Способ прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей с аллергическими ринитами

(51) 01 33/53 (2010.01) 61 5/091 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ жизненной емкости легких (ФЖЕЛ) и объема форсированного выдоха за первую секунду (ОФВ 1). При увеличении содержаниядо 484 МЕ/мл,увеличении содержания ЦИК до 0,0250,001 ,увеличении содержания СД 4 до 31,61,5,увеличении содержания -4 до 9,90,4 пг/мл,уменьшении содержания -10 до 4,90,6 пг/мл,снижении показателя ФЖЕЛ до 98,53,4,снижении ОФВ 1 до 93,73,7 прогнозируют риск развития бронхиальной астмы. Предлагаемый способ позволяет с высокой степенью точности прогнозировать риск развития бронхиальной астмы у детей и соответственно своевременно назначить коррекцию функционального состояния иммунной системы для профилактики развития осложнений аллергического ринита, особенно таких потенциально опасных как бронхиальная астма. Способ не сложен в выполнении, может быть использован на поликлинической стадии обследования.(76) Жаханова Ботагоз Амангельдиевна Шортанбаев Алихан Абжанович(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ У ДЕТЕЙ С АЛЛЕРГИЧЕСКИМИ РИНИТАМИ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей с аллергическими ринитами. Способ прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей с аллергическими ринитами включает клинико-лабораторное исследование крови с определением уровня общего, содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), СД 4, -4, -10 и исследование функции внешнего дыхания (ФВД) форсированной Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей с аллергическими ринитами. Бронхиальная астма (БА) детского возраста является серьезной медицинской и социальной проблемой. По распространенности, тяжести течения,сложности диагностики, терапии и реабилитации,социальным и экономическим проблемам бронхиальная астма занимает ведущее место среди заболеваний века и недаром названа парадоксомстолетия Кроме того, отмечается неуклонный рост заболеваемости и смертности детей с бронхиальной астмой. Эпидемиологические исследования в различных регионах мира свидетельствуют,что распространенность бронхиальной астмы стремительно прогрессирует и по данным официальной статистики, за последнее десятилетиевека увеличилась в 1,6 раза. Эпидемиологические исследования, проведенные в Казахстане,также выявили высокую распространенность заболевания, равную 4,6-6,0. Известно, что у детей, больных аллергическим ринитом (АР), последний может способствовать развитию бронхиальной астмы, в результате чего он является одним из факторов риска данного заболевания. На распространенность аллергических заболеваний, в том числе АР и БА оказывает влияние загрязнение окружающей среды химическими соединениями, что подтверждают выполненные эпидемиологические исследования. Эпидемиологические исследования также указывают,что симптомы аллергического ринита, часто сосуществуют с бронхиальной астмой и/или могут ей предшествовать. Так, по данным Ильиной Н.И. с соавт. (1999) у 64 больных детей ринит предшествовал манифестации астмы. На распространенность АР оказывают влияние такие факторы, как возраст, пол, климатогеографические условия, состояние окружающей среды. Таким образом,данные о связи эпидемиологических показателей аллергического ринита и бронхиальной астмы у детей свидетельствуют о наличии потенциальных взаимосвязей в этиологии и патогенезе данных заболеваний. Учитывая вышесказанное, большую актуальность приобретает проблема прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей с аллергическими ринитами с целью дальнейшей профилактики данного заболевания. Известен способ прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей, включающий комплексное изучение факторов, влияющих на развитие бронхиальной астмы, с последующим вычислением и анализом данных относительного и атрибутивного риска. Выявлена группа управляемых предикторов формирования данной патологии, среди которых особое значение имеют частые респираторные вирусные инфекции, хронический аденоидит, такие заболевания желудочно-кишечного тракта, как лямблиоз, дискинезии желчевыводящих 2 путей, дисбиоз кишечника, вскармливание коровьим молоком на первом году жизни, наличие клинических проявлений аллергии, внутриутробное воздействие табачного дыма и тесный контакт с домашними животными. Способ позволяет прогнозировать риск развития астмы у ребенка и выбрать индивидуальную стратегию своевременной профилактики.(А.Н. Узунова,А.М. Дубровская. Прогностическая значимость комплекса факторов риска развития бронхиальной астмы у детей раннего возраста.- Педиатрия.- 3 (31).-2007.- с.24-26) Недостатком данного способа является его невысокая точность, так как он основан только на анализе анамнестических данных, не всегда являющихся достоверными. Известен способ прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей и внуков пробандов,страдающих БА, включающий клинико-генетический анализ, наличие генетических маркеров на хромосоме 5, является убедительными данными за высокий риск развития бронхиальной астмы.. - 1995. - . 33. - . 894-900.) Однако генетические исследования являются дорогостоящими,требующими наличия специального оборудования, что обуславливает их ограниченную доступность. Наиболее близким к заявляемому является способ прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей с аллергическими ринитами,включающий клинико-лабораторное исследование крови на наличие эозинофилии, определение уровня общего и специфических , цитокиновый профиль сыворотки и интерфероновый статус. Эозинофилия,повышение уровней общего,антигенспецифических , цитокинопосредованная гиперпродукция иммуноглобулинов класса ,нарушение интерферонового статуса - снижение физиологического ингибирующего действия ИФН на синтез , свидетельствуют о риске развития Б А.( ,.//. 2007 161(7)669-676.) Недостатком данного способа является его сложность, слишком большой объем дорогостоящих исследований ограничивает применение данного способа на практике. Задачей изобретения является разработка способа прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей с аллергическими ринитами. Технический результат - предлагаемый способ позволяет с высокой степенью точности прогнозировать риск развития бронхиальной астмы у детей и соответственно своевременно назначить коррекцию функционального состояния иммунной системы для профилактики развития осложнений аллергического ринита, особенно таких потенциально опасных как бронхиальная астма. Кроме того, способ не сложен в выполнении,состоит из более простых и доступных клинико 25589 лабораторных исследований,может быть использован на поликлинической стадии обследования. Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей с аллергическими ринитами,включающем клинико-лабораторное исследование крови с определением уровня общего,отличительной особенностью,согласно изобретению, является то, что дополнительно в крови определяют показатели содержания циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), СД 4, -4, -10 и осуществляют исследование функции внешнего дыхания (ФВД) определяют форсированную жизненную емкость легких (ФЖЕЛ) и объем форсированного выдоха за первую секунду (Ф 1),при увеличении содержаниядо 484 МЕ/мл,увеличении содержания ЦИК до 0,0250,001 ,увеличении содержания СД 4 до 31,61,5,увеличении содержания -4 до 9,90,4 пг/мл,уменьшении содержания -10 до 4,90,6 пг/мл,снижении показателя ФЖЕЛ до 98,53,4, снижении ОФВ 1 до 93,73,7 прогнозируют риск развития бронхиальной астмы. Известно, что повышенный уровеньявляется одним из основных наиболее типичных признаков аллергическою воспаления. Обнаруженная нами обратная зависимость между уровнем общегои и показателями, характеризующими вентиляционную способность легких может свидетельствовать о связи степени аллергического воспаления и проходимости дыхательных путей. Уменьшение зависимости рассмотренных параметров после лечения можно расценить, как показатель снижения воспаления,свидетельствующий об эффективности проведенной при атонической форме астмы терапии. Полученные нами результаты подтверждают зависимость функциональных параметров от ряда иммунологических данных,что отражает закономерности изменения воспалительной реакции при разных патогенетических вариантах бронхиальной астмы. Способ осуществляется следующим образом. Исследование клеточного иммунитета. У детей с аллергическим ринитом взятие крови производили в асептических условиях из вены локтевого сгиба в стерильные пробирки. В каждую пробирку предварительно вносили раствор гепарина из расчета 10 ЕД/мл крови. Гепаринизированная кровь смешивалась в объемном соотношении 21 с 3-м раствором желатина на среде 6-м раствором декстрана Т-500 на ЗФР, перемешивалась и помещалась на 20-25 минут в термостат при 37 С. После расслаивания верхний слой осторожно переносили пастеровской пипеткой в центрифужные пробирки и центрифугировали 10 минут при 1000 об./мин на холоду. Для удаления эритроцитов осадок ресуспендировали в 1 мл гемолитического буфера(инкубация 5-10 минут при комнатной температуре) с последующим разбавлением 20-кратным объемом забуференного фосфатами физиологического раствора (ЗФР). Выделение клеток из цельной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколла 3 и верографина позволяет получить клеточные суспензии с высоким содержанием мононуклеаров и свести до минимума необходимость последующего лизиса эритроцитов. С этой целью готовили раствор верографина плотностью 1,077 г/л и наслаивали гепаринизированную венозную кровь, разведенную ЗФР, на равный объем разделяющего раствора (5 мл на 5 мл) в центрифужных пробирках. Центрифугирование пробирок проводили при 400430 в течение 20 минут на холоде и собирали интерфазу, содержащую лимфоциты, при помощи пастеровской пипетки. В случае недостаточного качества разделения центрифугировали дополнительно еще 5-7 минут. Полученную суспензию лимфоцитов трижды отмывали в ЗФР. Выделенные лейкоциты ресуспендировали в необходимом объеме ЗФР, доводя их концентрацию до 1-2 млн./мл, и вносили по 100 мкл клеточных суспензии в -образные лунки 96-луночного планшета для иммунологических реакций. Планшеты центрифугировали на холоде в течение 2 минут при 1000 об./мин, супернатант удаляли, а осадок ресуспендировали в 100 мкл моноклональных антител требуемого разведения на забуференном фосфатами изотоническом растворе с 0,5 бычьего сывороточного альбумина и 0,02 азида натрия. Клетки инкубировали с антителами при 4 С в течение 30 минут с периодически осторожным встряхиванием. После окончания срока инкубации клетки центрифугировали при 4 С в течение 2 минут,осадок ресуспендировали в 150-200 мкл ЗФР,осаждали и подвергали повторной отмывке. Осажденные после повторной отмывки клетки ресуспендировали в растворе меченых антивидовых антител в необходимом разведении на ЗФР с 0,5 сывороточного альбумина и 0,02 азида натрия и инкубировали на холоде в течение 30 минут,аналогично инкубации с первыми антителами. После окончания инкубации клетки подвергали двукратной отмывке и ресуспендировали в 1-м растворе формалина. Полученные фиксированные пробы анализировали с использованием лазерного проточного цитометра. Содержаниеопределяли иммуноферментным методом с использованием набора фирмы(США). Результаты выражали в МЕ/мл. Содержание в сыворотке крови противовоспалительного интерлейкина-4 и интерлейкина-10 проводили количественным иммуноферментным методом (ИФМ) на аппарате Униплан (Россия). Форсированную жизненную емкость легких(ФЖЕЛ) и объм форсированного выдоха за первую секунду (ОФВ 1) определяли путем компьютерной спирометрии на спироанализаторе 3.03 (ФРГ). Исследование проводили в утренние часы, при сидячем положении ребенка, в условиях состояния относительного покоя,то есть в спокойной обстановке после предварительного как минимум получасового отдыха, при достижении полного привыкания к обстановке исследования. При увеличении содержаниядо 484 МЕ/мл,увеличении содержания ЦИК до 0,0250,001 ,увеличении содержания СД 4 до 31,61,5,увеличении содержания -4 до 9,90,4 пг/мл,уменьшении содержания -10 до 4,90,6 пг/мл,снижении показателя ФЖЕЛ до 98,53,4, снижении ОФВ 1 до 93,73,7 прогнозировали риск развития бронхиальной астмы. Эффективность предлагаемого способа подтверждена результатами научных исследований,целью которых было раннее выявление признаков,позволяющих прогнозировать риск развития бронхиальной астмы у детей, страдающих аллергическим ринитом на основе функциональных показателей легких и изменений некоторых показателей иммунограммы. Под нашим наблюдением находилось 166 детей с аллергическим ринитом, которым было проведено исследование по предлагаемому способу. В результате проспективного наблюдения у 39 из них развилась бронхиальная астма. Контрольную группу составили практически здоровые дети. Результаты, полученные при обследовании,представлены в таблице 1. Таблица 1 - Некоторые показатели иммунограммы и ФВД у обследованных детей Показатель Как видно из таблицы 1, показатель содержанияу этих детей с аллергическим ринитом увеличился с 233 до 484 МЕ/мл, содержание ЦИК увеличилось с 0,018 0,002 до 0,0250,001 ,содержание СД 4 увеличилось с 29,41,3 до 31,61,5, содержание -4 увеличилось с 5,10,3 до 9,90,4 пг/мл, содержание -10 уменьшилось с 6,20,7 пг/мл до 4,90,6 пг/мл. У детей, у которых впоследствии развилась БА, данные показатели претерпели еще большие изменения. Так содержаниеу этих детей увеличилось до 595 МЕ/мл, то есть в 2,5 раза, содержание ЦИК увеличилось до 0,0400,002- в 2,2 раза, содержание СД 4 увеличилось до 33,90,9 - в 1,2 раза, содержание 4 увеличилось до 11,51,1 пг/мл - в 2,3 раза,содержание -10 уменьшилось до 4,30,5 пг/мл - в 1,4 раза. При анализе ФВД выявлены следующие данные ФЖЕЛ при АР снижалась с 100,24,7 до 98,53,4, а при развитии бронхиальной астмы достигала 96,73,5. ОФВ 1 при АР снижалась с 96,53,9 до 93,73,7, а при БАдо 91,93,8. Видно, что при данном обследовании отмечалось снижение средних показателей ФВД в группе с последующим развитием астмы. Нами был проведен корреляционный анализ уровня некоторых иммунологических показателей и параметров, характеризующих ФВД, который выявил наличие достоверных связей, позволяющих сделать предварительные выводы о наличии влияния иммунологических показателей на состояние респираторной функции (таблица 2). Таблица 2 Корреляциипоказателей ФВД и некоторых иммунологических параметров обследования детей с АР в зависимости от последующего развития БА Показатель иммунной системы Заметно, что объемные показатели функции внешнего дыхания не имели достоверных корреляционных связей с исследованными параметрами иммунной системы. Однако ряд достоверных корреляций был выявлен в парах скоростного показателя ФВД(ОФВО и иммунологических параметров. Их значения четко соответствовали направленности отклонений соответствующих показателей иммунной реактивности. Так, наиболее достоверные коэффициенты корреляции были зарегистрированы в парах Ф 1 - содержание , ОФВ 1 - содержание-4 и ОФВ 1 - -10 (р 0,05 во всех случаях). Таким образом, комплекс полученных данных клинико-лабораторного исследования позволил нам сделать выводы о наличии иммунологических предикторов развития бронхиальной астмы у детей с аллергическим ринитом, определить ряд граничных показателей клеточного, гуморального,фагоцитарного звеньев иммунной системы и цитокиновой регуляции,могущих служить прогностическими критериями риска развития БА и при необходимости применить своевременное превентивное лечение. Клинический пример 1. Больной Каримов М., 12 лет, наблюдается у аллерголога с 7 летнего возраста. Обратился с жалобами на заложенность носа, чихание, чаще при простудных заболеваниях, которые сопровождаются подъемом до субфебрильной температуры тела, а иногда и без температуры. Обострения заболевания отмечает чаще в осеннее - зимний период. Жилищные условия удовлетворительные, но отопление автономное, в комнате, где ребенок занимается есть сырость. Аллергоанамнез у прадедушки по линии отца бронхиальная астма. Анамнез. Родился от доношенной беременности,протекавшей на фоне раннего и позднего токсикозов. Вес при рождении 3300 гр. Вскармливание грудное, частые ОРВИ с 5 мес. возраста. До 2 лет проявлялись часто - каждые 2-3 мес. Обратились к аллергологу в 5 летнем возрасте. На момент первичного осмотра жалобы на заложенность носа, ринорею, чихание, зуд в носу и глазах, иногда покашливания. При объективном осмотре умеренная интоксикация, астенического телосложения, кожа бледная, носовое дыхание затруднено, риноррея, покашливания, температура тела не повышена. При лабораторном обследовании Вотмечается лимфоцитоз до 50, эозинофилия. На цитограмме из зева и носа клетки железистого эпителия, эозинофилы до 40. ОАМ б/о. На УЗИ брюшной полости признаки застоя желчи в желчном пузыре. На рентгенологическом снимке грудной клетки патологии не обнаружено. Обследован по предлагаемому способу. Содержание- 49 МЕ/мл, ЦИК - 0,026 , СД 432,3, содержание -4 - 10,0 пг/мл, -10 - 4,8 пг/мл, ФЖЕЛ - 99,33,4, ОФВ 1 - 93,1, что позволило прогнозировать риск развития бронхиальной астмы. Ребенку было назначено превентивное лечение, однако оно не было завершено, так как родители покинули город по личным причинам и увезли ребенка в область. Через 11 мес. данный ребенок обращается повторно. У ребенка после перенесенного трахеобронхита появился ночной приступообразный кашель, малопродуктивный, ухудшение носового дыхания. Проводимое лечение не улучшило течение болезни. При повторном обследовании больного обнаружилось умеренные признаки интоксикации,пероральный цианоз,круги под глазами,затрудненное носовое дыхание, кашель навязчивый,вынужденное положение больного. Вумеренное снижение гемоглобина, лейкоцитоз более 10109, лимфоцитоз, эозинофилия, ускоренное СОЭ. В ОАМ лейкоцитурия, гематурия, слизь. По предлагаемому способу обследован повторно. Содержание- 60 МЕ/мл, ЦИК - 0,041 ,СД 4 - 34,2, содержание -4 - 12,1 пг/мл, -10 4,2 пг/мл На спирограмме было отмечено нарушение вентиляционной способности легких, снижение показателей ФЖЕЛ до 94,7, Ф 1 до 89,8,бронхоспазм и дыхательная недостаточность. Что свидетельствовало о развитии БА. Назначена базисная терапия, течение болезни без дальнейшего ухудшения. Выписан в удовлетворительном состоянии под наблюдение участкового врача. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ прогнозирования риска развития бронхиальной астмы у детей с аллергическими ринитами, включающий клинико-лабораторное исследование крови с определением уровня общего Е, отличающийся тем, что дополнительно в крови определяют показатели содержания циркулирующих иммуных комплексов (ЦИК), СД 4,-4, -10 и осуществляют исследование функции внешнего дыхания(ФВД) определяют форсированную жизненную емкость легких(ФЖЕЛ) и объем форсированного выдоха за первую секунду (ОФВ 1), при увеличении содержания Е до 484 МЕ/мл, увеличении содержания ЦИК до 0,0250,001 МЕ, увеличении содержания СД 4 до 31,61,5, увеличении содержания -4 до 9,90,4 пг/мл, уменьшении содержания -10 до 4,90,6 пг/мл, снижении показателя ФЖЕЛ до 98,53,4,снижении ОФВ 1 до 93,73,7 прогнозируют риск развития бронхиальной астмы.