Иммобилизованный биопрепарат – пробиотик “Рисо-Лакт”

(51) 61 35/74 (2006.01) А 61 К 35/20 (2006.01) А 61 К 31/70 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН-1,АА-1,-2 в титре 108-1010 КОЕ/мл в соотношении 211,иммобилизованные на носителе-сорбенте. В качестве сорбента используют углеродный материал зауглероженную рисовую шелуху. Иммобилизованный биопрепарат-пробиотик Рисо-Лакт включающий носитель-сорбент, клетки эубиотиков и защитную среду (желатин, сахарозу и молоко). При следующем соотношении в мас. клетки эубиотиков с титром 108-1010 КОЕ/г - 1,0-10,0 носитель-сорбент в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером 0,11,0 мм - 1,0-10,0 желатин - 15,0-20,0 сахароза - 5,010,0 молоко - 50,0-75,0. Иммобилизованный комплексный биопрепаратпробиотик Рисо-Лакт, имеет более длительный срок хранения и эффективное пролонгированное лечебно-профилактическое действие на всех участках желудочно-кишечного тракта за счет высокой колонизационной активности.(72) Савицкая Ирина Станиславовна Жубанова Ажар Ахметовна Кистаубаева Аида Сериковна Шупшибаев Казбек Камалиевич(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Казахский национальный университет им. аль-Фараби(57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к биопрепаратам микробиологического и медицинского назначения. Использование энтеросорбентов в качестве носителя для прикрепления пробиотических микроорганизмов может обеспечить решение комплексной задачи - детоксикации желудочно-кишечного тракта и нормализации его микроэкологии. Препарат включает носитель, представляющий собой сорбент, и живые клетки пробиотиков 21917 Изобретение относится к биотехнологии, а именно к биопрепаратам микробиологического и медицинского назначения. Использование энтеросорбентов в качестве носителя для прикрепления пробиотических микроорганизмов может обеспечить решение комплексной задачи - детоксикации желудочно-кишечного тракта и нормализации его микроэкологии. Известны различные типы активных углей,например, карболонг, микросорб, и т.д. (Сенов П.Л. Фармацевтическая химия.М. Медицина, 1978,с.132-133 патент РФ 2029546, МПК 6 А 61 К 9/16,опубл. 27.02.95 г.), карбонизованные плодовые косточки и зауглероженная рисовая шелуха, природные материалы и их аналоги (кристаллическая микроцеллюлоза, цеолиты, хитозаны, пектины и т.д.), синтетические минеральные сорбенты и другие материалы, которые используются для очищения организма от шлаков, радионуклидов, тяжелых металлов и токсинов. Энтеросорбенты снижают эффекты экзо- и эндотоксикозов. Однако энтеросорбенты не устраняют причин,вызывающих эффекты экзо- и эндотоксикозов, как правило, они не селективны, работают в основном на избыток субстрата, могут оказывать негативное действие из-за сорбции нужных для организма метаболитов (витаминов, гормонов) и не обеспечивают активно нормализацию микробиоценоза. Известен пробиотик бифидумбактерин-форте,содержащий лиофилизированную биомассу бифидобактерий 106-109 КОЕ/мл бифидогенный компонент (лактозу или фруктоолигосахарид) -100987 мг/мл иммобилизатор(носитель активированный уголь) - 10-41 мг/мл желатин - 0,2-1,5 мг/мл сахароза - 2,0-1,5 мг/мл. Дозированная лекарственная форма выполнена в виде таблеток или капсул, покрытых гастростойким покрытием из шеллака или ацетилфталилцеллюлозы. Недостатком данного препарата являются противопоказания при лактопатии. Известен биопрепарат - пробиотик Экофлор в сухой иммобилизированной форме, содержащий аминокислоты (мг/100 г сухой биомассы) глутаминовая кислота- 15,0-68,0 глутамин - 8,0-20,0 лейцин - 10,0-50,0 аргинин - 20,0-30,0 цистеин- 50,0-80,0 Клетки эубиотиков - бифидобактерий В.1 или В.1, 791 или ЛВА-3 или В.379 или В.-42 в титре 108-1010 КОЕ/г защитную среду на основе желатина 0,1-10,0 иммобилизированные на сорбенте СУМС(модифицированный углеродом) -остальное до 100. (Патент 2164801, МПК А 61 К 35/74,опубл. 10.04.2001). Однако в состав биопрепарата входит среда на молочной основе, которая нестандартна, и, как правило, содержит следы антибиотиков и гормонов,что может вызывать побочное действие. Кроме того,биопрепарат имеет противопоказания для приема он не рекомендуется при лактозопатии, а также для приема ослабленным детям, т.к. сорбенты адсорбируют на свою поверхность витамины группы В и С. Известен бактериальный препарат бифидумбактерин сухой, содержащий высушенную культуру В.1, 791 - 106-107 КОЕ/мл в защитной среде желатин - 0,5 - 2,5 мг/мл сахароза - 0,5 - 2,5 мг/мл молоко обезжиренное - 2,5-5,0 мл. (Регламент производства бифидумбактерина 557-96). Препарат бифидумбактерин сухой, полученный по этой технологии, широко используется в медицинской практике. Однако недостатком данного препарата является невысокое содержание живых бифидобактерий в дозе. Кроме того, в состав препарата входит освобожденная от метаболитов биомасса, вследствие чего бифидобактерий быстро теряют жизнеспособность,что снижает стабильность и эффективность препарата. Известен препарат-пробиотик в иммобилизованной форме, включающий носитель,представляющий собой сорбент, и клетки эубиотиков, иммобилизованные на носителе энтеросорбент типа СУМС-1, причем клетки эубиотиков используют совместно с питательной средой, а в качестве сорбента используют материал с антацидными свойствами, развитой мезо- и макропористой структурой и объемом макропор не менее 0,01 см 3 /г в виде порошка, с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером 0,15,0 мм, или в виде таблеток при следующем количественном соотношении компонентов препарата, мас. клетки эубиотиков с титром 108-1010 КОЕ/мл 1,0-10,0 защитная среда -0,1-10,0 носитель-энтеросорбент СУМС-1,дополнительно обработанный раствором соли металла - остальное до 100. В качестве сорбента используют пористый материал на основе оксида, например, энтеросорбент типа СУМС-1, модифицированный углеродом, или энтеросорбент типа СИАЛ, модифицированный кремнийорганическим полимером. В качестве эубиотиков используют бифидо- или лактобактерии или их смесь (патент РФ 2 317 089, МПК 6 А 61 К 35/74, опубл. 20.02.2008 г.). Однако указанный препарат имеет недостаточную колонизационную активность входящих в состав препарата бактерий-эубиотиков вследствие отсутствия стимулирующих добавок, ограниченные сроки хранения (не более 1 года), т.к. не содержит антиоксидантов и других стабилизирующих добавок. Задача - расширение ассортимента пробиотических биопрепаратов. Поставленная задача достигается предлагаемым иммобилизованным биопрепаратом пробиотиком Рисо-Лакт включающий носительсорбент, клетки эубиотиков с титром 108-1010 КОЕ/г,защитную среду, в качестве сорбента-носителя используют зауглероженную рисовую шелуху, в качестве защитной среды - желатин, сахарозу и 21917 молоко, в качестве клеток эубиотиков клетки штаммов лактобацилл-1,-1 и-2 в соотношении 211. При следующем соотношении компонентов в мас. клетки эубиотиков клетки штаммов лактобацилл-1 - 0,5-5,0-1 - 0,25-2,5 и-2 - 0,25-2,5 с титром 108-1010 КОЕ/г- 1,0-10,0 носитель-сорбент в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером 0,1-1,0 мм - 1,0-10,0 желатин- 15,0-20,0 сахароза - 5,0-10,0 молоко - 50,0-75,0. Биотитр микробной биомассы в иммобилизованном пробиотическом-препарате 108-1010 КОЕ/г. Введение в сорбент микробной био-массы обеспечивает оптимальную биологическую активность препарату. Если исходная микробная биомасса имеет титр меньше 108 КОЕ/г, то препарат обладает недостаточной биологической активностью и при введении в желудочно-кишечный тракт проявляет слабый лечебно-профилактический эффект. Титр микробной биомассы в сорбенте более 1010 КОЕ/мл значительно увеличивает стоимость препарата без значительного увеличения лечебнопрофилактического эффекта. Основу жидкой бактериальной суспензии для сушки составляют клетки - пробиотики в молочной питательной среде с повышенным титром клеток 109-1011 КОЕ/мл жидкий концентрат лактобацилл. Молочная питательная среда с клетками-эубиотиками содержит повышенное количество белка (не менее 15 СОМ - сухого остатка молока). Это позволяет увеличить антибиотические свойства бактерий-пробиотиков в препарате. Кроме того,повышенное количество белка увеличивает антацидные свойства препарата. Высокая концентрация клеток в жидкой бактериальной суспензии позволяет их использовать в препарате в сухом виде в концентрации 0,1-10 с титром 108-1010 КОЕ/мл. Перед сушкой антиоксидантные свойства жидкого концентрата усиливаются дополнительно с помощью специальной защитной среды, создающей максимальные условия анаэробиоза перед сушкой,которые важны для анаэробов-лактобацилл,особенно при длительном их хранении в обычной атмосфере, содержащей кислород. Основными веществами защитной среды, которые обеспечивают анаэробиоз составляют молоко, желатин и сахароза. В качестве клеток эубиотиков используются клетки штаммов лактобацилл-2,которые обладают колонизационной активностью в кишечнике. При режиме глубинного культивирования штаммАР-1 превосходит остальные штаммы по уровню накопления биомассы в 2 раза больше чем-2 иАА-1, поэтому клетки эубиотиков берутся в соотношении 211. Иммобилизующий материал - носитель-сорбент в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм,или в виде гранул размером 0,1-1,0 мм - 1,0-10,0 помимо адсорбции бактерий - пробиотиков и является сорбентом токсических веществ. Носительсорбент представляет собой карбонизованные частицы порошка или гранулы, поверхность которых модифицирована углеродом при получении сорбента ЗРШ. Сорбенты имеют удельную поверхность до 1200 м 2/г и развитую структуру мезо- и микропор. Размеры микропор сорбента соизмеримы с размерами микробных клеток, что позволяет заполнять мезо- и микропоры указанными клетками. Регулированием процентного содержания углерода в сорбенте с последующими окислительновосстановительными его обработками обеспечивается получение носителя с заданными гидрофильно-гидрофобными и другими топохимическими характеристиками. Сорбенты ЗРШ в меньшей степени, чем другие материалы, извлекают витамины и гормоны из организма и не нарушают перистальтику, что делает возможным их применение длительными курсами. Мезо- и микропористая структура носителя-сорбента,ячейки которого заполнены микробными клетками,также способствует защите этих иммобилизованных клеток от инактивирующих факторов внешней среды. Причем, микробные клетки, находящиеся в порах, и клетки, находящиеся близко к внешней поверхности носителя-сорбента, отличаются по своим десорбционным способностям, и такая неоднородность свойств клеток обеспечивает пролонгированное действие препарата и способствует колонизации не только верхних, но и нижних отделов кишечника. Пористый носитель,являясь энтеросорбентом,снимает эффекты местного токсикоза,что способствует выживаемости бактерий препарата и микрофлоры кишечника, а также снижает нагрузку на органы детоксикации человека или животного. Кроме того, при использовании в препарате в качестве клеток эубиотиков смеси клеток штаммов лактобацилл обеспечивается не только вытеснением из желудочно-кишечного тракта патогенных микроорганизмов (за счет антагонистических свойств указанных бактерий), но и восстановлением сильно сокращенной микрофлоры кишечника при дисбактериозе и других заболеваниях. При свободном объеме пор сорбента менее 0,01 см 3/г не обеспечивается достаточное количество иммобилизованных микробных клеток в препарате(менее 0,1). Препарат с содержанием микробной биомассы менее 0,1 мас. имеет низкий биотитр с преобладанием прочно связанных с сорбентом клеток, т.е. действует преимущественно как энтеросорбент. Свободный объем пор используемых носителейсорбентов составляет не более 1,0 см 3/г, то есть количество микробной биомассы (клетки и компоненты питательной среды), которое может быть размещено в порах сорбента, не превышает 1,0 см 3 на 1,0 г сорбента, т.е. на сорбенте может быть иммобилизовано микробных клеток до 50 мас Однако количество микробных клеток,21917 вводимых в препарат, не превышает 10 мас. вследствие чего вся биомасса бактерий препарата находится в защищенном состоянии. При этом носитель-сорбент ЗРШ в препарате сохраняет основные свои свойства,обеспечивающие связывание и выведение из кишечника токсинов,продуктов незавершенного метаболизма и патогенных микроорганизмов. Ниже приведены примеры составов предлагаемого комплексного бактериального препарата Рисо-Лакт. Пример 1. Носитель-сорбент в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером 0,1-1,0 мм с иммобилизованными клетками эубиотиков-1 - 0,5-1 0,25-2 - 0,25 в титре 108-1010 КОЕ/мл- 1,0 носитель-сорбент- 1,0 желатин - 15,0 сахароза - 5,0 молоко- 50,0. Пример 2. Носитель-сорбент в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером 0,1-1,0 мм.(мас.) с иммобилизованными клетками эубиотиков (мас.)-1 -2,5,-1 - 1,25,- 2- 1,25 в титре 108-1010 КОЕ/мл - 5,0 носитель-сорбент- 5,0 желатин- 10,0 сахароза- 15,0 молоко - 60,0. Пример 3. Носитель-сорбент в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером 0,1(мас.) с иммобилизованными клетками эубиотиков (мас.)АР-1 - 5,-1 - 2,5,2 - 2,5 в титре 108-1010 КОЕ/мл защитная среда, в том числе клетки эубиотиков с титром 1081010 КОЕ/г- 10,0 носитель-сорбент- 10,0 желатин - 20,0 сахароза - 10,0 молоко - 75,0. Пример 4. Технология получения готовых форм биопрепарата - пробиотика Рисо-Лакт (СТ НИИ ПББ 39924387-01-2008). По специальной технологии готовят исходные сорбенты типа зауглероженная рисовая шелуха(ЗРШ) (СТ ДГП 39319819-03-2007), в котором описана зауглероженная рисовая шелуха (поверхность которых карбонизована модифицирована углеродом при получении сорбента ЗРШ черного цвета.) с требуемой пористой структурой и химической природой поверхности и размером частиц (или гранул). Перед иммобилизацией бактерий-пробиотиков носитель-сорбент типа ЗРШ стерилизуют при температуре 121 С в течение 30 минут и охлаждают. В емкость при комнатной температуре загружают носитель-сорбент в виде порошка или гранул и жидкий концентрат смеси лактобацилл,после контакта клеток эубиотиков с сорбентом добавляют защитную среду при определенных соотношениях и биологической активности бактерий-пробиотиков, соответствующих примерам 1-3. Смесь периодически перемешивают в течение 1,5-2,0 часов при температуре 4 С для полной иммобилизации клеток на носителе. Процесс иммобилизации возможно вести на качалке в стеклянной посуде или на роллерной установке. Далее продукт однократно промывают в изотоническом растворе . Мутный раствор стерильно сливают, отбирают пробы и проводят контроль полноты процесса иммобилизации по МУК 4.2.577-96 (Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов, п.7.1 и п.7.10. ФГУП НТЦ ИНФОРМРЕГИСТР 0320301011, действует с 29.10.1996 выдано свидетельство о регистрации 3500 от 29.10.03). Процесс считается завершенным,если в растворе осталось не более 50 от исходного количества клеток лактобацилл. Отмытый продукт замораживают в низкотемпературном холодильнике типа Кельвинатор при температуре минус 40-45 С в течение 24-48 часов. Кассеты с предварительно замороженным препаратом перегружают в сушильную камеру при достижении температуры плит минус 20-30 С и камеру вакуумируют. Готовый препарат Рисо-Лакт в сухой иммобилизованной форме фасуют во флаконы и герметично закрывают пробками. Массовая доля влаги составляет не более 3,5. Пример 5. Исследование влияния биопрепарата пробиотика Рисо-Лакт на кишечную микрофлору лабораторных животных. Для проверки эффективности действия созданного биопрепарата Рисо-Лакт и его отсроченный полезный эффект по колонизации кишечника были проведены исследования на лабораторных беспородных белых мышах обоего пола. Препарат Бифидумбактерин - форте, содержащий только один энтеросорбент,и заявляемый биопрепарат-пробиотик Рисо-Лакт вводили мышам перорально, задавая его с кормом, в дозе 0,5 г/кг веса тела (для одних опытных групп мышей) и 2,0 г/кг веса тела (для других опытных групп мышей) в течение 15 дней. При приеме биопрепарата РисоЛакт нарастание веса животных происходило плавно и соответствует нормам, принятым в популяционном стандарте. При приеме препарата Бифидумбактерин форте динамика изменения веса у мышей носила переменный характер с резкими подъемами и спадами. Это объясняется сильным сорбционнодетоксикационным эффектом энтеросорбента, в результате действия которого улучшается всасывание питательных веществ, поступающих в организм. В препарате Рисо-Лакт последствия сорбционнодетоксикационного эффекта сглаживаются и организм испытывает меньше стрессовых нагрузок. Данные по микробиологическим исследованиям состава микрофлоры кишечника мышей путем бактериологического анализа их фекалий приведены в таблицах 1 и 2. 21917 Таблица 1 Влияние препарата Рисо-Лакт на состав кишечной микрофлоры мышей Название микроорганизмов Количество микробов в 1 г фекалий Бифидумбактерин форте Рисо-Лакт Через 15 Через 12 дней Через 15 дней Через 12 дней дней отмены приема отмены приема 104 104 105 106 5 5 6 10 10 10 107 5 5 6 10 10 10 107 4 5 8 10 10 10 109 103 104 105 106 Анализ данных в таблице 1 позволяет сделать заключение, что длительное введение в течение 15 дней препарата Бифидумбактерин - форте и заявляемого биопрепарата Рисо-Лакт в дозировке 0,5 г/кг веса тела вызывает не только количественные, но и качественные изменения в составе микробных ассоциаций кишечного тракта. Так, если в контрольной группе выявлено наличие. и лактозонегативной , то через 15 дней применения биопрепарата Рисо-Лакт из кишечника исчезает вся условно-патогенная флора,возврата которой не наблюдается через 6 и 12 контрольных дней после отмены препарата. При этом отмечается увеличение количества аутохтонной микрофлоры лактобацилл с 105 до 107 КОЕ в 1 г фекалий. Несколько иным является эффект воздействия препарата Бифидумбактерин - форте в такой же дозировке - 0,5 г/кг веса тела животного в течение 15 дней. Данные микробиологического анализа состава кишечной микрофлоры мышей показал, что препарат Бифидумбактерин - форте, адсорбируя на своей поверхности бактерии, полностью выводит из кишечника., в то время как лактозонегативной-только частично. При этом препарат Бифидумбактерин - форте также адсорбирует и полезную микрофлору - бифидо- и лактобактерий, а также лактозоположительную, снижая их концентрации с величин порядка 105-106 до 104-105 КОЕ в 1 г фекалий. Кроме того, в случае применения Рисо-Лакт, у мышей исчезал запор - характерный побочный эффект при приеме препарата Бифидумбактерин - форте. Через 12 дней после отмены приема биопрепаратапробиотика Рисо-Лакт концентрация полезных бактерий в кишечнике бифидо- и лактобактерий,напротив, возрастает в 10 раз. Таким образом, результаты таблицы 1 свидетельствуют, что в отличие от Рисо-Лакт,препарат Бифидумбактерин - форте вызывает уменьшение в 10 раз концентрации полезной микрофлоры в кишечнике (бифидобактерий и лактобактерий) - вымывание полезных бактерий. Введение в организм максимальных доз - 2 г/кг веса тела животных в течение 15 дней препарата Бифидумбактерин - форте и препарата Рисо-Лакт показало неэффективность действия доз,превышающих 0,5 г/кг веса тела. Данные приведены в таблице 2. Таблица 2 Влияние Бифидумбактерин-форте и Рисо-Лакта на состав кишечной микрофлоры мышей в дозе 2 г / кг массы тела Название микроорганизмов Контроль Количество микробов в 1 г фекалий Бифидумбактерин - форте Рисо-Лакт Через 15 Через 12 Через 15 Через 12 дней приема дней отмены дней приема дней отмены 105 105 105 105 5 5 6 10 10 10 106 5 5 5 10 10 10 105 5 5 7 10 10 10 108 5 7 10 10 Из анализа данных таблицы 2 следует, что применение препарата Рисо-Лакт в дозе 2 г/кг способствует полному вытеснению условно-патогенной микрофлоры. У мышей контрольной группы такого не наблюдается. Однако при этом происходит недостаточное повышение количества бифидо,лактобактерий и. У животных,потреблявших препарат Бифидумбактерин - форте,как видно из таблицы 2, наблюдается сильный дисбактериоз, поскольку полезная микрофлора содержится в количествах, не превышающих 105 КОЕ в 1 г фекалий. В результате через 15 дней после применения препарата Бифидумбактерин - форте и через 12 дней после его отмены, освобожденные от полезных бактерий места на слизистой кишечника, занимают условно-патогенные и патогенные бактерии(слабоферментирующая кишечная палочка, протей, сальмонеллы), особенно при применении препарата Бифидумбактерин - форте в повышенной дозе (см. таблицу 2). Пример 7. Исследование биологической активности препаратов в иммобилизованной форме в процессе их хранения. Для исследования биологической активности препаратов-пробиотиков в иммобилизованной форме в процессе воздействия инактивирующих факторов внешней среды (температура, кислород воздуха, длительность воздействия и другие факторы) используют стандартную процедуру ускоренного хранения биопрепарата при температуре 37 С. Результаты биотитрования стандартным методом серийных разведений на питательных средах в колонийобразующих единицах (КОЕ) на 1 г препарата (КОЕ/г) приведены в таблице 3. Таблица 3 Исследование влияние процедуры ускоренного хранения на биологическую активность (биотитр) препаратовп/п Вид препарата Исходный Биотитр препарата после Кратность Биотитр КОЕ/г хранения при 37 С падения титра через 14 суток(разы) 1 Жидкий концентрат лактобацилл 1010 108 107 425 2 Сухой концентрат лактобацилл 105 107 106 59 3 Бифидобактерии на 105 107 107 18 активированном угле 4 Бифидумбактерин 108 107 107 5,7 форте 5 Лактобактерии на СУМСе,108 107 107 58 прототип 6 Рисо-Лакт 108 108 108 5,4 Анализ таблицы 3 показывает, что по результатам ускоренного теста на хранение заявляемые препараты-пробиотики на основе концентрата бифидобактерий или смеси их с закваской лактобактерий в иммобилизованной форме имеют биологическую активность в 1,5-2,0 раза выше, чем комплексный препарат-прототип и на 1-2 порядка выше, чем другие препараты-аналоги. Хранение заявляемых препаратов в течение 1,5 года при температуре не выше 10 С в условиях холодильника показало, что их биологическая активность (в КОЕ/г) осталась практически неизменной несмотря на наличие атмосферного воздуха в препарате над флаконом, что подтверждает данные ускоренного теста, приведенного в таблице 3. Таким образом, заявляемый иммобилизованный комплексный бактериальный биопрепаратпробиотик Рисо-Лакт обеспечивает более 6 эффективное лечебно-профилактическое действие на организм человека или животного за счет более высокой колонизационной активности в кишечнике,а также имеет более длительные сроки хранения. Возможно производство и промышленное применение предлагаемого препарата. Изобретение относится к биотехнологии,медицине и микробиологии. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Иммобилизированный биопрепарат-пробиотик Рисо-Лакт, включающий носитель сорбент,клетки эубиотиков с титром 108-1010 КОЕ/г,защитную среду, отличающийся тем, что в качестве носителя-сорбента используют зауглероженную рисовую шелуху, в качестве защитной среды - желатин, сахарозу и молоко, в 21917 качестве клеток эубиотиков - клетки штаммов лактобацилл-1 - 0,5-5,0-1 - 0,25-2,5 и-2 - 0,25-2,5 в соотношении 211 при следующем соотношении компонентов в мас. Клетки эубиотиков штаммов лактобацилл-1,-2 с титром 108-1010 /г 1,0-10,0 Носитель-сорбент в виде порошка с размером частиц не более 0,1 мм, или в виде гранул размером 0,1-1,0 мм 1,0-10,0 Желатин 15,0-20,0 Сахароза 5,0-10,0 Молоко 50,0-75,0.