Способ повышения иммуногенности вакцин против опасных инфекций

(51) 61 39/00 (2006.01) 61 39/07 (2006.01) 61 39/02 (2006.01) 61 31/04 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ иммуногенности вакцин против особо опасных инфекций животных. Способ повышения иммуногенности вакцин против опасных инфекций, заключающийся во введении вакцинного препарата и иммуномодулятора, в качестве иммуномодулятора используют препарат в виде смеси водного раствора формальдегида 36,5-40-ной концентрации и изотонического раствора натрия хлорида 0,85-0,95-ной концентрации при соотношении весовых частей растворов 2-6994-998,при этом иммуномодулятор вводят подкожно спустя 3040 минут после введения вакцинного препарата, а вакцинный препарат вводят в разведении изотоническим раствором натрия хлорида 0,85-0,95 ной концентрации в соотношении не более 19, при этом в качестве вакцинного препарата используют вакцину на основе сибиреязвенного авирулентного штамма 55 ВНИИВВиМ, а также в качестве вакцинного препарата используют инактивированную культуру вирулентного штамма эмфизематозного карбункула.(72) ГОРЕЛОВ Юрий МихайловичЛаскавый Владислав НиколаевичСултанов Ахметжан АкиевичСУЩИХ Владислава Юрьевнабутлп спен(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт Государственное научное учреждение Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук(56) Вакцина против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота и овец, ТУ 46-21-1527-84(54) СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ИММУНОГЕННОСТИ ВАКЦИН ПРОТИВ ОПАСНЫХ ИНФЕКЦИЙ(57) Изобретение относится к области ветеринарии, в частности, к специфической профилактике особо опасных инфекционных болезней животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении Изобретение относится к области ветеринарии, в частности, к специфической профилактике особо опасных инфекционных болезней животных. Известен способ специфической профилактики против сибирской язвы сельскохозяйственных животных, включающий иммунизацию животных живой противосибиреязвенной вакциной Вакцина против сибирской язвы животных из штамма 55 ВНИИВВиМ живая, ГОСТ Р 52616-2006. Известен также способ специфической профилактики против эмфизематозного карбункула,включающий иммунизацию животных вакциной против эмфизематозного карбункула Вакцина против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота и овец, ТУ 46-21- 1527-84. Недостатком указанных способов является то, что они недостаточно высокоиммуногенны и требуют введения высокой иммунизирующей дозы препаратов. Задачей изобретения является повышение эффективности специфической профилактики против особо опасных инфекций животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении иммуногенности вакцин против особо опасных инфекций животных. Способ повышения иммуногенности вакцин против опасных инфекций, заключающийся во введении вакцинного препарата и иммуномодулятора,в качестве иммуномодулятора используют препарат в виде смеси водного раствора формальдегида 36,5-40 ной концентрации и изотонического раствора натрия хлорида 0,85-0,95-ной концентрации при соотношении весовых частей растворов 2-6994-998,при этом иммуномодулятор вводят подкожно спустя 30-40 минут после введения вакцинного препарата, а вакцинный препарат вводят в разведении изотоническим раствором натрия хлорида 0,85-0,95 ной концентрации в соотношении не более 19, при этом в качестве вакцинного препарата используют вакцину на основе сибиреязвенного авирулентного штамма 55-ВНИИВВиМ, а также в качестве вакцинного препарата используют инактивированную культуру вирулентного штамма эмфизематозного карбункула. Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Пример 1. Приготовление раствора для инъекций. Для приготовления раствора для инъекций берут 36,5-ный медицинский раствор формальдегида и раствор натрия хлорида 0,85-ной концентрации при соотношении весовых частей растворов 1500 соответственно. К 0,2 см 3 36,5-ного медицинского раствора формальдегида добавляют стерильный 99,8 см 3 0,85-ный физиологический раствор хлорида натрия. Смесь растворов тщательно перемешивают и хранят в темном месте при температуре 15-35 С. Иммуномодулятор представляет собой прозрачный бесцветный раствор без запаха. Вакцина живая жидкая на основе сибиреязвенного авирулентного штамма 55 ВНИИВВиМ представляет собой взвесь живых спор бескапсульной слабовирулентной культуры сибиреязвенного штамма 55 ВНИИВВиМ в 30-ном 2 нейтральном растворе глицерина. Жидкая вакцина прозрачная или слегка опалесцирующая беловатая суспензия однородной консистенции. Количество живых спор для подкожного применения 22,02,0 млн/см 3. Вакцина против эмфизематозного карбункула представляет собой формалинизированную культуру вирулентного штамма 15,осажденную на геле алюминия гидроксида в виде суспензии серовато белого цвета с быстро выпадающим осадком, который при встряхивании легко разбивается в равномерную взвесь и надосадочной жидкости желтоватого цвета. Пример 2. Для выявления отсутствия токсического действия,раствор для инъекций вводят внутримышечно белым мышам в дозах 5,0 25,0 50,0 см 3/кг, с содержанием 0,2 см 3 раствора 36,5-ного формальдегида и 99,8 см 3 0,85 раствора хлорида натрия и методом пробитанализа поиопределяют токсичность и устанавливают оптимальную концентрацию формальдегида в растворе. В результате препарат в дозе 10 раз превышающий концентрацию готовой лекарственной формы не оказывал существенного влияния на белых мышей. Полученные данные свидетельствуют о низкой токсичности раствора для инъекций на основе малых концентраций формальдегида. Пример 3. Оценка иммуногенности живой вакцины против сибирской язвы. Здоровых морских свинок, массой 300-340 г. разделили на 10 групп 5 опытных и 5 контрольных, по 7 и 10 голов в каждой. Всем животным ввели вакцину из штамма 55-ВНИИВВиМ, концентрация живых сибиреязвенных спор составляла 44 млн/мл . Вакцину вводили подкожно в объме 0,5 см 3 цельную и в разведениях - 13 19 127 181. Через 40 минут животным 5 опытных групп вводили также подкожно иммуномодулятор на основе смеси растворов формальдегида и хлорида натрия в дозе 0,5 см 3. Контрольным животным других 5 групп вводили только вакцину без иммуномодулятора. Дополнительно была сформирована вторая контрольная группа животных из 6 морских свинок,которых не вакцинировали. Через 12 суток проводили заражение опытных и контрольных животных сибиреязвенной реферансзаражающей культурой штамма второй вакцины Ценковского М 71, 71/12. Результаты оценки иммуногенности инактивированной вакцины против сибирской язвы приведены в таблице 1. Из таблицы 1 следует, что сумма отклонений показателей иммуногенности для опытных групп составляет 2,15, а для контрольных - 1,49. Находим значение иммунизирующей дозы,которое для опытных групп ИМ Д 50 составляет 0,340 млн. спор, а для контрольных 1,0 млн. спор. Из данных, представленных в таблице 1, видно, что вакцинация морских свинок живой противосибиреязвенной вакциной из штамма 55 ВНИИВВиМ и последующее введение иммуномодулятора безвредно для животных и обуславливает формирование напряженного иммунитета, ИМ Д 50 составляет 0,34 млн. спор. Введение морским свинкам цельной вакцины против сибирской язвы вызвало гибель 3 животных после вакцинации, во второй группе, что говорит о достаточно высокой реактогенности вакцины. Количество выживших животных,вакцинированных с применением иммуномодулятора составляет 13 голов, а животных, вакцинированных без иммуномодулятора - 9. При этом, количество павших животных в первом случае с иммуномодулятором составило 17 голов, а во втором без иммуномодулятора -21. Процент выживших животных в группах составил- в контрольных группах- 30,0, где из 30 голов выжило 9. Таким образом, иммуногенность вакцины против сибирской язвы по сравнению с контрольными группами увеличилась на 44,3 (43,3-30) 30. Кроме этого, введение иммуномодулятора значительно снизило реактогенность сибиреязвенной вакцины на 30, поскольку из 10 контрольных животных второй группы до заражения пало 3 головы. При этом, в пяти опытных группах 1, 3, 5, 7, 9 у животных отечность на месте введения вакцины была незначительной 12 см и исчезала на 2-3 сутки, тогда как у свинок контрольных групп 2, 4, 6, 8, 10 она составляла от 25 см и сохранялась до 5-6 суток. Таким образом, применение иммуномодулятора на основе смеси растворов формальдегида с раствором натрия хлорида при вакцинации морских свинок живой противосибиреязвенной вакциной из штамма 55 ВНИИВВиМ способствует снижению реактогенности вакцины и стимулирует повышение иммунитета у опытных животных на 44,3 по сравнению с контрольными животными, привитыми только противосибиреязвенной вакциной. Пример 4. Оценка иммуногенности инактивированной вакцины против эмфизематозного карбункула. Было сформировано также, как в примере 1, 10 групп морских свинок по 10 голов в каждой. Всех животных вакцинировали инактивированной вакциной против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота и овец. Вакцину вводили в объме 0,5 см 3 подкожно в область брюшных мышц,при этом вводили цельную вакцину и разведнную 13, 19, 127, 181. Морским свинкам опытных групп после введения вакцины через 40 минут дополнительно вводили подкожно иммуномодулятор в объеме 0,5 см 3,животным контрольных групп иммуномодулятор не применяли. Дополнительно была сформирована контрольная группа животных из 6 морских свинок, которых не вакцинировали. Через 14 суток всех животных заражали подтитрованной споровой культурой 15 в объеме 0,6 см 3, которую вводили внутримышечно в смеси с 10-ным раствором хлористого кальция. Наблюдения за животными проводили в течение 10 суток с момента заражения. Результаты опыта оценки иммуногенности инактивированной вакцины против эмфизематозного карбункула представлены в таблице 2. Из таблицы 2 видно, что при сравнении значений иммуногенности в 5 и 6 группах животных введение иммуномодулятора в 5 группе обеспечивает более высокую защиту от заражения возбудителем эмфизематозного карбункула,значение иммуногенности составляет 0,5, а в контрольной - 6 группе оно составляет 0,16, при снижении количества вводимых микробных клеток возбудителя от 116,6 тыс. м.к./см 3 до 38,9 тыс. м.к./см 3, т.е. в 3 раза. Таким образом, достигается та же иммуногенность как и при введении повышенного количества микробных клеток. Из таблицы 2 также следует, что сумма отклонений показателей иммуногенности для опытных групп составляет 2,16, а для контрольных - 1,82. Таким образом, для опытных групп Им Д 50 составляет 5,5340, а для контрольных 5,7670. Следовательно, снижение иммунизирующей дозы в опытных группах приводит к сохранению защитных свойств вакцины от возбудителя эмфизематозного карбункула. Как видно из данных, представленных в таблице 2,количество выживших животных в опытных группах 1,3, 5,7,9 составляет 13 голов, а в контрольных 2,4,6,8,10 - 11, а количество павших животных 17 и 19, соответственно. Процент выживших животных в группах составил- в контрольных группах- 36,6, где из 30 голов выжило 11. Применение иммуномодулятора при вакцинации морских свинок инактивированной вакциной против эмфизематозного карбункула сократило число павших и увеличило число выживших, т.е. повысило иммуногенность инактивированной вакцины на 18,3. В результате проведенных исследований установлено, что обе вакцины против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула повышают свою иммуногенность при введении иммуномодулятора,сохраняют свои защитные свойства в разведении не более 19, при этом снижается реактогенность вакцины против сибирской язвы. Использование способа повышения иммуногенности вакцин против особо опасных позволит значительно повысить качество специфической профилактики,снизить иммунизирующую дозу и реактогенность вводимых препаратов. Таблица 1 Оценка иммуногенности живой вакцины против сибирской язвы(развед. 181) 11. Контрольная Без вакцины и иммуномодулятора ИТОГО 1. Концентрация Кол-во Кол-во Выжило Иммуногенность живых спор привитых животных, (голов) Таблица 2 Оценка иммуногенности инактивированной вакцины против эмфизематозного карбункулаХарактеристика группы Концентрация Кол-во группы вакцины привитых Характеристика группы Концентрация Кол-во группы вакцины привитых ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ повышения иммуногенности вакцин против опасных инфекций, заключающийся в парентеральном введении животным вакцинного препарата и иммуномодулятора, отличающийся тем, что в качестве иммуномодулятора используют препарат в виде смеси водного раствора формальдегида 36,5-40-ной концентрации и изотонического раствора натрия хлорида 0,850,95-ной концентрации при соотношении весовых частей растворов 2-6994-998,при этом иммуномодулятор вводят подкожно спустя 30-40 минут после введения вакцинного препарата, а вакцинный препарат вводят в разведении изотоническим раствором натрия хлорида 0,850,95-ной концентрации в соотношении не более 19. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве вакцинного препарата используют вакцину на основе сибиреязвенного авирулентного штамма 55 ВНИИВВиМ. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве вакцинного препарата используют инактивированную культуру вирулентного штамма эмфизематозного карбункула.