Комплекс О-бензоилоксима 3-(3-изопропоксипропил)-7-(3-морфолинопропил)-3,7-диазабицикло(3.3.1) нонана с В- циклодекстрином в качестве антимикробного и противотуберкулезного средства

(51) 07 471/08 (2010.01) 61 31/4745 (2010.01) 61 31/04 (2010.01) 61 31/06 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области фармакологически активных веществ, конкретно к применению комплекса О-бензоилоксима 3-(3 изопропоксипропил)-7-(3-морфолинопропил)-3,7 диазабицикло 3.3.1 нонан-9-она с циклодекстрином в качестве противомикробного и противотуберкулезного средства. Задача изобретения заключается в расширении ассортимента противомикробных и противотуберкулезных средств. Технический результат - снижение токсичности.(72) Пралиев Калдыбай Джайловович Тогызбаева Нурила Абилькаиркызы Искакова Тыныштык Кадыровна Рустембеков Жанбулат Илесович Ахматуллина Назира Бадретдиновна Бисмилда Венера Лазаревна(73) Акционерное общество Институт химических наук имени А.Б. Бектурова Изобретение относится к области фармакологически активных веществ, конкретно к применению комплекса О-бензоилоксима 3-(3 изопропоксипропил)-7-(3-морфолинопропил)-3,7 диазабицикло 3.3.1 нонана с -циклодекстрином в качестве антимикробного и противотуберкулезного средства. Из используемых в настоящее время в качестве антимикробных и противотуберкулезных средств наиболее близким по применению к заявляемому соединению является рифампицин/Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., 1988, часть 2,с. 257-258/. Недостатком применяемых препаратов является их высокая токсичность. Задача изобретения состоит в расширении ассортимента антимикробных и противотуберкулезных лекарственных средств. Технический результат изобретения - снижение токсичности. Технический результат достигается применением впервые соединения,комплекса О-бензоилоксима 3(3-изопропоксипропил)-7-(3-морфолинопропил)-3,7 диазабицикло 3.3.1 нонана с -циклодекстрином описываемым формулой-3,7 диазабицикло 3.3.1 нонан-9-она с -циклодекстрином под лабораторным шифром ПВТ-11 изучен на антибактериальное действие против грамположительных бактерий (. , .), бактериостатическое и бактерицидное действие в отношении диких чувствительных штаммов микобактерий туберкулезаи острую токсичность. Данные сопоставлялись с показателями рифампицина. Результаты исследования представлены в таблицах 1, 2. В качестве экспериментальных животных использованы белые беспородные мыши. Высокая восприимчивость к туберкулезу этих животных позволяет создать эффективную модель туберкулезной инфекции для изучения химиотерапевтического эффекта исследуемого соединения. Установлено, что резистентность к туберкулезу у мышей повышается с возрастом и весом, поэтому группа подопытных животных должна быть стандартизована по этим параметрам в опыт включают половозрелые самцы и самки весом 18-25 г. Пример 1. Токсичность ПВТ-11. Токсичность препарата определяли путем внутрибрюшинного введения мышам их различных доз. Длительность наблюдения составляла 4 недели. О степени токсичности препарата судили по определению 50 в опытной и контрольной группах животных. Данные сопоставлялись с показателями рифампицина. Результаты исследования представлены в таблицах 1,2. Проведено исследование острой токсичности для белых беспородных мышей 4 доз синтезированного образца препарата ПВТ-11. Таблица 1 Результаты определения токсичности препаратов ПВТ-11 для белых беспородных мышей В таблице 1 приведена токсическая доза для мышей, вызывающая 50 гибель животных. Данные сопоставлялись с показателями рифампицина. Как следует из таблицы 1, токсическая доза препарата ПВТ-10 составляла 325,0 мг/кг, что в 1,2 раза ниже токсичности рифампицина, используемого в качестве стандарта. Пример 2. Изучение антимикробной активности препарата ПВТ-11 в отношении микробных культур 2 Использованы музейные штаммы грамположительных бактерий .и .. Исследуемое вещество в концентрациях 100, 50, 20, 10, 5, 2, 1,0 0,1 и 0,01 мкг/мл добавляли в жидкие питательные среды, экспозиция -10 дней. Подготовка музейных штаммов .и .проведена путем пересева на питательные среды. Микробную взвесь готовили следующим образом одну петлю, культуры с плотной питательной среды засевали на питательный бульон. Оставляли в термостате при температуре 37 на 18-20 часов. На второй день эту бульонную культуру разводили физиологическим раствором по стандарту мутности (5 ЕД) 500 млн. микробных тел в 1 мл. и дальше разводили 110 и засевали по 0,1 мл в различные пробирки с препаратом. Использовался мясопептонный бульон (МПБ) и питательный агар (МПА) рН-7,2. Определение чувствительности всех микроорганизмов к предложенному препарату проводили методом серийных разведений в бульоне. Навеску препарата 0,05 г и 0,1 г помещали в стерильную пробирку, заливали этиловым спиртом по 0,1 мл на 1,5 часа для уничтожения сопутствующих микробов. После этой экспозиции в каждую пробирку прибавляли МПБ в количестве 9,9 мл, т.е. 110 и получали основное разведение 10 мг/мл, где было 0,1 г и 5 мг препарата. После этого проводили разведение основного раствора до 0,1 мкг/мл, пользуясь отдельными пипетками для каждой группы разведения. Оставляли в термостате на сутки для контроля стерильности. В день проведения опыта все разведения препарата в МПБ разливали по стерильным пробиркам в количестве 1 мл и заливали по 0,1 мл ранее приготовленной микробной взвеси, ставили 3 контроля 1- МПБ без препарата и микробов 2- МПБпрепарат 3- МПБсоответствующая микробная взвесь. Пробирки инкубировали в термостате при температуре 37 С в течение 18-20 часов. Оценка результатов 1-ый контроль прозрачный, мути нет стерильный, 2-ой контроль тоже прозрачный, в 3-м контроле равномерная муть, характерная для роста исследуемого микроба. В таблице 2 приведены полученные результаты. Из данных, приведенных в таблице 2, следует, что в опытных пробирках с препаратом ПВТ-11 рост .и .не отмечался при концентрациях от 100 мкг/мл до 1 мкг/мл, что говорит о подавляющем действии препарата на рост указанных микроорганизмов. В концентрациях 0,1 мкг/мл и 0,01 мкг/мл изученный препарат оказывает слабое ингибирующее воздействие. Таблица 2 Оптическая плотность питательной среды при заражении .и . после инкубации с препаратом ПВТ-11 Концентрации препарата, мкг/мл Контроль без 100,0 50,0 20,0 10,0 5,0 2,0 1,0 0,1 0,01 препарата Примечание Оптическая плотность определена по стандарту мутности- отсутствие роста. Для определения бактериостатической активности проводили пересевы на чашки Петри с МПА (с целью подсчта колоний). Результат учитывали через сутки наблюдалось ослабление роста микроорганизмов в опытных чашках с препаратом ПВТ-11. Работа проводилась в 3-х повторностях. Таким образом, препарат ПВТ-11 в разведениях от 100 мкг/мл до 1 мкг/мл обладал антимикробной активностью в отношении музейных штаммов грамположительных бактерий (.и .). Пример 3. Изучение противотуберкулезного действия ПВТ 11 в отношении диких чувствительных штаммов микобактерий туберкулеза Исследованы потенциальные бактериостатическое и бактерицидное действия синтезированных химических соединений в отношении диких чувствительных штаммов микобактерий туберкулеза. Пути,способы,периодичность и продолжительность введения исследуемого и контрольного веществ препарат ПВТ-11 в концентрациях 100, 50, 20, 10, 5, 2,0 1,0, 0,1 и 0,01 мкг/мл добавляли в жидкие питательные среды,экспозиция -20 дней. Проведена подготовка диких чувствительных штаммов микобактерий туберкулеза (пересев на питательные среды). Бактерицидную и бактериостатическую активность препарата ПВТ-11 определяли на диких чувствительных штаммах микобактерий туберкулеза (20 штаммов, выделенных от больных,находящихся на лечении в НЦПТ РК). Готовили взвесь исследуемых культур соответствующую 5108 (500 млн. микробных тел) микробных клеток по оптическому стандарту мутности Мак-Фарланда 1. Затем производили посев приготовленной взвеси музейной культуры (по 0,2 мл) в пробирки с жидкой питательной средой Школьниковой, содержащей препарат ПВТ-11 в концентрациях 100, 50, 20, 10, 5,2, 1, 0,1, 0,01 мг/мл и в контрольные (2 пробирки) без препарата. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37 С в течение 28 дней. По истечении указанного времени производили пересев отмытых осадков культур опытных и контрольных образцов на плотные питательные 3 среды Левенштейна-Йенсена. Из оставшейся части осадка обоих образцов (опытных и контрольных) ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ окрашивали по Циль-Нильсену. Микроскопия окрашенного препарата показала, что там присутствуют МБТ, от 10 и более палочек в поле зрения. В контрольных препаратах - от 10 и более в поле зрения, в каждом препарате. Данные таблицы 3 свидетельствуют о том, что препарат ПВТ-11 обладает бактерицидной активностью в концентрации от 100 мкг/мл до 5 мкг/мл, при концентрации 2 мкг/мл и 1 мкг/мл препарата наблюдался слабый и умеренный рост. В качестве контроля был использован противотуберкулезный препарат рифампицин. При исследовании действия рифампицина на эти штаммы выявлено, что он обладает бактерицидной активностью в концентрациях от 100 до 1 мкг/мл, а в концентрации 0,1 мкг/мл наблюдался умеренный рост. Таким образом, выявлено, что препарат ПВТ-11 обладает противотуберкулезной активностью в отношении диких чувствительных штаммов микобактерий туберкулеза в концентрациях 2 и 5 мкг/мл. в качестве противомикробного противотуберкулезного средства.