Вакцина против пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц, способ ее получения и способ профилактики пастереллеза

(51)761 К 39/102,61 31/00 ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(72) Бияшев Кадыр Бияшевич Кожаев Аскар Нурсултанович Ермагамбетова Света Елемисовна Нургожаева Гульсин(56) Предварительный патент 7594 Национального патентного ведомства РК от 15.06.1999 ВАКЦИНА ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА(54) СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ,ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ И ПТИЦ, СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к разработке вакцин для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц. Предложенная вакцина против пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц содержит микробные клетки восьми сероваров пастерелл(. , . , .), смешанные в равных количествах,формалин, квасцы алюмокалиевые, кальций хлористый и бульон Хоттингера при следующем соотношении компонентов на 1 литр вакцины, обмикробные клетки 40-50 формалин 0,4-0,5 квасцы алюмокалиевые 0,1 -0,12 кальций хлористый 0,1-0,11 бульон Хоттингера до 1 литра Способ получения вакцины включает выращивание пастереллвосьми сероваров (. , . , . , . , . , ., . , . ) в бульоне Хоттингера, инактивацию микробной массы формалином 0,4-0,5 , добавление депонирующих веществ 01-0,12 квасцов алюмокалиевых и 0,1-0,11 кальция хлористого. Способ профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц заключается в том, что вакцину вводят животным однократно внутримышечно, причем молодняку крупного и мелкого рогатого скота, свиней, лошадей,верблюдов до 1 года вводят 2 мл вакцины,- молодняку собак и пушных зверей вводят 1 мл вакцины,- крупному и мелкому рогатому скоту, свиньям,лошадям, верблюдам старше 1 года вводят 5 мл вакцины,- молодняку птиц до 1 года вводят 0,5 мл вакцины,- птицам старше 1 года вводят 1 мл вакцины,- собакам, пушным зверям старше 1 года вводят 3 мл вакцины. Предложенная вакцина не реактогенна, обладает широким спектром профилактической активности и высокой иммуногенностью. Способ получения вакцины позволяет снизить трудозатраты и обусловливает ее пригодность в течение 12 месяцев. Способ профилактики обеспечивает эффективность вакцинации и экономичен. 11490 Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к разработке вакцин против пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц. Пастереллез, или геморрагическая септицемия, инфекционная болезнь,проявляющаяся септцемией, гнойно-некротической пневмонией, отеком подкожной клетчатки, особенно шеи и головы,лихорадкой, артритом, ринитом, возможны аборты у стельных коров. Пастереллезом болеют крупный рогатый скот,свиньи, овцы, козы, лошади, буйволы, маралы, зубры, олени, собаки, кролики, норки, нутрии, лисицы,домашние и дикие птицы. Заболеваемость животных достигает до 50 , а летальность заболевших животных составляет - 80-100 , нанося большой экономический ущерб. Инфекция получила название в честь Луи Пастера, который впервые выделил возбудитель в 1880 году от птиц. Возбудители пастереллезов относятся к роду . В прошлом в зависимости от естественного хозяина, то есть основного поражаемого вида животного, различали многочисленные виды пастерелл (Р. - крупного рогатого скота, Р. свиней, Р. - овец, Р.а - птиц, Р. - лошадей,Р.са - собак, Р.с - кроликов,Р. - грызунов и другие). В настоящее время все виды и типы (А, В, С, Е) пастерелл квалифицировать как один серовар Ра. Известна поливалентная вакцина против пастереллеза сельскохозяйственных животных. Она представляет собой эмульгированную вакцину против пастереллеза крупного рогатого скота, буйволов,овец и лошадей, состоящей из инактивированной бактерийной суспензии в адъюванте (синтетическое полиальфаолефиновое масло) с эмульгатором (этерифицированный триглицерин). (предварительный патент РК 7594 от 15.06.1999 ). Известная вакцина предназначена для иммунизации крупного рогатого скота, буйволов, овец, лошадей и не защищает свиней, птиц, собак, кроликов,пушных зверей, от болезней, обусловленныхуказанных серотипов. Установлено, что эти серотипы пастерелл поражают свиней, норок, нутрий, чернобурых лисиц,кроликов и домашнюю птицу в отдельных хозяйствах 50-70 случаев. Изготовление эмульгированной вакцины - трудоемкий процесс, слагается из следующих стадий 1. Приготовление среды (2 суток),2. Расплодка и выращивание культур (3 суток),3. Порядок выращивания культур в реакторе (2 суток),4. Приготовление инактивированной бактерийной суспензии (8 суток),5. Приготовление эмульгированной вакцины (12 суток). Стабильность вакцины зависит от вязкости эмульсии. Длительное хранение вакцины ведет к расслоению водно-масляной фазы, что приводит к негодности вакцины. Большая вязкость адъюванта ведет к образованию густой кремообразной эмульсии, что затрудняет проходимость через иглы обычного диаметра. Передозировка вакцины приводит к образованию на месте введения абсцессов размером с грецкий орех, заполненных гноевидной массой белого цвета. Введение эмульгированной вакцины вызывает у животных (до 20-30 ) хромоту, покраснение кожи и болезненность в месте введения вакцины в течение 7-10 суток, припухлость, которая исчезает к 30-40 дню после вакцинации. Срок годности эмульгированных вакцин короткий (6-8 месяцев). Предложенная вакцина не реактогенна, обладает широким спектром профилактической активности и высокой иммуногенностью. Способ получения вакцины позволяет снизить трудозатраты и обусловливает ее пригодность в течение 12 месяцев. Способ профилактики обеспечивает эффективность вакцинации и экономичен. Вакцина против пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц содержит микробные клетки восьми сероваров пастерелл(. , . , . , . ,. , . , . , . ), смешанные в равных количествах, формалин, квасцы алюмокалиевые, кальций хлористый и бульон Хоттингера при следующем соотношении компонентов на 1 литр вакцины, обмикробные клетки 40-50 формалин 0,4-0,5 квасцы алюмокалиевые 0,1-0,12 кальций хлористый 0,1-0,11 бульон Хоттингера до 1 литра. Штаммы депонированы в музее культур микроорганизмов Научно-исследовательского института национального центра по биотехнологии Республики Казахстан под номерами Р. 26, Р. 34, Р. 46, Р. 52, Р. 63,Р. 64, Р. 67, Р. 90. Способ получения вакцины включает выращивание пастереллвосьми сероваров (. , . , . , . , . , ., . , . ) в бульоне Хоттингера, инактивацию микробной массы формалином 0,4-0,5 , добавление депонирующих веществ - 0,1-0,12 квасцов алюмокалиевых и 0,10,11 кальция хлористого. Использование для изготовления вакцины всех основных возбудителей пастереллеза животных с хорошо выраженными антигенными свойствами позволило создать высокоиммуногенную вакцину,профилактирующую заболевание пастереллезом крупного рогатого скота, свиней, овец, лошадей,собак, пушных зверей и птиц в любых регионах страны. Пример 1. Изготовление вакцины 2, . , . , . , . ) засевают для получения матровой расплодки каждый отдельно по 3 смЗ в 200 мл флакон, содержащий бульон Хоттингера (рН 7,3-7,4). Посевы во флаконах и пробирках (на скошенном агаре) культивируют в термостате 16-18 часов. Проверенные на стерильность культуры из флаконов засевают каждую отдельно в 10-литровые бутыли с 4-5 литрами бульона Хоттингера в количестве 40-50 см 3 и выращивают в течение 18 часов при температуре 37 С и используют в качестве матровой расплодки. Выращенные и проверенные на чистоту роста матровые расплодки производственных штаммов пастерелл с соблюдением условий стерильности вливают в одну бутыль и после тщательного смешивания подсоединяют к трубке реактора и производят его засев из расчета 5 матровой расплодки по отношению к объему питательной среды. Штаммы пастерелл выращивают при температуре 37 С, добавив 0,1(в пересчете на сухое вещество) глюкозы в виде 20-40 -ного стерильного раствора, в течение 18-20 часов, при постоянном перемешивании и аэрации стерильным воздухом. Выращенные в реакторе культуры пастерелл проверяют на чистоту, роста путем микроскопии мазков и высевом на питательные среды. Накопление микробных клеток в 12-20-часовой культуре соответствует 10-15 млрд. в 1 мл. Одновременно начинают охлаждение выращенной культуры путем пропускания холодной воды через рубашку реактора. Пример 2. Концентрирование бактериальной культуры Выращенную в реакторе чистую бульонную культуру смеси производственных штаммов пастерелл, охлажденную до 16 С, подают закрытым способом по стерильным шлангам для концентрирования на суперцентрифуги, набравшее постоянное количество оборотов. Вращение ротора суперцентрифуги продолжают 20 минут, после чего выключают и дают возможность остановиться без применения тормоза. В стерильных условиях собирают концентрированную культуру пастерелл из роторов суперцентрифуги в простерилизованные баллоны. Для получения гомогенной, бактериальной суспензии в баллоны добавляют фосфатно-буферный раствор (рН 7,8), закрывают и помещают в шуттель-аппарат на 15-20 минут. После чего, путем добавления фосфатно-буферного раствора концентрацию микробных клеток в бактериальной суспензии доводят до 20 млрд. в 1 мл по оптическому стандарту. Пример 3. Инактивация культуры Инактивацию культур проводят путем внесения 0,3 формалина (формалин должен содержать не менее 36 формальдегида, который добавляют в количестве с пересчетом к формалину с содержанием 40 формальдегида). Инактивацию культур проводят в течение 7 суток при температуре 37 С. в процессе инактивации культур перемешивают по 10 минут один раз в сутки, через указанный срок проверяют полноту инактивации культур (посевами на питательные среды, определения рН). К инактивированной культуре добавляют 0,1 алюмокалиевых квасцов и через 24 часа 0,1 хлористого кальция. Пример 4. Расфасовка вакцины После установления стерильности (отсутствие роста на питательных средах) расфасовывают в стерильные флаконы (100-200 мл), которые плотно закрывают резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикируют. Датой изготовления вакцины считают дату окончания инактивации и добавления депонирующих веществ. Пример 5. Контроль вакцины Вакцину проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность. Для проверки на стерильность из 5 флаконов делают высевы по 0,2 мл вакцины на МПА, МПБ и на среду Китт-Тароцци. Посевы со всеми средами выдерживают в термостате при 37 С в течение 3-х суток. Питательные среды с посевами должны оставаться стерильными. На безвредность проверяют путем подкожного введения вакцины 5 морским свинкам (массой 350400 г) в дозе 5 мл., 5 белым мышам (16-18 г) в дозе 0,3 мл. Все животные должны оставаться живыми в течение 10 суток после введения вакцины. Консоль иммуногенной активности осуществляют на 5 кроликах массой 1,5-1,8 кг путем однократного подкожного введения вакцины в дозе 1,5 мл. На 16 сутки после вакцинации опытных и контрольных (3 кролика) заражают вирулентной культурой Р. оттитрованной смертельной дозой. Опытные животные остаются живыми, при падеже всех контрольных. Это свидетельствует, что предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью. Способ профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц заключается в том, что вакцину вводят животным однократно внутримышечно, причем молодняку крупного и мелкого рогатого скота, свиней, лошадей,верблюдов до 1 года вводят 2 мл вакцины,- молодняку собак и пушных зверей вводят 1 мл вакцины,- крупному и мелкому рогатому скоту, свиньям,лошадям, верблюдам старше 1 года вводят 5 мл вакцины,- молодняку птиц до 1 года вводят 0,5 мл вакцины,- птицам старше 1 года вводят 1 мл вакцины,- собакам, пушным зверям старше 1 года вводят 3 мл вакцины. Пример 6. Вакцину применяют для профилактических и вынужденных прививок животным однократно, внутримышечно. 3 11490 Крупный рогатый скот, овец, свиней, лошадей,верблюдов, оленей, кроликов, собак, пушных зверей птиц вакцинируют в возрасте до 1 года в дозе 1-2 мл, а старше 1 года - в дозе 3-5 мл. Вакцина пригодна для применения в течение 12 месяцев со дня изготовления при условии хранения ее при температуре 4 - 10 С. Использование предлагаемого способа изготовления и применения вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных и птиц из 8 видов пастерелл обеспечивает по сравнению с существующим способом следующие преимущества а) предлагаемая вакцина защищает животных от заболевания пастереллезом обусловленным основными серотипами пастерелл при однократном введении вакцины в дозе 1-3 мл, в то время как известную вакцину вводят дважды в дозах 3-5 мл, соответственно, на 1 и 2 инъекции. К тому же известная вакцина не профилактирует пастереллез свиней,собак, пушных зверей и птиц б) срок годности предлагаемой вакцины в 2 раза больше, чем у применяемой. в) иммунизирующая доза для животных у предлагаемой вакцины в 2 раза меньше, чем у известной вакцины, и не вызывает побочных явлений в месте введения, то есть не реактогенная. г) снижение трудозатрат ветеринарными специалистами на изготовление, обслуживание животных и повышение эффективности профилактики пастереллеза. Ожидаемый ежегодный экономический эффект от использования вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птицы составит 50-70 тенге на один затраченный тенге. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Вакцина против пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц, содержащая микробные клетки пастерелл, формалин, квасцы алюмокалиевые, кальций хлористый и бульон Хоттингера, отличающаяся тем, что она содержит микробные клетки восьми сероваров пастерелл(. , . , . , . ,. , . , . , . ), смешанных в равных количествах при следующем соотношении компонентов на 1 литр вакцины, об. микробные клетки восьми сероваров пастерелл 40-50 формалин 0,4-0,5 квасцы алюмокалиевые 0,1-0,12 кальций хлористый 0,1-0,11 бульон Хоттингера до 1 литра. 2. Способ получения вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц, включающий выращивание пастерелл в бульоне Хоттингера с последующим инактивированием микробной массы и добавлением депонирующих веществ, отличающийся тем, что выращиваютвосьми сероваров (. , .), микробную массу пастерелл инактивируют формалином 0,4-0,5 , а в качестве депонирующих веществ добавляют 0,1-0,12 квасцов алюмокалиевых и 0,1-0,11 кальция хлористого. 3. Способ профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, пушных зверей и птиц,включающий введение животным вакцины, отличающийся тем, что животным однократно внутримышечно вводят вакцину по п. 1, причем молодняку крупного и мелкого рогатого скота, свиней, лошадей, верблюдов до 1 года вводят 2 мл вакцины,- молодняку собак и пушных зверей вводят 1 мл вакцины,- крупному и мелкому рогатому скоту, свиньям,лошадям, верблюдам старше 1 года вводят 5 мл вакцины,- молодняку птиц до 1 года вводят 0,5 мл вакцины,- птицам старше 1 года вводят 1 мл вакцины,- собакам, пушным зверям старше 1 года вводят 3 мл вакцины.