоматического поддержания температуры экстракционной смеси, включающая электроконтактный термометр и электромагнитный клапан система поддержания температуры стенок в сушилке раздельно по секциям электронагревателя, включающая биметаллические реле и контакторы и автоматическое переключение фильтров центрифуги, включающее реле времени, конечные выключатели, сервопривод и реверсивный магнитный пускатель. Основные электродвигатели в установке, нагреватель сушилки и парогенератор испарителя имеют максимальную и тепловую защиту от перегрузки и короткого замыкания. Электропитание всей установки в целом также защищено автоматическим выключателем с максимальным и тепловым размыкателем. Установка смонтирована на собственной раме и не требует специального фундамента. Обслуживание установки в работе осуществляется однимдвумя операторами, имеющими специальную подготовку. Конструкция установки позволяет без ее разборки освобождать установку полностью от экстрагента без потерь в окружающую среду и почти полностью (на 95-98) от сырья при подготовке ее к профилактическому ремонту или смене сырья и экстрагента. 13247 Конструкция установки позволяет наблюдать за ходом процесса в экстракторе и сушилке во время ее работы, а также переналаживать ее без разгрузки от сырья и экстрагента и без потерь экстрагента в окружающую среду. На стадии ТП- полученную сумму экстрактивных веществ очищают от балластных веществ. Для этого 0,539 кг смолки растворяют при перемешивании в 1,078 л спирта этилового, подогретого до 60 С. Затем добавляют подогретую до 70 С дистиллированную воду в объемном соотношении спиртвода 21. Смесь тщательно перемешивают в течение 30 мин. и выдерживают при комнатной температуре без перемешивания в течение суток. В осадок выпадают балластные вещества. Водноспиртовой раствор отфильтровывают через фильтр при помощи вакуума, создаваемого в сборнике, в котором собирается фильтрат. Весь вышеописанный процесс повторяют три раза. Фильтрат из сборника переносят на ротационный испаритель, где под вакуумом при температуре 50- 52 С отгоняют спирт в виде азеотропной смеси с водой, содержащей 68-70 спирта. После окончания отгонки спирта водный раствор из колбы сливают в емкость. Выход смолки - 286 г. Стадия ТП. Смолку, полученную на стадии ТП-, делят методом колоночной хроматографии на колонке с силикагелем на индивидуальные компоненты. Систему элюируют бензолом. Наличие арглабина в бензольной фракции определяет по ТСХ на пластинках. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе ИР-10 под вакуумом и вновь используют в производстве в качестве элюента. После отгонки бензола из фракции, в колбе испарителя ИР-10 остается арглабин (технический продукт) с примесью желтого масла. На этой стадии получают 33,1 г. арглабина нативного, что составляет 11,7 от обработанной смолки. Стадия ТП- представляет процесс перекристаллизации арглабина. Для этого технический арглабин вносят в термоустойчивую круглодонную колбу объемом 0,5 л, растворяют в гексане (0,330 л) при нагревании на водяной бане при соотношении продукт (кг) - растворитель (л)110 и фильтруют под вакуумом. При охлаждении до комнатной температуры из фильтрата начинают выделяться кристаллы арглабина. Арглабин собирают после полного удаления гексана, выход его составляет 21 г (63 на данной стадии). Для получения диметиламиноарглабина на стадии - арглабин кристаллический (целевой продукт) растворяют в спирте. Затем, в спиртовой раствор добавляют диметиламин при постоянном контроле рН. РН раствора доводят до 12,30,1 (контроль по рН-метру). Далее из раствора отгоняют спирт и заливают хлороформ. Делительной воронкой отделяют основную массу воды. При извлечении продукта реакции хлороформом в верхнем (водном) слое над хлороформом остается значительное количество аминоарглабина, который перекристаллизацией дополнительно извлекают и используют для дальнейшего гидрохлорирования. Дополнительное извлечение аминоарглабина обеспечивает полный выход продукта. Следы оставшейся воды удаляют одним из осушителей (4 или 24) до полной прозрачности (выдерживают приблизительно 12-14 часов). Раствор фильтруют. Из полученного раствора выпаривают хлороформ и добавляют спирт. Затем раствор на стадии ТП- барботируют хлористым водородом до рН 5,0-6,60,5 (контроль по рН-метру). Из раствора выпаривают спирт и добавляют этилацетат. Выпадают кристаллы гидрохлорида 13 диметиламиноарглабина. Раствор выпаривают до полной сушки и получают субстанцию в виде порошка. Выход продукта составляет 100. На стадии ТП- гидрохлорид диметиларглабина (технический продукт) в хлороформе (0,1 л) в круглодонной колбе очищают дробной перекристаллизацией. Хлороформ отгоняют на ротационном испарителе ИР-10 и вновь используют в производстве. Оставшуюся смолку вносят в колбу, приливают к ней при интенсивном перемешивании этилацетат (0,83 л). Выпавший осадок отфильтровывают на вакуум-фильтре. Этилацетат после фильтрации собирают в сборнике и с помощью вакуума вновь переносят в колбу с целью дополнительного осаждения продукта. Выпавший продукт вновь отфильтровывают на фильтре. Фильтрат собирают в сборнике, отгоняют на ротационном испарителе и вновь используют в производстве. Осадок из фильтра (гидрохлорид диметиламиноарглабина) сушат в вакуум-пистолете и используют для получения препарата Арглабин-лиофилизированный(целевого продукта) составляет 20 г (95 от теоретического на данной стадии). На последней стадии ТП- полученный целевой продукт сушат над ангидроном под вакуумом растворяют апирогенной дистиллированной водой из расчета 2 г сухого вещества - 100 мл воды. Полученный раствор лиофилизируют одним из следующих способов. Способ 1. Полученный раствор пропускают через ватно-марлевый тампон в бачок фильтра Миллипор. Фильтруют раствор через стерильный фильтр Миллипор, заправленный фильтрующими пластинками, в стерильную стеклянную емкость. Раствор из стеклянной емкости засасывают с помощью вакуума в мерную бюретку, из нее разливают по флаконам по 2 мл и сушат в лиофилизаторе КС 30 или -45. Для этого флаконы помещают в лотки. Лотки после заполнения флаконами заворачивают в стерильную простыню и помещают в морозильный прилавок для закаливания при -40 оС не менее чем на 24 часа. После чего приступают к сушке препарата. Через 2 часа после начала сушки включают подогрев полок. Полки нагревают постепенно до 50 (5 С). Переход продукта с минусовой температуры на плюсовую происходит на 12-13 часу сушки. Конечная температура продукта не должна превышать 60 С. 5 13247 Продолжительность сушки - 24 часа. После лиофильной сушки флаконы с сухим препаратом немедленно закрывают пробками, покрывают их колпачками и завальцовывают. В каждом флаконе содержится по 0,04 г (0,00004 кг) препарата. Способ 2. Водный раствор фильтруют через ватно-марлевый тампон или 8 слоев марли, разливают по 2 мл по флаконам или ампулам и подвергают лиофилизации по вышеуказанному режиму. Флаконы с сухим препаратом немедленно закрывают пробками, покрывают их колпачками и завальцовывают. Ампулы запаивают. Флаконы или ампулы с препаратом укладывают в биксы или бязевые двухслойные мешки и стерилизуют в автоклаве в течение 20 минут при давлении 1,2 атм., температуре 120 С. В каждом флаконе (ампуле) содержится по 0,04 г (0,00004 кг) препарата. Способ 3. Приготовленный водный раствор фильтруют через ватно-марлевый тампон или 8 слоев марли, разливают в колбы емкостью 500 мл по 200 мл, закрывают ватно-марлевыми тампонами и завязывают пергаментной бумагой. Колбы с раствором стерилизуют в автоклаве при 1,2 атм., температуре 120 оС в течение 30 минут. Стерильный раствор охлаждают до комнатной температуры, стерильно разливают во флаконы емкостью 10 мл и сушат в лиофильной сушилке по вышеуказанному режиму. После лиофилизации в каждом флаконе содержится 0,04 г (0,00004 кг) препарата. Выход - 17 г, что составляет 88,2 на данной стадии и 0,22 в расчете на воздушно-сухое растительное сырье. Препарат Арглабинлиофилизированный представляет собой вещество бело-соломенного цвета, имеет горький вкус. Количественное определение арглабина проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Перекристаллизованный арглабин 50 мг (точная навеска) переносят в мерную колбу объемом 100 мл,доводят до метки метанолом. Полученный раствор фильтруют и анализируют методом ВЭЖХ в условиях жидкостной хроматограф фирмы(Швейцария), изократическое элюирование элюент метанол-вода (7525), колонкаС 18 (2504,6 мм, диаметр частиц - 5 мкм), температура колонки - 35 С, скорость потока - 0,5 мл/мин,абсорбционный УФ/Вид детектор с фотодиодной матрицей 6000 - сканирование в диапазоне длин волн 190-360 нм, дискретный канал 212 нм. Объем пробы - 20 мкл. Подсчет концентраций проводят по площадям пиков с помощью программного обеспеченияметодом абсолютной калибровки. Качественную и количественную идентификацию препарата Арглабин проводят согласно Фармакопейным статьям - ФС РК 42-244-99 ФС РК 42245- 99 по следующим параметрам подлинности,растворимости, удельному вращению, температуре плавления, прозрачности раствора, цветности раствора, механическим примесям, рН, определению массы содержимого флакона, средней массы, однородности, дозирования, стерильности. Первая фаза 6 клинических испытаний препарата Арглабин проведена на 53 больных с - стадией злокачественного процесса по 11 локализациям путем внутривенного введения препарата. В процессе проведения - фазы испытания выявлено, что препарат не обладает токсичностью, не оказывает угнетающее действие на кроветворение,не обладает иммунодепрессивным действием, что выгодно отличает его от ныне применяемых противоопухолевых препаратов.фаза клинических испытаний препарата проведена на 72 больных сстадией опухолевого процесса локализации. При этом получен объективный эффект у 32 (44,4), субъективный - у 20 (27,8),не получено эффекта - у 20(27,8). Препарат проявил более объективный эффект при раке печени, молочной железы, легких и яичников. При наличии асцита арглабин вводился внутрибрюшинно, при наличии плеврита - внутриплеврально в дозе от 240 до 400 мг с доведением суммарной дозы до 4,0-6,0 г. Определялись показатели иммунной системы у 57 больных в процессе получения арглабина. При этом выявлено, что Арглабин обладает иммуностимулирующим действием. Доказана эффективность лучевого лечения с Арглабином у больных местнораспространенным раком молочной железы при интратуморальном применении арглабина, полный ответ опухоли был отмечен в 53,3 случаев, частичная регрессия - в 36,7, в 10 - отмечена стабилизация процесса, ни у одной больной не было увеличения опухолевого узла. При стандартном лечении данные показатели составили 10, 50 и 33,3, у 6,7 больных отмечено прогрессирование процесса. Применение препарата Арглабин в монорежиме у больных раком легких вызывает в 87,6 случаев стабилизацию процесса и лишь в 13,3 случаев наблюдается прогрессирование процесса. Включение Арглабина в полихимиотерапию у больных раком легкого во всех случаях вызывает стабилизацию процесса(отчет Карагандинского областного онкологического центра прилагается). Препарат Арглабин является первым высокоэффективным отечественным противоопухолевым препаратом, который зарегистрирован в Госреестре РК (РК-ЛС-5- 003949, РК-ЛС-5- 003950) и включен в список жизненно-важных лекарственных средств РК и рекомендован Фармакологическим комитетом РК для широкого применения. Преимущества способа получения препарата Арглабинлиофилизированный 1. Для улучшения технологии производства арглабина предложена комплексная химическая переработка полыни гладкой с помощью установки для получения эфирного масла из растительного сырья(УЭМ-Э), которая обеспечивает увеличение выхода сесквитерпенового лактона арглабина до 1,01 на воздушно-сухое сырье, после предварительной отгонки эфирного масла за счет подачи пара при пониженной температуре под вакуумом удаляются компоненты летучей фракции и освобождается дос 13247 туп растворителя к местам локализации лактонов в сырье. 2. Для экстракции растительного сырья использована модернизированная установка УЭРС-8 М, в которой осуществляется эффективная конденсация паров хлороформа за счет изменения движения газов и использования в системе охлаждения хладогента - фреона 22 3. Предложено дополнительное, извлечение аминоарглабина на стадии ТП-, что способствует повышению выхода конечного продукта 4. Разработана и предложена методика определения количественного содержания арглабина методом ВЭЖХ 5. Качество препарата контролируется новыми способами согласно фармакопейным статьям (ФС РК-42-244-99 ФС РК-42-245-99). 13247 Способ получения противоопухолевого средства Арглабин-лиофилизированный, включающий экстрагирование растительного сырья полыни гладкой,очистку полученной смолки от балластных веществ,разделение методом колоночной хроматографии с получением арглабина технического, его перекристаллизацию, аминирование и гидрохлорирование с получением гидрохлорида диметиламиноарглабина,его перекристаллизацию, идентификацию и лиофилизацию, отличающийся тем, что растительное сырье полыни гладкой подвергают предварительной обработке с извлечением эфирного масла.