Применение комплекса оксалата 1-(2-этоксиэтил)-4-ацетилокси-4-нонилпиперидина с в-циклодекстрином в качестве иммуностимулирующего средства

(51) 61 31/445 (2011.01) 61 31/724 (2011.01) 61 37/04 (2011.01) 07 211/14 (2011.01) 07 211/18 (2011.01) 07 211/34 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ЦИКЛОДЕКСТРИНОМ В КАЧЕСТВЕ ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕГО СРЕДСТВА(57) Изобретение относится к области фармакологически активных веществ и полупродуктам их получения, конкретно к применению комплекса оксалата 1 -(2-этоксиэтил)4-ацетилокси-4-нонилпиперидина с циклодекстрином в качестве иммуностимулирующего средства. Он является активным иммуностимулятором клеточного,гуморального иммунитета,фагоцитарной активности гранулоцитарных лейкоцитов и не нарушает баланс иммунных клеток в организме, его среднелетальная доза меньше, чем у левамизола в 5,3 раза.(72) Пралиев Калдыбай Джайловович Искакова Тыныштык Кадыровна Орынбекова Зауре Орынбековна Тулеуханов Султан Тулеуханович Бактыбаева Ляйля Кыргызбаевна(73) Акционерное общество Институт химических наук им. АБ. Бектурова(56) Предварительный патент РК 19830, 07 211/14, 07 211/18, 07 11/22, 07 211/34,А 61 К 31/445, 2008. М.Д. Машковский. Лекарственные средства. М., 11 изд., 1988, т. 2, с. 169.(54) ПРИМЕНЕНИЕ КОМПЛЕКСА ОКСАЛАТА 1-(2-ЭТОКСИЭТИЛ)-4 АЦЕТИЛОКСИ-4-НОНИЛПИПЕРИДИНА С В 25859 Изобретение относится к области фармакологически активных веществ, конкретно, к применению комплекса оксалата 1-(2-этоксиэтил)-4 ацетилокси-4-нонилпиперидина с(3 циклодекстрином в качестве иммуностимулирующего средства. Ранее было установлено, что комплекс оксалата 1-(2-этоксиэтил)-4- ацетилокси-4-нонилпиперидина обладает анальгетическим, спазмолитическим и антибактериальным действием (Предпатент 19830 РК, бюл. 8,15.08.2008.). Из используемых в настоящее время в качестве иммуностимулирующих средств является левамизол(М.Д. Машковский Лекарственные средства, 11 изд., 1988, т. 2, с. 169). Недостатком левамизола является его высокая токсичность. Задачей изобретения является расширение арсенала средств иммуностимулирующего действия. Технический результат изобретения -создание иммуностимулирующего средства. Технический результат достигается использованием комплекса оксалата 1-(2 этоксиэтил)-4-ацетилокси-4-нонилпиперидина с циклодекстрином в качестве иммуностимулятора. Синтез и физико-химические характеристики комплекса оксалата 1-(2-этоксиэтил)-4-нонил-4 ацетилоксипиперидин-4-ола с -циклодекстрином приведены в Предпатенте 19830, 2008, Бюл. 8. ПРИМЕР. Острую токсичность комплекса оксалата 1-(2 этоксиэтил)-4-ацетилокси-4-нонилпиперидина с циклодекстрином(БИВ-11) определяли при внутрибрюшинном введении белым беспородным мышам обоего пола и массой 18-23 грамма. Биологическая активность и острая токсичность БИВ-11 сопоставлялись с данными эталонного препарата левамизола (таблица 1). Таблица 1 Острая токсичность соединений Шифр соединения Показатель острой токсичности (ЛД 50),мг/кг Показатель острой токсичности (ЛД 50) относительно стандартного соединения левамизола Для изучения иммуностимулирующей активности препарата у животных необходимо было вызвать искусственный иммунодепрессивный синдром. Иммунодепрессивный синдром вызывали путем отравления животных солями свинца в дозе 0,5 мг/кг в течение 10 дней. После проведенной интоксикации организма животных солью свинца состояние животных внешне проявлялось нарушением психомоторных реакций, аппетита и слезоточивостью глаз. Наблюдалась внезапная гиперреактивность и агрессивность у крыс. Иммунный анализ крови показал лейкопению на фоне нейтрофилеза и лимфопении. Исходя из показателя острой токсичности, была рассчитана терапевтическая доза новых соединений,которая составила 1/100 от показателя ЛД 50 Терапевтическая доза соединения мг/кг, ТД 50(БИВ 11) 2,5 мг/кг. Терапевтическая доза стандартного соединения была ТД 50(левамизола)0,4 мг/кг. Терапию проводили в течение 10 дней. После проведенного лечения забор крови проводили путем декапитации животных. Дальнейший анализ крови проводили вышеупомянутыми методиками. В результате подсчета содержания общего количества циркулирующих в периферической крови крыс лейкоцитов и статистической обработке полученных значений были получены следующие данные (таблица 2). В результате 10-дневной интоксикации организма животных солью свинца у животных произошло достоверное снижение общего показателя лейкоцитов по сравнению с нормой в 4,2 раза, что повлекло вслед за этим изменения в лейкоцитарной формуле крови. При интоксикации 2 произошел сдвиг лейкоцитарной формулы влево резкое увеличение палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов в крови, резкое снижение показателя лимфоцитов. Кроме того,нейтрофилы характеризовались гиперсегментированностью ядер и токсической зернистостью. Была замечена базофильная токсическая зернистость в эритроцитах. Все показатели крови говорили о сильной интоксикации организма и о развившимся иммунодепрессивном синдроме. После проведенного лечения стандартным иммуностимулирующим соединением левамизолом и новым синтетическим соединением максимальный показатель лейкоцитов у БИВ-11,превосходя препарат сравнения по данному параметру 1,9 раза. Общий показатель лейкоцитов при использовании БИВ-11 практически вернулся к нормальному значению всего за 10 дней терапии. Установлено,что соединение с высоким показателем лейкоцитов стимулирует выработку нейтрофилов и лимфоцитов. Для проведения диагностики силы иммунного ответа был подсчитан индекс сдвига показателей крови (таблица 3). Индекс сдвига у БИВ-11 был близок к значению 0,03-0,04, при котором есть основания говорить о благоприятном течении заболевания с положительным прогнозом.Он превосходил индекс сдвига препарата сравнения в 3 раза. У животных,пролеченных данным соединением был высокий уровень нейтрофилеза на фоне гиперлейкоза, и несмотря на протекание в организме тяжелых форм заболеваний в значительно степени повысило сопротивляемость организма. Таблица 3 Индекс сдвига лейкоцитарной формулы периферической крови крыс после проведенного 10-ти дневного лечения БИВ-11 и препаратом сравнения иммуностимулятором - левамизолом Шифр соединений БИВ-11 Левамизол Интактные Плацебо Для того, чтобы определить на лимфопоэз каких субпопуляции лимфоцитов влияет исследуемое соединение были проведены последующие исследования, которые показали следующие результаты (таблица 4). Первично у крыс,отравленных солью свинца наблюдалось снижение количества активных, Т- и В-лимфоцитов, Тхелперов, особенно резко упало количество Тсупрессоров/Т-киллеров. После проведенного лечения БИВ-11 и сравнительным иммуностимулирующим препаратом левамизолом высокую активность в отношении лимфопоэза проявил БИВ-11, превосходя препарат сравнения в 2,1 раза. Общий показатель Т-лимфоцитов на высоком уровне наблюдался у БИВ-11, превосходя левамизол в 1,6 раз. Максимальное количество Влимфоцитов было у БИВ-11, превосходя в процентном отношении препарат сравнения в 1,9 раз, а в количественном отношении в 7,8 раза. Высокий уровень субпопуляции Т-хелперов наблюдался у БИВ-11 и был выше, чем у левамизола в 1,3 раза. Количество Т-супрессоров было максимально высоким у БИВ-11, превышая препарат сравнения в 2,3 раза. Известно, что повышение популяционного состава теофеллинрезистентных и теофеллинчувствительных клеток должно проходить взаимно равномерно. Дисбаланс в количественном соотношении субпопуляций Тхелперов и Т-киллеров влечет за собой развитие аутоиммунных процессов, раковых заболеваний,суперинфекционных состояний и т.д. Был рассчитан иммунорегуляторный индекс у всех исследуемых соединений (табл. 5). Таблица 5 Иммунорегуляторный индекс БИВ-11 и левамизола Шифр соединений БИВ-11 левамизол интактные плацебо Иммунорегуляторный показатель максимально приближенный к показателю интактных (здоровых) животных наблюдался у крыс, пролеченных БИВ 11. Интересно, что дисбаланс в количественном соотношении субпопуляций Т-хелперов и Тсупрессоров наблюдался в крови животных,пролеченных левамизолом. Его значение было приближено к показателю иммунорегуляторного(физиологический раствор). Для оценки эффективности в отношении влияния на фагоцитарную активность мононуклеарнофагоцитарной системы был проведен НСТ-тест Показатели НСТ-теста БИВ-11 и препарата сравнения Шифр соединения и название стандартного препарата. БИВ-11 левамизол плацебо интактные Как видно из таблицы 6, наиболее высоким стимулирующим действием на фагоцитарную активность полинуклеаров проявил БИВ-11,который превосходил препарат сравнения в 2,5-3 раза. 3 Чтобы удостовериться в иммуностимулирующей активности БИВ-11 исследована реакция бласттрансформации лимфоцитов (таблица 7). У животных, пролеченных физиологическим раствором, наблюдалось полное или почти полное(до 5) отсутствие способности к бластообразованию. Наиболее высокой бласттрансформирующей активностью обладает соединения БИВ-11,превосходя эталонный препарат в 1,2 раза. Данные по реакции бласттрансформации коррелируют с данными по показателям лейкоцитарной формулы. Таблица 7 Бласттрансформация лимфоцитов под влиянием ФГА Шифр соединения и название стандартного препарата БИВ-11 Левамизол Плацебо Интактные Таким образом, соединение БИВ-11 является активным иммуностимулятором клеточного,гуморального иммунитета,фагоцитарной активности гранулоцитарных лейкоцитов и не нарушает баланс иммунных клеток в организме. Среднелетальная доза БИВ-11 меньше, чем у левамизола в 5,3 раза. Процент образования бластов,49,2 43 5 81,5 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Применение комплекса оксалата 1-(2 этоксиэтил)-4-ацетилокси-4- нонилпиперидина сциклодекстрином в качестве иммуностимулирующего средства.