Способ диагностики адаптации регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе

(51) 61 33/24 (2006.01) 61 33/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ 2,5 месяцев, определение адаптации лимфатических узлов печени к токсическому стрессу на 1,7,14 и 21 сутки после окончания моделирования хронической интоксикации, исследование субклеточных структур регионарных лимфатических узлов печени морфологическими,морфометрическими,цитологическими и статистическими методами по сравнению с контролем, при этом, если на 21 сутки после окончания моделирования хронической интоксикации хлористым кадмием значения исследуемых параметров регионарных лимфатических узлов печени, таких как объемная плотность структур, таких как капсула, краевой синус, первичные лимфоидные узелки, вторичные лимфоидные узелки, корковое вещество, мозговые тяжи, а также показатели клеточного состава мозговых тяжей паренхимы печеночного лимфатического узла приближены соответственно к таковым значениям в контроле, то диагностируют адаптацию регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе. Предложенный способ определения адаптации регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу, созданному хроническим воздействием хлористого кадмия, повышает эффективность определения адаптивных перестроек во всех структурных компонентах лимфатического узла, которые активизируются в более поздние сроки после окончания моделирования хронической интоксикации хлористым кадмием и способствуют частичному восстановлению структурной организации лимфатического узла печени.(72) Жаксылыкова Айман Камаловна Нурмухамбетова Балумаржан Наскеновна Мустафина Альфия Рафкатовна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Казахский национальный медицинский университет им. С.Д.Асфендиярова Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Хребтовский А.М. Анатомо-функциональная характеристика печеночных лимфатических узлов при токсическом поражении печени четыреххлористым углеродом и спиртом// Автореф.канд.дисс., 2007, М., с.3-9(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АДАПТАЦИИ РЕГИОНАРНЫХ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПЕЧЕНИ К ТОКСИЧЕСКОМУ СТРЕССУ ПРИ ЭКЗОТОКСИКОЗЕ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и гепатологии, позволяет изучить на экспериментальной модели хронического экзотоксикоза хлористым кадмием при использовании морфологических,морфометрических и статистических методов развитие в регионарных лимфатических узлах печени адаптивных перестроек к токсическому стрессу. Способ диагностики адаптации регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе включает моделирование хронической интоксикации путем ежедневного перорального введения хлористого кадмия в течение Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и гепатологии, позволяет изучить на экспериментальной модели хронического экзотоксикоза хлористым кадмием при использовании морфологических,морфометрических и статистических методов развитие в регионарных лимфатических узлах печени адаптивных перестроек к токсическому стрессу. Стресс - это способ достижения резистентности(устойчивости) организма при действии на него повреждающего фактора. В здоровом организме существуют механизмы для борьбы с неблагоприятным фактором, который может привести организм к гибели. При различных неблагоприятных воздействиях на организм наблюдают нарушения в лимфоидных органах в лимфатических узлах и вилочковой железе. В настоящее время, в связи с антропогенными загрязнениями окружающей среды и продуктов питания возникает серьезная проблема защиты здоровья человека. Более того, непригодность среды обитания ведет к загрязнению внутренней среды организма, поэтому динамическое равновесие между окружающим экзоэкологическим и организменным эндоэкологическим пространством определяет состояние здоровья, качество жизни и ее продолжительность. В этих условиях создается состояние хронического средового стресса, при котором значительная нагрузка ложится на органы лимфоидной системы(тимус,селезенку,лимфатические узлы), которые участвуют в поддержании постоянства внутренней среды организма. Эти органы одними из первых реагируют на экзогенные влияния и имеют высокие потенциальные возможности в обеспечении процессов адаптации и компенсации при различных неблагоприятных экологических воздействиях. Среди глобальных загрязнителей окружающей среды роль тяжелых металлов весьма велика. Кадмий среди тяжелых металлов занимает одно из ведущих мест по распространенности,кумулятивной способности и высокой токсичности. Ионы кадмия сохраняются в организме 20-30 лет и очень медленно выводятся из организма, что вызывает состояние хронического токсического стресса. Известен способ изучения региональных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе,включающий моделирование хронической интоксикации на крысах,проведение изучения региональных лимфатических узлов клеток печени к токсическому стрессу по динамике изменения состояния морфофункциональных зон регионарных печеночных лимфатических узлов крыс через 1,2,4 и 7 недель после перорального введения 5 раствора спирта, а также после длительного воздействия четыреххлористого углерода в концентрациях 0,1 мл/кг и 0,2 мл/кг, путем его интраперитонеального введения. Спустя 1,2,4 и 7 недель изучались функциональные зоны печеночного лимфатического 2 узла, которые отвечают на воздействие длительного употребления (в течение 4 недель) 5 спиртового раствора и хронического действия (4 недели) четыреххлористого углерода четко выраженным изменением содержания клеточных элементов и перестройкой структурных зон на гистологических срезах. Воздействие четыреххлористого углерода(4) в дозе 01 мл/кг, по сравнению с контролем,спустя 1-7 недель приводит к увеличению площади,занимаемой паракортикальной зоной,и уменьшению площади мозгового вещества. На протяжении всех сроков (от 1 до 7 недель) в органе сохраняются лимфоидные узелки с центрами размножения. Спустя 4 и 7 недель после действия 4 в дозе 0,1 мл/кг в лимфатическом узле отмечается полнокровие в сосудах и кровоизлияния в мозговых синусах. На протяжении эксперимента происходит увеличение плотности распределения лимфоидных клеток, в большей степени через 2 недели после действия 4 в дозе 0,1 мл/кг - на 7,6-24,0 клеток во всех зонах лимфатического узла(Хребтовский А.М. Анатомофункциональная характеристика печеночных лимфатических узлов при токсическом поражении печени четыреххлористым углеродом и спиртом. Автореф. канд. дисс.-2007. - М. - с. 3-9). Недостатками известного способа является следующее, использована другая экспериментальная модель экзотоксикоза путем введения 4 в дозе 0,1 мл/кг, а также 5 спиртового раствора, другие сроки исследования. В структурах лимфатического узла не определены изменения адаптивного характера. Нет конкретных данных по цитологическим изменениям, автор ограничивается только общим упоминанием о повышении плотности лимфоидных клеток. Задачей изобретения является создание эффективного способа диагностики адаптации регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе, при использовании которого возникает возможность определения адаптивных перестроек,развивающихся в структурах регионарных лимфатических узлов печени при токсическом стрессе, созданном на экспериментальной модели хронического экзотоксикоза хлористым кадмием. Это дает возможность правильной диагностики иммунологических проявлений и лечения повреждений лимфатических узлов различными внешними факторами, а также использования данных в качестве эталонов для морфофункциональных исследований органов иммунной системы при различных экзо- и эндотоксических воздействиях на организм. Техническим результатом изобретения является создание эффективного способа определения развития адаптивных перестроек в структурах лимфатического узла печени, развивающихся при токсическом стрессе в условиях экзотоксикоза кадмием. Эти результаты могут способствовать повышению эффективности диагностики и лечения различных патологий лимфоидных органов,вызванных различными ксенобиотиками. Способ диагностики адаптации регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе включает моделирование хронической интоксикации путем ежедневного перорального введения хлористого кадмия в течение 2,5 месяцев, определение адаптации лимфатических узлов печени к токсическому стрессу на 1,7,14 и 21 сутки после окончания моделирования хронической интоксикации, исследование субклеточных структур регионарных лимфатических узлов печени морфологическими,морфометрическими,цитологическими и статистическими методами по сравнению с контролем, при этом, если на 21 сутки после окончания моделирования хронической интоксикации хлористым кадмием значения исследуемых параметров регионарных лимфатических узлов печени, таких как объемная плотность структур, таких как капсула, краевой синус, первичные лимфоидные узелки, вторичные лимфоидные узелки, корковое вещество, мозговые тяжи, а также показатели клеточного состава мозговых тяжей паренхимы печеночного лимфатического узла приближены соответственно к таковым значениям в контроле, то диагностируют адаптацию регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе. Способ осуществляют следующим образом. Лабораторному животному (белые крысы-самцы,массой тела 180-200 г.) проводят моделирование хронического экзотоксикоза путем ежедневного перорального введения в пищевой рацион крысы хлористого кадмия в дозе 3 мг /кг массы тела, в течение 2,5 месяцев. Адаптацию регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе исследуют на 1,7,14 и 21 сутки после окончания моделирования хронической интоксикации хлористым кадмием. Субклеточные структуры регионарных лимфатических узлов печени исследуют морфологическими,морфометрическими,цитологическими и статистическими методами по сравнению с контролем. При этом, если на 21 сутки после окончания моделирования хронической интоксикации хлористым кадмием значения исследуемых параметров регионарных лимфатических узлов печени, таких как объемная плотность структур таких как капсула, краевой синус, первичные лимфоидные узелки, вторичные лимфоидные узелки, корковое вещество, мозговые тяжи, а также показатели клеточного состава мозговых тяжей паренхимы печеночного лимфатического узла приближены соответственно к таковым значениям в контроле,то диагностируют адаптацию регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе. Пример. Предлагаемый способ был изучен в эксперименте на белых крысах - самцах, в количестве 130 штук, массой 180 - 200 г. в возрасте 5-6 месяцев. Хроническую интоксикацию хлористым кадмием моделировали путем ежедневного перорального введения в пищевой рацион крыс хлористого кадмия в дозе 3 мг /кг массы тела, в течение 2,5 месяцев. Выявлены значительные морфофункциональные, адаптивные изменения,развивающиеся в региональных лимфатических узлах печени и их субклеточных структурах в процессе их компенсаторноадаптационной перестройки. На 1 сутки после окончания моделирования хронической интоксикации хлористым кадмием в структурах печеночного лимфатического узла наблюдались значительные морфофункцинальные,адаптивные изменения в виде отека капсулы и паренхимы, расширения площади всех синусов лимфоузла. За счет развития отека паренхимы и расширения просвета синусов возрастала дренажная функция лимфоузла. Это говорит об усилении дренажной функции и повышенном выносе клеток из лимфатического узла, вследствие развития адаптивных перестроек в лимфоидной ткани в ответ на токсический стресс. Через 1 сутки, после окончания хронической интоксикации хлористым кадмием площадь паракортикальной зоны коркового вещества лимфоузла печени уменьшалась, что говорит об адаптивной реакции коркового вещества паренхимы на воздействие,поступающей из печени лимфы, в виде снижения площади структур, относящихся к Т - зависимым зонам, вследствие гибели клеток из-за токсической стресс-реакции (таблица 1). Через 1 сутки площадь первичных лимфоидных узелков в корковом веществе уменьшалась, а площадь вторичных лимфоидных узелков увеличивалась (таблица 1). Это свидетельствует о развитии В-зависимого гуморального ответа на воздействие токсиканта, что сопровождалось активным формированием центров размножения и разрастанием медуллярных тяжей мозгового вещества, за счет развития адаптивных перестроек в лимфоидной ткани. Указанное явление служит необходимым условием эффективного образования антител и развития иммуннопролиферативных,адаптивных реакций в центрах размножения. Цитологическими методами была выявлена активация В-лимфоцитов,что связано с адаптационными процесссами и повышением чувствительности к продуктам макрофагов. Через 1 сутки, после экзотоксикоза во всех структурных компонентах паренхимы лимфоузла печени,развивались иммуноморфологические реакции в виде пролиферации,бласттрансформации и дифферинциации клеток, в ответ на воздействие токсиканта, что связано с адаптивными реакциями,протекающими в лимфатическом узле печени. Морфодинамика цитологического состава разных зон лимфатического узла сопровождалась неодинаковыми по интенсивности и направленности качественными изменениями клеток разных популяций (таблица 2). Исходя из сказанного,можно заключить, что, поступающая из печени лимфа, содержащая токсикант и его метаболиты,подвергается обработке в регионарных лимфатических узлах, реагирующих на токсический стресс очень характерно - нарастанием площади 3 структур, занимаемых В- зонами мозговых тяжей и вторичных лимфоидных узелков, что напрямую связано с адаптационными процессами,протекающими в лимфоидной ткани. На 7, 14 и 21 сутки проводились повторные морфологические,морфометрические,цитологические и статистические исследования структурных компонентов лимфатического узла печени крыс, которые показали постепенное снижение степени морфофункциональных нарушений. К 21 суткам после окончания хронической интоксикации хлористым кадмием площади капсулы,паракортикальной зоны,лимфоидных фолликулов, мозговых тяжей и синусов лимфатического узла приближались к контрольным значениям. Цитологические исследования на 21 сутки показали значительное снижение числа больших, бластных форм лимфоцитов и возрастание числа малых лимфоцитов. Число макрофагов, дегенерирующих и тучных клеток также значительно уменьшалось,приближаясь к контролю. Все это свидетельствует о положительных тенденциях и снижении нарушений,вследствие активации адаптационных,компенсаторно-приспособительных механизмов. Однако изменения в структуре лимфатического узла на 21 сутки в некоторой степени еще сохранялись,что свидетельствовало о долговременности адаптационных, восстановительных процессов. Таблица 1 Адаптивные изменения в структурной организации печеночных лимфатических узлов печени крыс при токсическом стрессе, развивающемся в условиях хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозе 3 мг/кг м.т. (М) Компоненты Контроль 1-е сутки после 7-е сутки после 14-е сутки после 21-е сутки после лимфатического узла экзотоксикоза экзотоксикоза экзотоксикоза экзотоксикоза Капсула 8,370,13 13,540,09 12,140,11 11,370,21 10,070,12 Краевой син 5,420,12 9,360,11 8,370,09 7,180,15 6,490,24 Первичные 15,100,21 9,420,13 10,790,12 11,280,47 12,970,28 лимфоидные узелкиВторичные лимфоид- 11,420,09 19,350,16 17,780,19 16,890,57 15,970,32 ные узелкиПаракортикальная зона 10,690,23 17,160,75 15,210,26 14,810,38 12,590,09 Мозговые синусы 15,360,15 22,480,55 20,520,12 19,490,17 17,150,32 Мозговые тяжи 13,010,11 5,660,17 7,460,07 10,970,46 12,560,14 Примечание- объемная плотность структур ( от объема органа).- обозначены величины, достоверно отличающиеся от соответствующих показателей у крыс контрольной группы. Таблица 2 Адаптивные изменения клеточного состава мозговых тяжей паренхимы печеночного лимфатического узла крыс при токсическом стрессе, развивающемся в условиях хронического экзотоксикоза хлористым кадмием в дозе 3 мг/кг м.т. (М) Клетки 1-е сутки после экзотоксикоза 23,120,45 7-е сутки после экзотоксикоза 24,050,11 14-е сутки после 21-е сутки после экзотоксикоза экзотоксикоза 25,020,31 27,460,56 Малые 33,110,08 лимфоциты Средние 8,450,12 2,080,16 2,760,55 3,150,62 4,650,06 лимфоциты Большие 4,80,21 9,330,16 9,850,32 8,270,31 7,890,13 лимфоциты Плазмобласты 4,780,29 8,180,46 7,960,18 7,120,747,030,09 Плазматические 18,140,08 25,740,08 24,130,12 23,980,24 23,370,12 клетки Макрофаги 1,480,16 5,620,56 5,450,12 4,980,19 4,370,72 Нейтрофилы 1,320,07 3,420,06 2,850,27 2,430,15 2,080,42 Эозинофилы 1,450,08 2,990,25 2,620,03 2,120,21 2,010,24 Тучные клетки 0,150,06 5,190,19 4,610,13 4,070,11 3,560,06 Дегенерирующ 0,220,07 7,340,28 6,080,55 5,870,15 4,570,18 ие клетки Примечание- обозначены величины, достоверно отличающиеся от соответствующих показателей у крыс контрольной группы. 4 В процессе адаптивного напряжения к токсическому стрессу в условиях хронического экзотоксикоза хлористым кадмием погибло - 3 крысы. В процессе экзотоксикоза на 57 и 63 сутки погибли 2 крысы. 1 крыса погибла на 3 сутки, после окончания экзотоксикоза. Это свидетельствует о том, что в лимфатических узлах печени крыс, находящихся в процессе адаптивного напряжения, также, как в самом органе,могут происходить значительные энергетические траты, ускоренное расходование их и истощение резервных возможностей лимфатического узла и самой печени, которые приводят к формированию патологических процессов и к гибели животного. Площадь паракортикальной зоны Площадь мозговых синусов Эти данные свидетельствуют о деструктивных процессах, развивающихся в паренхиме коркового вещества лимфатического узла печени и неспособности лимфоузла к процессам детоксикации и лимфопоэза,что способствовало гибели животного. 2,970,05- Эти данные свидетельствуют о процессах деструкции в мозговом веществе лимфатического узла печени. Происходило полное распадение мозговых тяжей, что способствовало гибели животного из-за неспособности лимфоузла печени к процессам детоксикации и лимфопоэза. 31,74 1,18 Эти данные свидетельствуют о полной деструкции мозгового вещества лимфоузла печени,нарушении всех его функций, что способствовало гибели крысы.- объемная плотность структур ( от объема цитоплазмы)- отмечены отличия, достоверные относительно соответствующих величин в контроле. Таким образом,предложенный способ определения адаптации регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу,созданному хроническим воздействием хлористого кадмия, повышает эффективность определения адаптивных перестроек во всех структурных компонентах лимфатического узла,которые активизируются в более поздние сроки после окончания моделирования хронической интоксикации хлористым кадмием и способствуют частичному восстановлению структурной организации лимфатического узла печени. Это дает возможность правильного диагностирования и лечения различных патологий лимфоидных органов на разных этапах развития болезни. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики адаптации лимфатических узлов печени к стрессу при экзотоксикозе,моделирование хронической хлористым кадмием путем регионарных токсическому включающий интоксикации ежедневного перорального введения хлористого кадмия в течение 2,5 месяцев, определение адаптации лимфатических узлов печени к токсическому стрессу на 1,7,14 и 21 сутки после окончания моделирования хронической интоксикации хлористым кадмием, исследование субклеточных структур регионарных лимфатических узлов печени морфологическими,морфометрическими,цитологическими и статистическими методами по сравнению с контролем, отличающийся тем, что, если на 21 сутки после окончания моделирования хронической интоксикации хлористым кадмием значения исследуемых параметров регионарных лимфатических узлов печени, таких как объемная плотность структур, капсула, краевой синус,первичные лимфоидные узелки,вторичные лимфоидные узелки, корковое вещество, мозговые тяжи, а также показатели клеточного состава мозговых тяжей паренхимы печеночного лимфатического узла приближены соответственно к таковым значениям в контроле, то диагностируют адаптацию регионарных лимфатических узлов печени к токсическому стрессу при экзотоксикозе.