Способ лечения сахарного диабета I типа, трансплантацией фетальных клеток поджелудочной железы

(51) 61 35/48 (2006.01) 61 35/39 (2006.01) 61 3/10 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области медицины, в частности к эндокринологии и может быть использовано при лечении сахарного диабетатипа. Техническим результатом изобретения является повышение эффективности лечения, профилактика осложнений и улучшение качества жизни больных сахарным диабетомтипа. Это достигается тем, что в заявляемом способе лечения сахарного диабетатипа, включающего трансплантацию фетальных клеток поджелудочной железы, согласно изобретению, в дополнение к проводимой стандартной сахароснижающей терапии, внутривенно вводят взвесь фетальных клеток поджелудочной железы в объеме 10 мл на 400 мл физиологического раствора.(72) Таубалдиева Жаннат Сатыбаевна Доскалиев Жаксылык Акмурзаевич Туганбекова Салтанат Кинесовна Каюпов Болатбек Амангельдиевич Сапарбаев Самат Сагатович Ульянова Ольга Владимировна Темиргалиева Гульнар Шахмиевна(73) Акционерное общество Национальный научный медицинский центр(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТАТИПА, ТРАНСПЛАНТАЦИЕЙ ФЕТАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Изобретение относится к области медицины, в частности к эндокринологии и может быть использовано при лечении сахарного диабетатипа. Известен способ лечения сахарного диабета,заключающийся во введении биологического материала иммунокоррегирующего действия на основе клеточной суспензии, приготовленной из нативных или криоконсервированных гемопоэтических клеток эмбриональной печени и/или селезенки.(Патент РФ 2126260, МПК А 61 35/28, опубл. 20.02.1999 г.) Недостатком данного способа является низкая эффективность лечения, т.к. некомпетентные клетки способствуют ускорению утилизации углеводов, но не влияют при этом на метаболические нарушения при сахарном диабете. Известен также способ лечения сахарного диабета путем введения пациенту внутримышечно биотрансплантата,включающего фетальные миобласты из расчета 100 млн. клеток на 10 кг веса.(Патент РФ 2265443, МПК А 61 35/28, опубл. 10.12.2005) Недостатком данного способа является низкая эффективность лечения,так как трансплантированные миобласты имеют определенный срок жизни (4-5 месяцев) они снижают уровень глюкозы в крови за счет повышения метаболизма в мышечной ткани, не влияя при этом на ферментный обмен. Известен также способ лечения сахарного диабета и его осложнений, который включает в себя трансплантацию криоконсервированной фетоплацентарной ткани. Дополнительно трансплантируют криоконсервированную фетальную поджелудочную железу. При этом трансплантацию тканей осуществляют одномоментно в сформированный карман в подкожной клетчатке ягодицы.(Патент Украины 7947, МПК А 61 35/39,опубл. 15.07.2005, Бюл. 7) Недостатком данного способа также является низкая эффективность лечения, т.к. подкожное введение трансплантата приводит к замедлению терапевтического эффекта. Задачей изобретения является создание эффективного способа лечения сахарного диабетатипа трансплантацией фетальных клеток поджелудочной железы, позволяющего отказаться от иммуносупрессивной терапин и рассматривать методику трансплантации островковых клеток в качестве новой перспективы улучшения возможностей компенсации, качества жизни и профилактики осложнений у данной категории больных. Техническим результатом изобретения является повышение эффективности лечения, профилактика осложнений и улучшение качества жизни больных сахарным диабетомтипа. Это достигается тем, что в заявляемом способе лечения сахарного диабетатипа, включающего трансплантацию фетальных клеток поджелудочной железы, согласно изобретению, в дополнение к 2 проводимой стандартной сахароснижающей терапии, внутривенно вводят взвесь фетальных клеток поджелудочной железы в объеме 10 мл на 400 мл физиологического раствора. Фетальные стволовые клетки получают из абортивного материала на 16-19 неделе беременности. Они не обладают способностью к неограниченному размножению и дифференцировке в любой вид специализированных клеток. Фетальные клетки уже начали дифференцировку, и,следовательно, каждая из них, во-первых, может пройти только ограниченное число делений, и, вовторых, дать начало не любым, а достаточно определенным видам специализированных клеток. Этот факт делает их клиническое применение более безопасным. Выделяют специфический и неспецифический механизм действия фетальных клеток. Специфический механизм действия это заместительная клеточная терапия - введение живых эмбриональных клеток, живущих в организме некоторое время и компенсирующих специфические дефекты функций органов и тканей реципиента. Показательно, что пересадка 3-5 гепатоцитов компенсирует практически любой метаболический дефект печени. Введенные донорские клетки размножаются и формируют устойчивые ростки в организме реципиента. Фетальная биотехнология делает акцент не на лечение старых, необратимо измененных клеток, а на своевременной замене их новыми путем трансплантаций пула донорских клеток, или стимуляцией собственного резерва регенерации. Неспецифический механизм действия проявляется в стимуляции регенераторных процессов за счет стадиоспецифических белков,пептидов (ростовые факторы, цитокины, тканевые гормоны). Фетальные клетки и ткани обладают рядом свойств в организме реципиента способны подвергаться изменениям и дифференцировке в ответ на стимулы окружающей среды, в соответствии с заложенной генетической информацией. Высокое содержание бластных клеток обусловливает рост,миграцию и возможность образовывать межклеточные контакты продуцируют и содержат большое количество различных биологических активных веществ, таких,как ростовые факторы, способных обеспечивать их выживание и/или стимуляцию регенерации поврежденных тканей реципиента. Кроме того, в них содержатся стадиоспецифические белки и пептиды, в том числе альфа-фетопротеин,антиоксиданты и перехватчики активных форм кислорода, адаптогены, противовоспалительные бактериостатические соединения,пептиды,стимулирующие иммунокомпетентные клетки и др. Фетальные клетки не вызывают иммунной реакции отторжения, поскольку в 1 и 2 триместрах гестации еще не экспрессированы белки гистосовместимости 1 и 2 класса способны использовать эволюционно более древний энергетический путь - гликолиз,поэтому обладают большей устойчивостью к гипоксии. Осуществление способа. Взвесь фетальных клеток получают в лаборатории клеточных технологии Национального научного медицинского центра лаборатория оснащена всем самым современным необходимым оборудованием. После разморозки на водяной бане по принятой методике при 37 С, одногрупную культуру клеток отмывают от криопротектора в 199 питательной среде, а затем в .0,9, добавляют .. 3 клеточной взвеси (6109),разводят на .0,9 до 10, и устанавливают в перфузорсо скоростью 40 . Время инфузии составляет 30 . Перед трансплантацией в камере Горяева производят подсчет процента жизнеспособных клеток, который должен быть не менее 80. Трансплантацию фетальных клеток поджелудочной железы проводят в дополнение к стандартной сахароснижающей терапии и осуществляют следующим образом внутривенно вводят взвесь фетальных клеток поджелудочной железы в условиях отделения реанимации и анестезиологии с помощью аппаратаВ.. Взвесь фетальных клеток поджелудочной железы вводят в объеме 10 мл, разведенных в 400 мл физиологического раствора. В 1 мл взвеси содержится количество клеток 4-6109. Время процедуры составляет 2 часа. Пример 1. Больная Е. А., 1978 г.р., находилась на стационарном лечении в терапевтическом отделении 4 ННМЦ с 16.06.11 г. по 29.06.11 г. Клинический диагноз Сахарный диабет, тип 1, тяжелой степени тяжести, в стадии декомпенсации. Осложнения Диабетическая полинейропатия конечностей. Диабетическая микроангиопатия. Диабетическая ретинопатия, пролиферативная стадия. Сопутствующий диагноз Эндометрит на фоне ВМС. Вульвовагинит. Из анамнеза сахарный диабет у больной в течение 14 лет, последние 5-6 лет отмечает недостаточную компенсацию диабета с прогрессированием осложнений. Госпитализирована для решения вопроса о трансплантации фетальных островковых клеток. Обследование Общий анализ крови от 17.06.11 г. Н- 103 г/л,Эр-3,421012, -4,0109, Тромб - 246,010/л,Цв.пок.-0,90, С/я- 60, Моноциты-5, Лимфоциты 33, СОЭ- 53 мм/ч. В динамике общий анализ крови от 28.06.11 г. Н- 110 г/л, Эр-3,521012, -6,3109, Тромб 292,010/л, Цв.пок.-0,93, С/я- 67, Моноциты-5,Лимфоциты - 27, СОЭ - 36 мм/ч. Биохимический анализ крови от 17.06.11 г. общий белок 68,66 г/л, креатинин 47,09 мкмоль/л,кальций общ-2,23 ммоль/л, калий 4,57 ммоль/л,натрий 134,2 ммоль/л, хлориды 102,3 ммоль/л, АлаТ 0,12, АсаТ 0,31 мккат/л, билирубин общий 3,9 ммоль/л, холестерин 10,78 ммоль/л, триглицериды 3,70 ммоль/л, В-липопротеиды 164 ед Гликемический профиль от 17.06.11 г. натощак 10,7 ммоль/л, постпрандиальный уровень 17,0 - 25,0-24,0 ммоль/л, от 27.06.05 г. натощак 7,4 ммоль/л,после еды 12,2 - 14,1 - 16,1 ммоль/л Гликолизированный гемоглобин от 17.06.11 г. 10,5 (норма 4-6) ИФА на маркеры гепатита от 17.06.11 г. отрицательные Кровь наот 09.06.11 г. отр Кровь на ВИЧ от 13.06.11 г. отр Кровь на коагулограммуфаза 1) ПВ - ПОМНО - 16,2- 1,25 (13-16 - 0,8-1,3) АЧТВ 32,0 сек,фибриноген 6,10 г/л Общий анализ мочи от 17.06.11 г.-кол-во 120,0 мл,цвет- жел, прозрачность-полная, относительная плотность 1018, реакция 5,0, белок - 0,26 г/л,глюкоза- полож., эпителий перех - 0-1 в п/з,лейкоциты - 0-1 в п/з, эритр - значит, кол-во, слизь . В динамике общий анализ мочи от 21.06.11 г.-колво 250 мл, цвет- жел, прозрачность-полная,относительная плотность 1012, реакция 5,0, белок 0,066 г/л, глюкоза- полож., эпителий перех - 0-1 в п/з,лейкоциты - 3-5 в п/з, эритр - 2-3-6 в п/зр, цилиндры гиалиновые 1-2 в п/зр, слизь , бактерии . УЗИ гепатодуоденальной зоны от 17.06.11 г. Печень правая доля- толщина 4,4 см, высота 11,9 см,левая доля толщина 2,9 см, высота 5,1 см. Контур печени ровный,эхоструктура однородная,эхоплотность умеренно повышена. Внутрипеченочные желчные протоки не расширены. Портальная вена 0,9 см. Желчный пузырь форма овальная, размеры 6,62,1 см, стенки пузыря ровные в полости пузыря конкрементов нет. Холедох 0,4 см. Поджелудочная железа размерыголовка 1,6 см, тело 1,2 см, хвост 1,4 см. Контуры железы ровные, эхоструктура неоднородная,сниженной эхогенности. Вирсунгов проток не расширен. Селезеночная вена диаметр 0,4 см. Площадь селезенки 10,33,2 см. Контур ровный,эхоструктура однородная, эхоплотность обычная. Заключение Диффузные изменения паренхимы печени,поджелудочной железы. Проведенное лечение 1. Режим 2, диета 9. 2. Лантус 18 ед п/к - 4 дня, 20 ед п/к - 8 дней 3. Хумалог утром - 5 ед, обед 5 ед, вечером 5 ед п/к - 4 дня, утром 8 ед, обед 8 ед, вечером 8 ед п/к - 8 дней 4. Диротон 10 мг 1/2 таб утром - 7 дней 5. Актовегин 200 мг 200 мл физ р-ра в/в кап 10 дней. 6. Тромбо - Асс 50 мг 1 таб н/н - 12 дней. 7. Цеф-три - 1 г 1 р в день - 7 дней. 8. Фурамаг 50 мг - 1 тб 3 р в день - 7 дней. 22.06.11 г. - под контролем ангиографа проведена трансплантация фетальных клеток поджелудочной железы в объеме 4109. Выписывается в удовлетворительном состоянии под наблюдение эндокринолога. 3 В динамике при обследовании через 3,5 месяца снижение гликированного гемоглобина - 9,1,снижение тощаковой до 6,0 ммоль/л,постпрандиальной до 9,6 ммоль/л, уменьшение клитнических сипмтомов полинейропатии. Дозы Инсулина - Лантус -16 едр в день, Хумалог по 6 ед 3 р в день. Пример 2. Больной К. А., 1984 г.р., находился на стационарном лечении в терапевтическом отделении 4 РГП ННМЦ с 27.11.10 г. по 07.12.10 г. Клинический диагноз Сахарный диабет, тип 1, тяжелой степени тяжести, в стадии декомпенсации. Осложнения Диабетическая полинейропатия конечностей. Синдром диабетической стопы. Трофическая язва правой стопы. Диабетическая микроангиопатия. Из анамнеза сахарный диабет у больного в течение 10 лет, последние 5-6 отмечает недостаточную компенсацию диабета с прогрессированием осложнений,в течение последнего года длительно незаживающая язва правой стопы. Госпитализирован для решения вопроса о трансплантации фетальных клеток поджелудочной железы. Группа крови АВ ,положительный. Обследование Анализы Общий анализ крови от 28.11.10 г. Н- 124 г/л,Эр-4,351012, -8,6109, Цв.пок.-0,85, С/я- 59,Эозинофилы-4, Моноциты-4, Лимфоциты- 33,СОЭ- 57 мм/ч. В динамике общий анализ крови от 06.12.10 г. Н - 131 г/л, Эр-4,491012, -7,4109, Цв.пок.-0,87,С/я-49,Эозинофилы-2,Базофилы-1,Моноциты- 9, Лимфоциты- 39, СОЭ- 30 мм/ч. Биохимический анализ крови от 28.11.10 г. общий белок 84,72 г/л, альбумин 38,4 г/л, белковые фракции альбумины 45,7, 1 глобулии-2,5, 2 глобулин 13,7,- глобулин 11,8, -глобулин 26,3,мочевина 5,28 ммоль/л, креатинин 55,69 мкмоль/л,кальций общ-2,45, ионизиров. 1,19 ммоль/л, калий 4,45 ммоль/л, натрий 143,7 ммоль/л, АлаТ 0,47,АсаТ 0,36 мккат/л, билирубин общий 15,1 ммоль/л,ГГТП 0,29 мккат/л, холестерин 5,28 ммоль/л, Влипопротеиды 73 ед, амилаза общая 0,70 мккат/л. Гликемический профиль от 28.11.10 г. натощак 12,7 ммоль/л, постпрандиальный уровень 18,4 - 13,5-10,6 ммоль/л, после трансплантации от 04.07.05 г. Показатели Таким образом, трансплантация фетальных клеток поджелудочной железы приводит к достоверному увеличению уровня С-пептида у пациентов с сахарным диабетом типа 1 (р 0.05),4 натощак 9,7, после еды 11,4-11,6-12,2 ммоль/л. Гликолизированный гемоглобин от 28.11.10 г. - 9,9(норма 4-6). Мазок из язвы на бак. посев от 04.12.10 г. Выделено. Чувствителен к Бензилпенициллину,Пефлоксацину,Кларитромицину,Фузидину,Рифампицину,Офлоксацину,Ванкомицину,Нетилмицину,Норфлоксацину, Рокситромицину, Гентамицину,Канамицину,Оксациллину,Тобрамицину,Ципрофлоксацину,Сизимицину,Амикацину Устойчив к Азитромицину,Клиндомицину,Линкомицину. Проведенное лечение 1. Режим 2, диета 9. 2. Актрапид утром - 10 ед, обед 10 ед, вечером 10 ед п/к - 10 дней 3. Протафан утром 10 ед, на ночь - 10 ед - 7 дней,утром 10 ед, на ночь - 12 ед п/к 3 дня 4. Актовегин 200 мг 200 мл физ р-ра в/в кап 10 дней 5. Тиоктацид 600 мг в/в капельно на физ. растворе 5 6. Тромбо - Асс 100 мг 1 таб н/н - 7 дней. 7. Аугментин 600 мг 3 р в день в/в струйно - 6 дней. 30.11.10 г.- проведена трансплантация фетальных клеток поджелудочной железы в объеме 6109. Выписывается в удовлетворительном состоянии под наблюдение эндокринолога. В динамике при обследовании через 4 месяца снижение гликированного гемоглобина - 8,9,снижение тощаковой до 6,2 ммоль/л,постпрандиальной до 8,9 ммоль/л, уменьшение клинических сипмтомов полинейропатии,значительное уменьшение размеров трофической язвы. Дозы Инсулина - Протафан- 10 ед 2 р в день,Актрапид по 6 ед 3 р в день. По данному трансплантация фетальных клеток поджелудочной железы в АО Национальный научный медицинский центр проведена 15 больным. В таблице показаны изменение основных показателей у пациентов с сахарным диабетом типа 1 до и через 6 месяцев после трансплантации фетальных клеток поджелудочной железы, гдепациенты до трансплантации фетальных клеток поджелудочной железы,- пациенты после трансплантации фетальных клеток поджелудочной железы р - вероятность различий, рассчитанная по сравнению с 1 группой. С-пептид улучшению показателей углеводного обмена в виде снижения средних значений тощаковой и постпрандиальной гликемии, средних значений гликолизированного гемоглобина,повышению средних значений С-пептида наряду с уменьшением потребности в экзогенном инсулине. Это свидетельствует об улучшении функции собственных -клеток поджелудочной железы,позволяет отказаться от иммуносупрессивной терапии и тем самым улучшить качество жизни у данной категории больных. терапию, трансплантацию фетальных клеток поджелудочной железы, отличающийся тем, что взвесь фетальных клеток поджелудочной железы вводят внутривенно в объеме 10 мл на 400 мл физиологического раствора. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ лечения сахарного диабетатипа,включающий стандартную сахароснижающую