Способ получения гидрохлорида 1β,10β-эпокси-13-диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олида лиофилизированного, противоопухолевого средства “Арглабин” из растительного сырья, устройство для экстрагирования растительного сырья

(51)761 31/343,61 31/336, 61 35/00,01 11/02,11 1/10 ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОХЛОРИДА 1, 10-ЭПОКСИ-13-ДИМЕТИЛАМИНО-ГВАЙ 3(4)-ЕН-6,12-ОЛИДА ЛИОФИЛИЗИРОВАННОГО, ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО СРЕДСТВА АРГЛАБИН ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ,УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЭКСТРАГИРОВАНИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ(57) Изобретение относится к области сесквитерпеновых лактонов, в частности, к усовершенствованному способу получения гидрохлорида 1, 10 эпокси-3-диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олида лиофилизированного формулы (1),(1) обладающего противоопухолевой активностью и которое может быть использовано при создании новых препаратов для химиотерапии злокачественных опухолей. Способ получения нового противоопухолевого препарата на основе природного сесквитерпенового лактона заключается в следующем сухое измельченное сырье поступает в экстрактор, где непрерывно перемешивается с растворителем (получение смолки из растительного сырья). Затем полученную сумму экстрактивных веществ (смолку) очищают от балластных веществ. Для этого смолу вносят в специальный аппарат. В аппарат вливают из мерника 1,075 л спирта этилового, подогретого до 60 С, в котором смолку растворяют при перемешивании. Затем водно-спиртовый раствор фильтруется. На 3-й стадии смолку, полученную на стадии 2, делят методом колоночной хроматографии на колонке на индивидуальные компоненты. Следующая стадия представляет процесс перекристаллизации арглабина. 5-я стадия - процесс получения аминоарглабина. Вслед за реакцией аминирования аминоарглабин подвергают гидрохлорированию. Следующие операции - фильтрация, сушка. Затем полученный целевой продукт сушат над ангидроном под вакуумом, растворяют апирогенной дистиллированной водой из расчета 2 г сухого вещества - 100 мл воды. Полученный раствор лиофилизируют. Стерильный раствор охлаждают до комнатной температуры, стерильно разливают во флаконы и сушат в лиофильной сушилке. После лиофилизации в каждом флаконе содержится 0,04 г препарата. Качество субстанции и лекарственной формы контролируются методами ИК-спектроскопии, ТСХ, качественной реакцией, определением т. пл., удельного вращения. 10913 Изобретение относится к области сесквитерпеновых лактонов, в частности, к способу получения гидрохлорида 1, 10-эпокси-13-диметиламиногвай-3(4)-ен-6,12-олида лиофилизированного формулы (1),(1) обладающего противоопухолевой активностью и которое может быть использовано при создании новых препаратов для химиотерапии злокачественных опухолей. Изобретение представляет способ получения нового противоопухолевого препарата на основе природного сесквитерпенового лактона. Известен способ получения гидрохлорида 1,10-эпокси-13-диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12 олида лиофилизированного (предпатент РК 5277), включающий экстракцию растительного сырья (надземная часть. . ) хлороформом, очистку суммы экстрактивных веществ от балластных компонентов, разделение смолки на индивидуальные соединения методом колоночной хроматографии, в результате которой получают технический арглабин, который далее подвергают перекристаллизации, аминированию,гидрохлорированию с получением гидрохлорида диметиламиноарглабина и последующей его перекристаллизацией, сушкой, лиофилизацией и установлением подлинности препарата. Выход целевого продукта 90-95 . В предлагаемом способе получения гидрохлорида 1, 10-эпокси-13-диметиламино-гвай-3(4)-ен 6,12-олида лиофилизированного используется усовершенствованная установка УЭРС-8 для экстракции растительного сырья. Для получения аминопроизводного арглабина исходное кристаллическое вещество (арглабин) растворяют в спирте и добавляют в полученный спиртовый раствор диметиламин. Из раствора, содержащего продукт реакции, отгоняют спирт и оставшуюся массу заливают хлороформом,осушителем удаляют следы оставшейся воды, выпаривают хлороформ, добавляют спирт и барботируют хлористым водородом до рН раствора 5,0-5,5, выпаривают спирт и перекристаллизовывают из этилацетата, в результате получают гидрохлорид диметиламиноарглабина, который подвергают высушиванию и лиофилизации, затем устанавливают подлинность препарата. Выход конечного продукта - 95-100 . Известен секционный лопастной экстрактор для сухого растительного сырья непрерывного действия(а. с. СССР 1627208, кл. В 0111/02, 1991),включающий цилиндрический корпус, разделенный перегородками с перепускными окнами на не менее 2 чем на три секции, сепарационную и увлажнительные камеры, соосный с корпусом вал с закрепленными на нем перегрузочными ковшами и лопастными мешалками, загрузочное устройство. В данном устройстве не предусмотрены обогрев экстракционной смеси и поддержание постоянной температуры,удаление экстрагента из шрота, что снижает эффективность процесса экстракции, приводит к потере экстрагента, снижению производительности, увеличению расхода энергии. В разработанном нами устройстве экстрактор снабжен дополнительной секцией с обогреваемыми стенками для удаления экстракта из шрота и сборником сухого шрота, стенки контактных секций выполнены водоохлаждаемыми, причем полости охлаждающих рубашек верхней части стенок, контактирующий с экстракционной смесью, не сообщены между собой и к полости экстрактора присоединена система циркуляции газов, включающая патрубок подвода газа, присоединенный к сборнику сухого шрота, низкотемпературный конденсатор и вентилятор, при этом в сепарационной камере размещен шнек, соединенный с валом экстрактора, а перегородка между сепарационной и увлажнительными камерами выполнена с дополнительным пропускным окном в верхней ее части. При использовании данного устройства повышается эффективность процесса экстракции, снижается энергопотребление и потери экстрагента в окружающую среду, увеличивается выход суммы экстрактивных веществ. Предложенный способ включает следующее. Стадия ТП- (получение смолки из растительного сырья) осуществляется в экстракционной установке УЭРС-8 (фиг. 1, приложение). Установка состоит из противоточного секционного экстрактора 1 непрерывного действия, продолжением которого является сушилка 2 с общим приводом 3. На экстракторе 1 установлено загрузочное устройство, состоящее из промежуточного бункера 4, питателя 5 с приводом 6 и канала 7. На промежуточный бункер 4 устанавливается сменная емкость 8 с сырьем, в качестве которой используется стандартный крафт-мешок. Насос 9 предназначен для подачи экстракта из экстрактора 1 в фильтрующую центрифугу 10, установленную на экстракторе. Для сгущения экстракта предназначен испаритель 11 пленочного типа со встроенным парогенератором. Сгущенный экстракт из испарителя 11 периодически сливается в сменные емкости 12. На испарителе 11 установлен водоохлаждаемый конденсатор 13. Экстрактор 1 оборудован системой газоудаления, состоящей из конденсатора 14, охлаждаемого водой, вымораживателя 15, который одновременно является испарителем фреоновой холодильной машины 16, в качестве которой использован холодильный агрегат от бытового холодильника,и вентилятора 17. Сброс газов, удаляемых из экстрактора и очищенных от паров экстрагента, осуществляется в систему вытяжной вентиляции помещения. 10913 Отработанный и высушенный шрот собирается в легкосъемную сменную емкость 18, в качестве которой также используется стандартный крафт-мешок. Буферный бак 19 предназначен для сбора дистиллированного экстрагента из конденсатора 13 и подачи его в экстрактор. Бак 19 оборудован уровнемером,расходомером и регулятором расхода экстрагента. Приборы управления, регулирования, контроля,сигнализации и защиты установки смонтированы на пульте 20. Все аппараты установки работают под разряжением, что исключает попадание паров экстрагента в помещение. Все составные части установки смонтированы на общей раме. Сухое измельченное растительное сырье (цветочные корзинки и листья полыни гладкой -. . ) непрерывно из сменной емкости 8 ссыпается в промежуточный бункер 4, откуда питателем 5, производительность которого регулируется в широких пределах, равномерно ссыпается через канал 7 в первую секцию экстрактора 1, где интенсивно перемешивается с экстрагентом, и начинается процесс экстракции. Сырье постепенно продвигается по экстрактору, последовательно проходя три ступени экстрагирования, и перегружается в сушилку 2. Чистый экстрагент из бака 19 подается в конец последней ступени экстрактора и движется против движения сырья к первой ступени, экстрагируя целевые вещества из сырья. Экстракт (экстрагент, насыщенный экстрагируемыми веществами),пройдя отстойник, расположенный в начале первой ступени экстрактора, выводится из экстрактора и насосом 9 подается в испаритель 11 для сгущения. Отцентрифугированные частицы (осадок) из экстракта сбрасываются из центрифуги 10 в последнюю ступень экстрактора. Нижняя часть экстрактора в области экстракционной смеси оборудована водяной рубашкой, что позволяет поддерживать заданную температуру экстракции. Получение Арглабина - лиофилизированного проходит по следующей схеме производства Шрот, насыщенный экстрагентом, из экстрактора 1 перегружается в сушилку 2, стенки которой обогреваются электронагревателями. В сушилке шрот также интенсивно перемешивается, контактирует с горячими стенками, при этом экстрагент испаряется и пары его поступают в паровое пространство (верхнюю часть) экстрактора. Шрот в сушилке постепенно перемещается в противоположный конец сушилки, где он проветривается горячим воздухом для замещения паров экстрагента в порах шрота воздухом и выгружается в сменную емкость 18. Стенки парового пространства экстрактора охлаждаются водой, в результате чего на них конденсируются пары экстрагента, поступающие из сушилки 2, а конденсат стекает в экстракционную смесь. Большая часть паров конденсируется в третьей(промывочной) ступени экстрактора, в результате чего в ней поддерживается низкая концентрация экстрагируемых веществ, что способствует более полному извлечению их из шрота. Неконденсируемые газы (воздух, поступающий в экстрактор с сырьем в его порах, и воздух, подаваемый на проветривание в сушилку) поступают в конденсатор 14, охлаждаемый водой, где избыток паров экстрагента, несконденсировавшихся на стенках экстрактора, конденсируются. Далее газы поступают в вымораживатель 15, температура стенок которого поддерживается на уровне отрицательных температур -15-20 оС холодильной машиной 15, за счет чего на них конденсируются оставшиеся в газах пары экстрагента. Далее газы, практически полностью освобожденные от паров экстрагента, вентилятором 17 сбрасываются в общую систему вентиляции помещения. Вентилятор 17 обеспечивает разряжение в полостях экстрактора 1, сушилки 2 и других аппаратах, связанных с ними, благодаря чему исключается проникновение паров экстрагента в помещение. В течение рабочего дня нарабатывается 0,539 кг смолки (суммы экстрактивных веществ), что составляет 7 в пересчете на сухое сырье. Наработанная 10913 смолка передается на стадию ТП-, где подвергается очистке от балластных веществ. В применяемой на данной стадии экстракционной установке управление работой и контроль основных ее параметров осуществляется с пульта 20. Все аппараты установки работают под разряжением,что исключает попадание паров экстрагента в помещение. Установка снабжена системами управления, регулирования, контроля и сигнализации основных параметров установки. Кроме того, в установке использованы следующие автоматические системы система автоматического поддержания температуры экстракционной смеси, включающая электроконтактный термометр и электромагнитный клапан система поддержания температуры стенок в сушилке раздельно по секциям электронагревателя, включающая биметаллические реле и контакторы и автоматическое переключение фильтров центрифуги, включающее реле времени, конечные выключатели, сервопривод и реверсивный магнитный пускатель. Основные электродвигатели в установке, нагреватель сушилки и парогенератор испарителя имеют максимальную и тепловую защиту от перегрузки и короткого замыкания. Электропитание всей установки в целом также защищено автоматическим выключателем с максимальным и тепловым размыкателем. Установка смонтирована на собственной раме и не требует специального фундамента. Обслуживание установки в работе осуществляется одним-двумя операторами, имеющими специальную подготовку. Конструкция установки позволяет без ее разборки освобождать установку полностью от экстрагента без потерь в окружающую среду и почти полностью(на 95-98 ) от сырья при подготовке ее к профилактическому ремонту или смене сырья и экстрагента. Конструкция установки позволяет наблюдать за ходом процесса в экстракторе и сушилке во время ее работы, а также переналаживать ее без разгрузки от сырья и экстрагента и без потерь экстрагента в окружающую среду. На стадии ТП- полученную сумму экстрактивных веществ очищают от балластных веществ. Для этого смолу вносят в аппарат, снабженный рубашкой для обогрева, мешалкой, обратным холодильником, люком для разгрузки смолки и мытья аппарата,гильзой для термометра, двумя верхними и одним нижним штуцерами. В аппарат вливают из мерника 1,078 л спирта этилового, подогретого до 60 С, в котором смолку растворяют при перемешивании. Для поддержания заданной температуры (60 С) в рубашку аппарата подается горячая вода. Затем из второго мерника в аппарат заливается подогретая до 70 С дистиллированная вода в объемном соотношении спирт вода 21. Смесь тщательно перемешивается в течение 30 мин и выдерживается при комнатной температуре без перемешивания в тече ние суток. На дно аппарата выпадают в осадок балластные вещества. Спустя сутки осадок взбалтывают мешалкой, и водно-спиртовый раствор отфильтровывается через керамический фильтр, встроенный в штуцер нижнего спуска. Процесс фильтрации осуществляется при помощи вакуума, создаваемого в сборнике, в котором собирается фильтрат. После окончания фильтрации вентиль нижнего спуска аппарата закрывают, в аппарат подают подогретый до 60 С спирт из первого мерника, растворяют в нем при перемешивании оставшийся после фильтрации балласт, добавляют горячую дистиллированную воду (70 С), технический раствор(отход данной стадии), и весь вышеописанный процесс повторяется дважды. Фильтрат из сборника переносят на ротационный испаритель, где под вакуумом при температуре 5052 С отгоняют спирт в виде азеотропной смеси с водой, содержащей 68-70 спирта. После окончания отгонки спирта водный раствор из колбы сливают в емкость. Выход смолы - 286 г. Стадия ТП-. Смолку, полученную на стадии ТП-, делят методом колоночной хроматографии на колонке на индивидуальные компоненты. Из третьего мерника в колонку по трубопроводу через верхний штуцер под давлением подается бензол. Давление в третьем мернике создается инертным газом. Из колонки бензол выходит через нижний штуцер по трубопроводу и собирается в двух сборниках. В первом сборнике собираются фракции бензола, не содержащие арглабин. А во втором сборнике - фракции, содержащие арглабин. Наличие арглабина в бензольной фракции определяется по ТСХ на пластиках . Для чего на трубопроводе нижнего спуска перед разводкой в сборники имеется пробоотборник. Растворитель из обоих сборников отгоняется по отдельности на ротационном испарителе И-10 под вакуумом, вновь используется в производстве в качестве элюента. После отгонки бензола из фракций, собранных во втором сборнике, в колбе испарителя ИР-10 остается арглабин (технический продукт) с примесью желтого масла. На этой стадии получается 33,1 г арглабина технического, что составляет 11,7 от обработанной смолки. Стадия ТП- представляет процесс перекристаллизации арглабина. Для этого технический арглабин вносится в термоустойчивую круглодонную колбу объемом 0,5 л, растворяют в гексане (0,330 л) при нагревании на водяной бане при соотношении продукт (кг) - растворитель (л)110 и фильтруется под вакуумом. При охлаждении до комнатной температуры из фильтрата начинают выделяться кристаллы арглабина. Арглабин собирают после полного удаления гексана, выход его составляет 21 г (63 на данной стадии). Для получения диметиламиноарглабина на стадии ТП- арглабин кристаллический (целевой продукт) растворяют в спирте. Затем в спиртовой раствор добавляют диметиламин при постоянном кон 5 10913 троле рН. Н раствора доводят до 12,30,1 (контроль по рН-метру). Далее из раствора отгоняют спирт и заливают хлороформ. Делительной воронкой отделяют основную массу воды. Следы оставшейся воды удаляют одним из осушителей (4 или 24) до полной прозрачности (выдерживают приблизительно 12-14 часов). Раствор фильтруют. Из полученного раствора выпаривают хлороформ и добавляют спирт. Затем раствор на стадии ТП- барботируют хлористым водородом до рН 5,0-5,5 (контроль по рН-метру). Из раствора выпаривают спирт и добавляют этилацетат. Выпадают кристаллы гидрохлорида 13 диметиламиноарглабина. Раствор выпаривают до полной сушки и получают субстанцию в виде порошка. Выход гидрохлорида 13 диметиламиноарглабина составляет 100 . На стадии ТП- гидрохлорид диметиларглабина (технический продукт) в хлороформе (0,1 л) в круглодонной колбе очищают дробной перекристаллизацией. Хлороформ отгоняют на ротационном испарителе ИР-10 и вновь используют в производстве. Оставшуюся смолку вносят в аппарат, приливают к ней при интенсивном перемешивании этилацетат (0,83 л). Выпавший осадок отфильтровывают на вакуумфильтре. Этилацетат после фильтрации собирают в сборнике и с помощью вакуума вновь переносят в аппарат, в рубашку которого подается холодная вода для охлаждения маточника с целью дополнительного осаждения продукта. Выпавший продукт вновь отфильтровывают на фильтре. Фильтрат собирают в сборнике, отгоняют на ротационном испарителе и вновь используют в производстве. Осадок из фильтра (гидрохлорид диметиламиноарглабина) сушат в вакуум-пистолете и используют для получения препарата Арглабин-лиофилизированный (стадия ТП). Выход гидрохлорида диметиламиноарглабина(целевого продукта) составляет 20 г (95 от теоретического на данной стадии). На последней стадии ТП- полученный целевой продукт сушат над ангидроном под вакуумом растворяют апирогенной дистиллированной водой из расчета 2 г сухого вещества - 100 мл воды. Полученный раствор лиофилизируют одним из следующих способов. Способ 1. Полученный раствор пропускают через ватно-марлевый тампон в бачок фильтра Миллипор. Фильтруют раствор через стерильный фильтр Миллипор, заправленный фильтрующими пластинками, в стерильную стеклянную емкость. Раствор из стеклянной емкости засасывают с помощью вакуума в мерную бюретку, из нее разливают по флаконам по 2 мл и сушат в лиофилизаторе КС-30 или -45. Для этого флаконы помещают в лотки. Лотки после заполнения флаконами заворачивают в стерильную простыню и помещают в морозильный прилавок для закаливания при -40 С, не менее чем на 24 часа. После чего приступают к сушке препара 6 та. Через 2 часа после начала сушки включают подогрев полок. Полки нагревают постепенно до 50(5 С). Переход продукта с минусовой температуры на плюсовую происходит на 12-13 часу сушки. Конечная температура продукта не должна превышать 60 С. Продолжительность сушки - 24 часа. После лиофильной сушки флаконы с сухим препаратом немедленно закрывают пробками, покрывают их колпачками и завальцовывают. В каждом флаконе содержится по 0,04 г (0,00004 кг) препарата. Способ 2. Водный раствор фильтруют через ватно-марлевый тампон или 8 слоев марли, разливают по 2 мл по флаконам или ампулам и подвергают лиофилизации по вышеуказанному режиму. Флаконы с сухим препаратом немедленно закрывают пробками, покрывают их колпачками и завальцовывают. Ампулы запаивают. Флаконы или ампулы с препаратом укладывают в биксы или бязевые двухслойные мешки и стерилизуют в автоклаве в течение 20 минут при давлении 1,2 атм., температуре 120 С. В каждом флаконе (ампуле) содержится по 0,04 г(0, 00004 кг) препарата. Способ 3. Приготовленный водный раствор фильтруют через ватно-марлевый тампон или 8 слоев марли, разливают в колбы емкостью 500 мл по 200 мл, закрывают ватно-марлевыми тампонами и завязывают пергаментной бумагой. Колбы с раствором стерилизуют в автоклаве при 1,2 атм., температуре 120 С в течение 30 минут. Стерильный раствор охлаждают до комнатной температуры, стерильно разливают во флаконы емкостью 10 мл и сушат в лиофильной сушилке по вышеуказанному режиму. После лиофилизации в каждом флаконе содержится 0,04 г (0,00004 кг) препарата. Выход - 17 г, что составляет 88,2 на данной стадии и 0,22 в расчете на воздушно-сухое растительное сырье. Препарат Арглабинлиофилизированный представляет собой вещество бело-соломенного цвета, имеет горький вкус. Для установления подлинности препарата определяют температуру плавления (182-185 С), снимают ИК-спектр, контроль осуществляют по ТСХ. Стандартизацию препарата Арглабин осуществляют по следующим параметрам подлинность,температура плавления, удельное вращение, прозрачность раствора, окраска, рН, посторонние примеси, количественное определение. Противоопухолевая активность и токсичность субстанции и лекформы препарата гидрохлорида диметиламиноарглабина определяются по общепринятым методикам. Острая токсичность заявляемого соединения (1) 1,10-эпокси-13-диметиламино-гвай-3(4)-ен,12 олида (гидрохлорид диметиламиноарглабина) для мышей составляет 190-220 мг/кг, для крыс - 280310 мг/кг. Хроническая токсичность. Максимально переносимая доза (МПД) гидрохлорида диметиламиноарглабина в растворе диметилсульфооксида при еже 10913 дневном внутрибрюшинном введении в течение 5 дней составляет для мышей 30 мг/кг, для крыс 50 мг/кг. Противоопухолевая активность. Гидрохлорид диметиламиноарглабина в МПД (30 и 50 мг/кг) значительно тормозит рост карциносаркомы Уокера(76,1 торможения роста опухоли), карциномы Герена (86,5 ), саркомы 45 (83,1 ), альвеолярного рака печени (80 ). Заявляемое вещество в МПД вызывало выраженный противоопухолевый эффект в отношении лимфосаркомы Плисса, резистентной к проспидину(87,4 , Р 0,001). При сравнении структурный аналог предлагаемого вещества 1, 10-эпокси-гвай-3(4), 11(13)-диен 6,12-олид проявляет слабую противоопухолевую активность ингибирует рост штаммов саркомы 45(32,1), лейкоза Р-388 (43 -УПЖ), -1210 (34 УПЖ), а также лимфосаркомы Плисса, резистентной к проспидину (31 ) и саркомы 45, резистентной к сарколизину (59,7 ). Сопоставление активности предлагаемого соединения (1) с аналогом по назначению - колхамином,препаратом растительного происхождения, широко применяемым в химиотерапии опухолей, показывает, что колхамин более токсичен - МПД составляет 2 мг/кг. В МПД колхамин слабо ингибирует рост лимфосаркомы Плисса (54,4 ), рака молочной железы (49,3 ), саркомы 45 (23,4 ), слизистого рака печени и саркомы М-1 (14,9). Иммунологические свойства изучаются в сыворотке крови крыс линии Август (массой 140-160 г) и у интактных крыс с перевиваемой лимфосаркомой Плисса. Использовали некоторые иммунологические реакции спонтанного розеткообразования (В-РСК) по А.И. Черодееву восстановления нитросинего тетразолия (НСТ) по С.Д. Дуглас, П.П. Кун и Б.С. Ногаеву, М.Г. Жубач гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) по А.В. Петрову, Р.М. Хайтову гемагглютинации (РГА) по Э. Зигль. Данные показатели определяли в динамике до (фоновой) и в процессе курса введения Арглабинлиофилизированный (2 водного раствора) через 5,10 суток и после его окончания (через 4 суток). 2 водный раствор Арглабин-лиофилизированный вводили внутрибрюшинно ежедневно в течение 10 суток в разовой дозе 50 мг/кг (максимально переносимая). Результаты экспериментов показали, что препарат оказывал разнонаправленное действие на различные иммунологические показатели у интактных крыс он стимулировал РГЗТ (153-207), но снижал показатели Е-РОК (64-84), НСТ-теста (67-91) и РГА (43-53). В опытах на крысах с лимфосаркомой Плисса он не проявлял иммунодепрессивного действия. Напротив, у животных-опухоленосителей препарат стимулировал иммунную систему, достоверной величины всех исследованных показателей после курса терапии арглабином Е-РОК - на 94,8162,5 , НСТ-теста - 79,2-175,4 РГЗТ 84,9132,2 , РГА - 82,8-142,6 . Следует отметить, что данный опухолевый штамм - лимфосаркома Плисса высокочувствительна к испытуемому арглабину. При развитии же опухоли снижается иммунологическая реактивность организма животных. Комбинированная терапия Арглабин-лиофилизированный с иммунодепрессантами цитостатиками 5 фторурацилом или сарколизином позволила повысить значения исследуемых иммунологических показателей леченых крыс с лимфосаркомой Плисса(арглабин 5-фторурацил) и саркомой 45 (арглабинсарколизин). Таким образом, Арглабин-лиофилизированный в условиях интактного организма крыс стимулировал РГЗТ, но снижал значения Е-РОК, НСТ-теста и РГА. На крысах - опухоленосителях препарат оказался способным снимать опухолевую иммунодепрессию, то есть проявил иммуностимулирующие свойства и, кроме того, арглабин смягчает иммунодепрессивный эффект известных цитостатиков (5 фторурацила и сарколизина). Антимикробная активность препарата исследована на штаммах,,,,, ,с белым и оранжевым пигментами. Клиническая апробация препарата Арглабинлиофилизированный проводилась в Карагандинском межобластном онкоцентре на ограниченном контингенте больных согласно решению Фармкомиссии Минздрава РК 11-10 от 11.12.91 г. и Фармкомитета МЗ РК пр.1143 от 04.05.94 г. Результаты клинических испытаний прилагаются (отчет по результатамфазы клинического испытания противоопухолевого препарата Арглабин). Определена максимально переносимая доза, побочное и токсическое действие, противоопухолевая активность препарата. Результатыфазы клинического испытания арглабина на 53 больных показали, что 2 водный раствор препарата не обладает токсичностью, не оказывает угнетающего действия на кроветворение,что выгодно отличает его от ныне применяемых противоопухолевых препаратов. В клинике определены максимально переносимые (480 мг) и среднетерапевтические (240-260 мг) дозы препарата.фаза проводилась на 72 больных систадией опухолевого процесса различной локализации. Среди них мужчин было 44 (62,1 ), женщин - 28(38,9 ). Больные получали внутривенно по 240 мг водного раствора арглабина на протяжении 25-30 дней. При наличии объективного эффекта отдельные больные получали от 3-х до 5 курсов лечения с перерывом 1-1,5 месяца. С диагнозом первичный рак печени получали лечение 12 больных. Из них у 10 получен объективный эффект, проявляющийся в быстром уменьшении размера печени, улучшении состояния больного,7 10913 улучшении показателей биохимии, общего анализа крови и иммунного статуса. При этом было обнаружено небольшое уменьшение размера опухоли или процесс оставался в стабильном состоянии и прекращался дальнейший рост опухоли. По поводу рака толстой и прямой кишки получили арглабин 7 больных и из них объективный эффект получен у 3-х, субъективный - у 2-х больных. По поводу рака яичника получили препарат 3 больных и у всех получен объективный эффект в виде прекращения накопления асцитической жидкости и уменьшения размера опухоли на 30-40 у двух больных. Непосредственный эффект монохимиотерапии арглабином оценивался по шкале Карновского. Побочных эффектов при использовании арглабина у больных не отмечено. Из числа больных, получивших арглабин, иммунологически обследовано 57. Эти больные были со следующими диагнозами рак печени, легкого, молочной железы, желудка, прямой кишки, пищевода,ободочной кишки, головного мозга. Для оценки иммунного статуса экспресс-методом определялись показатели клеточного и гуморального иммунитета (всего 11 показателей на одного больного). Результаты исследования показали, что на 2-5 день от начала введения арглабина происходило достоверное снижение процентного содержания Тлимфоцитов, снижалось количество теофиллинрезистентных лимфоцитов, происходило снижение адгезионной и фагоцитарной активности нейтрофилов,возрастало количество недифференцированных нулевых клеток, популяцию которых составили как старые, так и незрелые В- и Т-лимфоциты, натуральные киллеры. Сдвиги в гемограмме были незначительными. Начиная с 6-10 дня введения препарата практически все показатели возвращались к исходным значениям. Через 2 недели наблюдалась тенденция к увеличению процентного содержания Т-лимфоцитов и их теофиллинрезистентной популяции (Т-хелперы),снизилось содержание В-лимфоцитов. Уровень сывороточных иммуноглобулинов практически не изменялся в эти сроки лечения. По окончании курса наблюдалось статистически незначительное увеличение процентного содержания Т-лимфоцитов, достоверное увеличение их абсолютного количества, а также увеличение теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов, повышение фагоцитарной активности нейтрофилов. Наметилась тенденция к увеличению абсолютного количества Влимфоцитов, а также увеличение количества иммуноглобулинов А, М, О. Уменьшилось количество нулевых клеток. В периферической крови увеличилось общее количество лимфоцитов. Такая отчетливая картина отмечалась при первых курсах, при последующих она была менее выражена. Таким образом, сопоставляя данные, полученные различными методами статистической обработки,можно оценить влияние арглабина на состояние иммунной системы как с позиций стимуляции некоторых факторов иммунитета, так и с позиций влияния его на функциональное состояние иммунной системы, что свидетельствует о его иммуномодулирующем эффекте. Вторая фаза изучения противоопухолевого действия препарата арглабин показала, что препарат не вызывает побочных эффектов, практически не угнетает гемопоэз, нормализует функциональное состояние иммунной системы. Таким образом, из 72 больных злокачественным процессомистадией с локализацией опухоли в различных органах, при лечении препаратом арглабин, получен объективный эффект у 32 (44,4 ),субъективный у 20 (27,8 ), эффекта не получили у 20 (27,8 ). Как цитостатик препарат дал более эффективный объективный результат при раке печени, молочной железы, легкого и яичника. Преимущества способа получения препарата Арглабин-лиофилизированный 1. Для экстракции растительного сырья используется более усовершенствованная установка УЭРС 8, которая обеспечивает непрерывность процесса экстрагирования 2. Качество субстанции и лекарственной формы контролируют новыми способами ИКспектроскопией, ТСХ, качественной реакцией, определением т. пл., удельного вращения 3. Простой и доступный способ получения - синтез в две стадии с применением диметиламина при выходе целевого продукта 4. Контроль хода реакции гидрохлорирования осуществляют по рН-метру, что позволяет обеспечить выход целевого продукта до 1005. Доступность реагентов - диметиламина ихлористого водорода. Преимущества препарата Арглабин 1. Водорастворимость препарата, имеющее важное значение при подготовке рациональной прописи лекарственной формы применения препарата 2. Высокая противоопухолевая активность в эксперименте на животных заявляемого препарата в отношении злокачественных опухолей карциномы Уокера, карциномы Герена, лимфосаркомы Плисса,РС-1, саркомы 45, альвеолярного рака печени, а также лимфосаркомы Плисса, резистентной к проспидину, и саркомы 45, резистентной к сарколизину 3. Противоопухолевое действие проявляется в МПД 30 и 50 мг/кг, при которой широко используемый в онкологической практике растительный препарат колхамин не применим из-за высокой токсичности (МПД - 2 мг/кг), а структурный аналог анобин обладает слабой противоопухолевой активностью в 10913 отношении вышеуказанных штаммов злокачественных опухолей 4. Практическая доступность исходного для синтеза соединения арглабина, который является основным химическим компонентом полыни гладкой, а также может быть получен синтетическим путем 5. Препарат на крысах-опухоленосителях оказался способным снимать опухолевую иммунодепрессию, т. е. проявил иммуностимулирующие свойства. Кроме того, Арглабин-лиофилизированный смягчает иммунодепрессивный эффект известных цитостатиков (5-фторурацил и сарколизин) 6. Проявляет антимикробную активность в отношении грамм-положительных и граммотрицательных микроорганизмов 7. В клинике определены максимально переносимые (480 мг) и среднетерапевтические(240260 мг) дозы препарата. 2 водный раствор препарата не обладает токсичностью, не оказывает угнетающее действие на кроветворение, что выгодно отличает его от ныне применяемых противоопухолевых препаратов 8. Препарат не вызывает побочных эффектов,практически не угнетает гемопоэз, нормализует функциональное состояние иммунной системы 9. Как цитостатик препарат дал более объективный результат при раке печени, молочной железы,легкого и яичника 10. Иммуномодулирующий эффект препарата в клинике. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ получения гидрохлорида 1,10 эпокси-13-диметиламино-гвай-3(4)-ен-6,12-олида лиофилизированного, противоопухолевого средства из полыни гладкой (. . ),включающий экстрагирование смолки из исходного сырья, очистку от балластных веществ, разделение смолки на индивидуальные компоненты методом колоночной хроматографии с получением арглабина технического, который подвергают перекристаллизации, аминированию и гидрохлорированию с получением гидрохлорида диметиламиноарглабина и последующую его перекристаллизацию, сушку, лиофилизацию и качественную идентификацию, отличающийся тем, что аминирование проводят путем растворения арглабина кристаллического в спирте с добавлением в полученный спиртовый раствор диметиламина до достижения рН раствора 12,3-12,4, а для получения гидрохлорида диметиламиноарглабина из раствора предыдущей стадии, содержащего диметиламиноарглабин, отгоняют спирт и заливают хлороформом, удаляют оставшуюся воду, раствор фильтруют, выпаривают хлороформ и добавляют спирт, затем раствор барботируют хлористым водородом до достижения рН раствора 5,0-5,5, выпаривают спирт и добавляют этилацетат. 2. Устройство для экстрагирования растительного сырья, представляющее собой горизонтальный экстрактор, включающий цилиндрический корпус,разделенный перегородками с перепускными окнами на не менее чем три контрактные секции, сепарационную и увлажнительную камеры, соосный с корпусом вал с закрепленными на нем перезагрузочными ковшами и лопастными мешалками, загрузочное устройство, отличающееся тем, что экстрактор снабжен дополнительной секцией с обогреваемыми стенками для удаления экстракта из шрота и сборником сухого шрота, стенки контактных секций выполнены водоохлаждаемыми, причем полости охлаждающих рубашек верхней части стенок, контактирующей с парогазовой средой, и нижней части стенок, контактирующей с экстракционной смесью, не сообщены между собой, при этом к полости экстрактора подсоединена система циркуляции газов, включающая патрубок подвода газа, присоединенный к сборнику сухого шрота, патрубок отвода газов, присоединенный к полости контактной секции экстрактора, низкотемпературный конденсатор и вентилятор, при этом в сепарационной камере размещен шнек, соединенный с валом экстрактора, а перегородка между сепарационной и увлажнительной камерами выполнена с дополнительным перепускным окном в верхней ее части.