Поливалентная вакцина “Yшвак” против трихофитии сельскохозяйственных животных

(51)7 61 39/00, 12 1/14 ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научно-исследовательский ветеринарный институт Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Научно-производственный центр животноводства и ветеринарии Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан(54) ПОЛИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ШВАК ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой инактивированную вакцину против трихофитии верблюдов,лошадей, крупного рогатого скота, овец и коз. Поливалентная вакцина швак против трихофитии сельскохозяйственных животных содержит антиген из штамма рода , сахарозу, же латин и воду, при этом используют штамм 18 и дополнительно она включает штаммы.29 и 23 при следующем соотношении компонентов, об. антиген из штамма 18 16,0-17,0(250-550 млн. микроконидий/см 3) антиген из штамма 23(250-550 млн. микроконидий/см 3) 16,0-17,0 сахароза 9,0-11,0 желатин 1,0-4,0 вода остальное. Полученная поливалентная вакцина стабильна,безвредна и высокоиммуногенна и создает напряженный иммунитет против трихофитии верблюдов,лошадей, крупного рогатого скота, овец и коз. 10063 Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой инактивированную вакцину против трихофитии верблюдов,лошадей, крупного рогатого скота, овец и коз. Известна поливалентная вакцина против трихофитии сельскохозяйственных животных, содержащая антигены из штаммов рода , сахарозу, желатин и воду (патент РК 5097, кл. А 61 К 39/00, 1997). Однако указанная вакцина иммуногенна только против двух видов возбудителей трихофитии, а именнои. Задачей изобретения является получение высокоиммуногенной поливакцины с расширенным диапазоном эффективности для профилактики трихофитии сельскохозяйственных животных, одновременно защищающей как крупный рогатый скот, так и лошадей, верблюдов, овец и коз. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной, безвредной и высокоиммуногенной вакцины, создающей напряженный иммунитет против трихофитии верблюдов, лошадей, крупного рогатого скота, овец и коз. Поливалентная вакцина швак против трихофитии сельскохозяйственных животных содержит антиген из штамма рода , сахарозу, желатин и воду, при этом используют штамм 18 и дополнительно она включает штаммы.29 и 23 при следующем соотношении компонентов, об. антиген из штамма 18 16,0-17,0(250-550 млн. микроконидий/см 3) антиген из штамма 23(250-550 млн. микроконидий/см 3) 16,0-17,0 сахароза 9,0-11,0 желатин 1,0-4,0 вода остальное. Штаммы 18,.29 и 23, используемые для изготовления вакцины швак против трихофитии сельскохозяйственных животных, депонированы в РГКП КазНИВИ МО и Н РК 4 января 1999 года. Штамм 18 получен путм направленного ступенчатого отбора по признаку спорообразования быстрорастущих колоний с активным накоплением микроконидий. Штамм характеризуется следующими признаками. Морфологические свойства. Штамм гриба 18 обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя трихофитии крупного рогатого скота. 2 Культуральные свойства. Штамм грибарастт на сусло-агаре при температуре 7 С по Баллингу в виде плоских или возвышенных неправильноскладчатых сероватых колоний растущий край дольчатый, реверс светложелтый, диаметр колонии - 15-20 мм (14-16-дневная культура). На агаре Сабуро растет медленно, на 20 сутки диаметр колонии - 14-15 мм, ровный, порошистый,зернистый со стелющейся беловатой грибницей. Культура возбудителя трихофитии крупного рогатого скота испытывает потребность в витаминах, т. е. в тиаминах, для роста и спорообразования. Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре - 176,2-250,4 млн/ см 3. Антигенные свойства. На введение культуры штамма в организм телят, кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Безвредность. Штамм гриба 18 безвреден для телят в дозе 30106 микроконидий при внутримышечном введении, для кроликов и морских свинок в дозе 20106 микроконидий при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба 18 слабореактогенен для крупного рогатого скота при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный, поверхностный очажок диаметром 1,0-2,0 см,который самопроизвольно излечивается в течение 14-15 дней. Иммуногенность. При 2-кратном внутримышечном введении штамм в дозе 30106 микроконидий создает напряженный иммунитет у привитых телят и кроликов к последующему заражению трихофитией продолжительностью не менее 12 месяцев. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба 18 отличается от эпизоотических слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма грибастабильно сохраняются на протяжении 4-5 лет, 2-3-разовыми в год пассажами культуры на питательных средах (срок наблюдения). Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии 4 -ной сахарозы и 4 -ного пептона штамм гриба 18 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 16 месяцев, в нативном состоянии - в течение 8 месяцев, в замороженном состоянии при минус 40 С - в течение 6 месяцев, при температуре 20 С и ниже - в течение 2,5 лет. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой рН 7,2-7,4, гриб сохраняет биологиче 10063 скую активность при температуре 27-28 С в течение 5 часов, при 4 С - 3 сут. Штамм гриба.29 также получен путем направленного ступенчатого отбора по признаку спорообразования быстрорастущих колоний с активным накоплением микроконидий. Указанный штамм характеризуется следующими признаками. Морфологические свойства. Штамм гриба.29 обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя трихофитии овец и коз. Культуральные свойства. Штамм гриба.растет на сусло-агаре при температуре 7 С по Баллингу в виде восковидной, беловато-желтого цвета колонии растущий край ровный или лучистый, реверс беловато-желтый, диаметр колонии - 15-20 мм (15-20 дневная культура). На агаре Сабуро растет медленно, на 20 сутки диаметр колонии - 8-12 мм, край ровный, лучистый,с неправильно складчатыми грибницами. Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре - 178,5-258,4 млн/ см 3. Антигенные свойства. При введении культуры штамма ягнятам, козлятам и кроликам у них в организме образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Безвредность. Штамм гриба.29 безвреден для ягнят и козлят в дозе 30106 микроконидий при внутримышечном введении, для кроликов и морских свинок в дозе 20106 микроконидий при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба.29 слабо реактогенен для овец и коз, при внутримышечном введении у привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,0-1,5 см,который самопроизвольно излечивается в течение 14-15 дней. Иммуногенность. При 2-кратном внутримышечном введении штамм в дозе 30106 микроконидий создает напряженный иммунитет у привитых ягнят, козлят и кроликов к последующему заражению трихофитией, продолжительностью не менее 12 месяцев. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба.29 отличается от эпизоотических слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба.29 стабильно сохраняются на протяжении 4-5 лет, 2-3 разовыми в год пассажами культуры на питательных средах (срок наблюдения). Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии 4 -ной сахарозы и 4 -ного пептона штамм гриба.29 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 16 месяцев, в нативном состоянии - в течение 8 месяцев, в замороженном состоянии при минус 40 С - в течение 6 месяцев, при 20 С и ниже - в течение 2,5 лет. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой рН 7,2-7,4, гриб сохраняет биологическую активность при температуре 27-28 С в течение 5 часов, при 4 С - 3 сут. Штамм гриба 23, наряду с предыдущими культурами гриба, получен путем направленного ступенчатого отбора по признаку спорообразования быстрорастущих колоний, с активным накоплением микроконидий и характеризуется следующими признаками. Морфологические свойства. Штамм гриба 23 обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя трихофитии верблюдов. Культуральные свойства. Штамм гриба 23 на сусло-агаре 7 С по Баллингу растет в виде возвышенной бугристой,серовато-бежевой колонии растущий край ровный,реверс темно-коричневый, диаметр колонии - 3040 мм (15-20-дневная культура). На агаре Сабуро растет медленно, на 30 сутки диаметр колонии - 20-30 мм, кожистые или восковидные с неправильными складками, растущий край дольчатый или паутинистый погруженный, обратная сторона колонии коричневая, в среду выделяется коричневый пигмент. Культуры возбудителя трихофитии верблюдов не испытывают потребности в витаминах для роста и спорообразования. Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре - 158,5210,2 млн/см 3. Антигенные свойства. На введение культуры штамма в организме верблюжат, кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 14011280. Безвредность. Штамм гриба 23 безвреден для верблюжат в дозе 30 106 микроконидий при внутримышечном введении,для кроликов, морских свинок в дозе 20106 микроконидий при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм грибаслабореактогенен для верблюдов при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,5-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение 10-12 дней. Иммуногенность. При 2-кратном внутримышечном введении штамм в дозе 30106 микроконидий создает напряженный иммунитет у привитых 3 10063 верблюжат и кроликов к последующему заражению трихофитией, продолжительностью не менее 12 месяцев. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба 23 отличается от эпизоотических слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба 23 стабильно сохраняются на протяжении 3-4 лет (2-3-разовыми в год) пассажами культуры на питательных средах (срок наблюдения). Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии 10 -ной сахарозы и 1,5 желатины штамм гриба 23 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев, в нативном состоянии - в течение 6 месяцев, в замороженном состоянии при минус 40 С - в течение 6 месяцев, при температуре 20 С и ниже - в течение 2 лет. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой с рН 7,2-7,4, гриб сохраняет биологическую активность при температуре 27-28 С в течение 5 часов, при 4 С - 3 сут. Для получения вакцины швак 14-21-дневные культуры штаммов 18,.29 и 23 выращивают раздельно в матрасных колбах на сусло-агаре при рН 6,2-6,8 и температуре 26-28 С в течение 21 дня. Каждую выращенную грибницу указанных культур в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды металлическими скребками и помещают в стерильные стеклянные сосуды. Грибную массу каждого из трх штаммов гомогенизируют раздельно в коллоидной мельнице, а затем, с помощью стерильной воды, полученные гомогенаты штаммов 18,.29 и 23 ресуспензируют до концентрации 250550 млн. микроконидий/см 3. Ресуспензирование проводят в присутствии пенициллина из расчета 100 ЕД на 1 см 3 каждого гомогената, затем все три гомогената смешивают между собой в равных объемах и к полученной суспензии грибной массы добавляют сахарозы желатина 1,0-4,0 . После чего все тщательно перемешивают, разливают в стерильные флаконы и лиофилизируют. После завершения сушки флаконы закрывают резиновыми пробками, фольговыми колпачками и закатывают. Сухая вакцина швак пригодна для применения в течение 1 года с даты изготовления, при условиях хранения при температуре от 2 до 10 С. К каждому флакону вакцины швак прилагается флакон со стерильным разбавителем, которым перед применением разбавляют из расчета 1 см 3 разбавителя на 1 дозу вакцины швак. Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Поливалентную вакцину швак против трихофитии сельскохозяйственных животных использовали парэнтерально, двукратно при соотношении компонентов, об. антиген из штамма 18 16(250-550 млн. микроконидий /см 3) антиген из штамма 23 16(250-550 млн. микроконидий /см 3) сахароза 9,0 желатин 1,0 вода остальное. Пример 2. Поливалентную вакцину швак против трихофитии сельскохозяйственных животных использовали так же, как и в примере 1, при соотношении компонентов, об. антиген из штамма 18 16,6(250-550 млн. микроконидий /см 3) антиген из штамма 23 16,6(250-550 млн. микроконидий/см 3) сахароза 10,0 желатин 1,2 вода остальное. Пример 3. Поливалентную вакцину швак против трихофитии сельскохозяйственных животных использовали так же, как и в примере 1, при соотношении компонентов, об. антиген из штамма 18 17,0(250-550 млн. микроконидий /см 3) антиген из штамма 23 17,0(250-550 млн. микроконидий /см 3) сахароза 11,0 желатин 4,0 вода остальное. Пример 4. Для изучения иммуногенной активности вакцины швак берут три группы 5-ти видов сельскохозяйственных животных (верблюжат,жеребят, телят, овец и коз) по 50 голов в каждой группе. Животных иммунизируют вакциной швак в следующих дозах. Таблица 1 10063 Вид животного Верблюжата (от 1-го до 4-х мес.) Верблюжата (от 4-х мес. и старше) Жеребята (от 1-го до 4-х мес.) Жеребята (от 4-х мес. и старше) Телята (от 1-го до 4-х мес.) Телята (от 4-х мес. и старше) Овцы Козы Вакцину швак вводят дважды внутримышечно в область крупа животного с интервалом в 14 дней, при этом повторное введение биопрепарата проводят в той же дозе и тот же участок тела животного. Результаты иммуногенной активности поливалентной вакцины швак против трихофитии сельскохозяйственных животных по примерам 1, 2 и 3 приведены в табл. 2, 3 и 4. Таблица 2 Иммуногенная активность вакцины швак по примеру 1 Серия Верблюжата Жеребята Телята Овцы Козы Количество заболевших животных при экспериментальном заражении вирулентными штаммами гриба 1 2 2 1 1 Таблица 3 Иммуногенная активность вакцины швак по примеру 2 Серия Верблюжата Жеребята Телята Овцы Козы Количество заболевших животных при экспериментальном заражении вирулентными штаммами гриба 0 0 0 0 0 Таблица 4 Иммуногенная активность вакцины Ушвак по примеру 3 Серия Верблюжата Жеребята Телята Овцы Козы Количество заболевших животных при экспериментальном заражении вирулентными штаммами гриба 0 0 0 0 0 Из табл. 2, 3 и 4 видно, что наибольшую иммуногенную активность вакцина швак проявляет в примерах 2 и 3, где эффективность иммунизации составляет 100 . Таким образом, наиболее эффективные результаты иммунизации достигнуты в примерах 2 и 3, а соотношение концентраций и объемов компонентов в примере 2 является наиболее оптимальными для серийного промышленного выпуска поливалентной вакцины швак. Использование поливалентной вакцины швак против трихофитии сельскохозяйственных животных в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по профилактике и лечению стригущего лишая в Республике Казахстан. Полученная поливалентная вакцина стабильна,безвредна, высокоиммуногенна и создает напряженный иммунитет против трихофитии верблюдов. лошадей, крупного рогатого скота, овец и коз. 5 10063 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Поливалентная вакцина против трихофитии сельскохозяйственных животных, содержащая антиген из штамма вида, сахарозу, желатин и воду, отличающаяся тем, что она содержит антиген из штамма 18, и дополнительно антигены из штаммов.29 и 23 при следующем соотношении компонентов, об. антиген из штамма(250-550 млн. микроконидий/см 3) антиген из штамма 23