Способ диагностики степени тяжести преэклампсии по показателям дисфункции эндотелия

(51) 01 33/68 (2006.01) 01 33/50 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ крови, центрифугировании, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют содержание эндотелина,метаболитов оксида азота и гомоцистеина иммуноферментным методом, при этом, при увеличении содержания эндотелина-1 от 4,0 до 8,3 фмоль/л, гомоцистеина от 7,0 до 17,6 мкмоль/л, и при снижении содержания метаболитов оксида азота от 25.6 до 17.3 мкмоль/л диагностируют легкую степень преэклампсии, а при увеличении содержания эндотелина от 8,4 до 17,4 фмоль/л, гомоцистеина от 17,7 до 29,8 мкмоль/л и снижении содержания метаболитов оксида азота от 17,2 до 11,8 мкмоль/л диагностируют тяжелую степень преэклампсии. Внедрение данного способа диагностики позволит количественно определить концентрации эндотелина-1, метаболитов оксида азота (нитрата и пероксинитрита) и гомоцистеина в сыворотке крови беременных, повысить достоверность диагностики степени тяжести преэклампсии, определить тактику ведения и своевременное назначение соответствующей степени тяжести преэклампсии терапии.(72) Бекмухамбетов Ербол Жасуланович Джаркенов Тимур Агатаевич Тусупкалиев Акылбек Балашович Жумагулова Сагира Сейткуловна Дарибай Жанибек Жалеллы Рыжкова Светлана Николаевна Блиева Рашида Саинызы Гайдай Андрей Николаевич(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения ЗападноКазахстанский государственный медицинский университет им. Марата Оспанова с наблюдательным советом Министерства здравоохранения и социального развития Республики Казахстан(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТЯЖЕСТИ ПРЕЭКЛАМПСИИ ПО ПОКАЗАТЕЛЯМ ДИСФУНКЦИИ ЭНДОТЕЛИЯ(57) Предлагаемый способ относится к области клинической медицины, а именно акушерству. Способ диагностики степени тяжести преэклампсии, заключающийся в заборе венозной Предлагаемый способ относится к области клинической медицины, а именно к акушерству и может быть использован для диагностики степени тяжести преэклампсии. Преэклампсия относятся к наиболее сложным и важным проблемам акушерства, что объясняется высокой частотой и тяжестью осложнений,возникающих со стороны матери и плода. Преэклампсия занимает одно из ведущих мест в структуре причин материнской и перинатальной смертности,заболеваемости женщин,новорожденных и детей во всем мире (,,, 2010). В мировой структуре материнской смертности доля преэклампсии составляет 12-30 . В структуре материнской смертности в Казахстане преэклампсии занимают 3-4 место после акушерских кровотечений. Преэклампсия - мультисистемное патологическое состояние, возникающее во второй половине беременности (после 20-й недели) в сочетании с протеинурией(0,3 г/л в суточной моче),характеризующееся артериальной гипертензией,нередко,отеками и проявлениями полиорганной/полисистемной дисфункции/недостаточности. До настоящего времени существует проблема в диагностике степени тяжести преэклампсии. Современные принципы ведения беременных с факторами риска возникновения преэклампсии не обеспечивают должного снижения частоты этого осложнения, в связи с чем, требуется дальнейшее совершенствование методов его диагностики и лечения. Исход ведения беременности с преэклампсией зависит от точности оценки ее тяжести и соответственно правильно примененной интенсивной терапии. Известен способ диагностики степени тяжести преэклампсии, включающий оценку выраженности триады симптомов Цангемейстера основанный на том, что у беременных с преэклампсией легкой степени чаще отмечаются отеки, средней степени отеки и протеинурия тяжелой степени отеки в сочетании с протеинурией и артериальной гипертензией. ( ,.,1978,-2.-.99.) Недостатком данного способа является низкая информативность. Известен способ диагностики степени тяжести преэклампсии, включающий исследование крови с определением количества тромбоцитов, гематокрита,концентрации креатинина, азота мочевины, мочевой кислоты и коагулограммы. По мере утяжеления преэклампсии нарушаются концентрационная и мочевыделительная функции, что ведут к изменению данных показателей. При легкой и средне-тяжелой форме умеренно повышен креатинин, азот мочевины,гематокрит имеет тенденцию к повышению,снижается количество тромбоцитов. При тяжелой форме преэклампсии отмечается значительное повышение уровня креатинина, азота мочевины и 2-синдром,Петрозаводск.ИнтелТек.-2002.-с.16-23.) Недостатком данного способа является необходимость контроля большого количества показателей,кроме того,выявлена слабая корреляционная зависимость между клиническими проявлениями и лабораторными методами исследования. Известен способ диагностики гестоза тяжелой степени, включающий определение в плазме венозной крови уровень лептина и грелина иммуноферментным методом, и при увеличении концентрации лептина в сыворотке более 37,89 нг/мл,и одновременном снижении концентрации грелина в плазме крови менее 0,26 нг/мл диагностируют гестоз тяжелой степени. (2476880, 7 0133/48 опубликовано 27.02.2013). Недостатком данного способа является то, что лептин и грелин не являются специфическими метаболитами беременности. Повышение уровня лептина и снижение грелина может сопровождать метаболические расстройства (жирового, углеводного обмена) при различных патологических состояниях.(Шульга А.С., Бутенко Е.В., 2012). Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа диагностики, позволяющего точно оценить степень тяжести преэклампсии с целью назначения дифференцированного лечения. Технический результат - повышение точности диагностики и ее достоверности. Указанный технический результат достигается тем, что в способе диагностики степени тяжести преэклампсии, включающем исследование крови,отличительной особенностью является то, что определяют концентрации эндотелина-1,метаболитов оксида азота (нитрита и нитрата),гомоцистеина иммуноферментным методом, при этом, при увеличении содержания эндотелина от 4,0 до 8,3 фмоль/л, гомоцистеина от 7,0 до 17,6 мкмоль/л,и при снижении содержания метаболитов оксида азота от 25.6 до 17.3 мкмоль/л диагностируют легкую степень преэклампсии, а при увеличении содержания эндотелина от 8,4 до 17,4 фмоль/л, гомоцистеина от 17,7 до 29,8 мкмоль/л и снижении содержания метаболитов оксида азота от 17,2 до 11,8 мкмоль/л диагностируют тяжелую степень преэклампсии. Ведущим звеном патогенеза преэклампсии является эндотелиальная дисфункция. Известно, что эндотелий обладает уникальной способностью реагировать на различные гуморальные изменения окружающей среды продукцией сосудосуживающих и сосудорасширяющих факторов, баланс которых и определяет тонус гладких мышечных клеток, являясь весьма важным в регуляции сосудистого тонуса и артериального давления. Дисфункция эндотелия имеет значение в развитии тромбоза и внутрисосудистой активации тромбоцитов и лейкоцитов. Последняя характеризуется нарушением продукции факторов,обеспечивающих физиологическое состояние кровеносных сосудов. К ним относятся важнейший сосудистый дилятатор оксид азотаи вазоконстриктор - эндотелии(ЭТ-1). К факторам, повреждающим эндотелий относится и гомоцистеин (ГЦ). ГЦ - аминокислота, при окислении которой образуется большое количество свободных радикалов, содержащих активный кислород и,тем самым,повреждающим внутрисосудистую выстилку. ГЦ угнетает синтез О,вследствие этого усиливается агрегация тромбоцитов. Маркерами дисфункции эндотелия могут служить вазоактивные соединения,регулирующие сосудистый тонус и гемостаз. К таким соединениям относятся оксид азота, эндотелии, гомоцистеин оказывающие противоположное влияние на указанные процессы оксид азота, как известно обладает вазодилятаторным, а эндотелии и гомоцистеин - вазоконстриктарным действиями(А.Ф. Ванин,-1998 М.-К.Стокле и соавт.,1998). Неадекватное образование вазоактивных веществ,отражающее степень метаболической модификации в эндотелии, является объективным показателем тяжести возможного развития преэклампсии, так как нарушения физиологического соотношения оксида азота, эндотелина и гомоцистеина приводит к снижению скорости кровотока в маточных артериях,что вполне может быть инициирующим фактором развития преэклампсии. Способ осуществляется следующим образом Кровь у беременной забирают утром натощак,центрифугируют и в сыворотке крови проводят определение концентрации эндотелина-1,метаболитов оксида азота и гомоцистеина иммуноферментным методом. По заявляемому способу обследовано 62 беременных у 11 имела место хроническая артериальная гипертензия, у 24 преэклампсия легкой,у -15 преэклампсия тяжелой степени и у 12 беременность протекала без осложнений. Определение эндотелина-1 проводилось методом иммуноферментного анализа с использованием реактивов(Австрия). Эндогенный уровень оксида азота в форме нитрат-анионопределяли с помощью реактива Грисса иммуноферментным методом (набор(Великобритания). Определение гомоцистеина определяли иммуноферментным методом с использованием реактивов( ) Результаты исследований представлены в таблице Таблица Группы обследованных Эндотелии-1 фмоль/л М 2,30,3 6,10,9 13,21,4 Доверительный интервал 0,2-3,9 4,0-8,3 8,4-17,4 среднего Оксид азота мкмоль/л М 30,18,9 21,25,7 14,13,1 Доверительный интервал 25,7-33,4 17,3-25,6 17,2-11,8 среднего Г омоцистеин мкмоль/л М 15,1 1,1 12,32,2 23,74,1 Доверительный интервал 14,1-17,5 7,0-17,6 17,7-29,8 среднего Примечание р 0,05 р 0,02 р 0,001 по сравнению с контрольной группой . При проведении иммуноферментного исследования выяснилось,что определение эндотелина-1, гомоцистеина и метаболитов оксида азота имеют важное диагностическое значение. Так при увеличении содержания эндотелина от 4,0 до 8,3 фмоль/л, гомоцистеина от 7,0 до 17,6 мкмоль/л, и при снижении содержания метаболитов оксида азота от 25,6 до 17,3 мкмоль/л диагностируют легкую степень преэклампсии, а при увеличении содержания эндотелина от 8,4 до 17,4 фмоль/л, гомоцистеина от 17,7 до 29,8 мкмоль/л и снижении содержания метаболитов оксида азота от 17,2 до 11,8 мкмоль/л диагностируют тяжелую степень преэклампсии. Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами Пример 1. Беременная К-ва, 20 лет, история родов 6553 от 30.10.2014 Семейное положение - замужем Поступила с диагнозом Беременность 38 недель. Преэклампсия легкой степени. Анемия тяжелой степени В анамнезе болезнь Боткина, кожные и венерические заболевания - отрицает Наследственность не отягощена Гинекологические заболевания - отрицает Менархе - с 14 лет по 2-3 дня регулярные Детородная функция-беременность - настоящая Течение настоящей беременности Д учет с 11 недель. Беременность на фоне анемии средней степени. Лечение получила. Кариес зубов. С 21 недели по УЗИ угроза прерывания беременности Вес при поступлении 59 кг, рост 159 см, АД 140/90 при пост пульс 76 уд. мин исходное АД 120/80 исход вес 46 прибавка в весе 13 кг Общее состояние при поступлении. Жалоб нет, отеков нет. Диурез адекватный Лабораторные данные ОАК от 30.04.14- Гемоглобин 70 г/л. Эритроциты 3,0 х 1012,Цв.пок.-0,9,тромбоциты-153109,6 Лейкоциты-9,7 х 10 , палочкоял-35, сегментояд- 69,эозиноф-2, лимфоцит-21, моноциты-5, время сверт.крови-3 мин, длительность кровотеч.- 45 сек,гематокрит - 23. СОЭ- 50 мм/ч ОАМ от 30.04.14 -цвет сол-жел, уд.вес 1010 рН 5,5 белок- 0,33 г/л, эпит 12-15, лейкоцит -4-6 глюкоза отр. По Нечипоренко лейкоциты-3500, эритроцит нет, цилинд гиалиновые 2-3 в п.з Заключение терапевта от.30.04 Артериальная гипертензия,вызванная беременностью с протеинурией. ЖДА средней степени тяжести. Заключение окулиста от 30.04 глазное дно в норме. С учетом наличия преэклампсии по предлагаемому способу было проведено иммуноферментное исследование сыворотки крови с определением эндотелина-1, метаболитов оксида азота и гомоцистеина. Полученные значения Эндотелина-1 составил 5,5 фмоль/л,гомоцистиена - 16,6 мкмоль/л, метаболиты оксида азота составили - 18,1 мкмоль/л. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что у данной беременной преэклампсия легкой степени тяжести. Назначено соответствующее лечение. Исход 31.10.14 Срочные роды, муж пол. Вес 3800,0, рост -56 см. оценка по шкале Апгар 9 баллов. Пример 2. Беременная Е-ва,19 лет, история родов 2922 от 19.05.2014 Поступила с диагнозом Беременность 37 недель. Преэклампсия тяжелой степени. В анамнезе болезнь Боткина, кожные и венерические заболевания - отрицает Наследственность не отягощена Гинекологические заболевания - отрицает Менархе - с 14 лет по 2-3 дня регулярные Детородная функция-беременность - настоящая Течение настоящей беременности Д учет с 14 недель. Беременность на фоне артериальной гипертензии. Внутричерепномозговая гипертензия. Лечилась в 15-16 недель по поводу симптоматической артериальной гипертензии получила. При поступлении состояние тяжелое, жалобы на головную боль, АД 170/110, 160/110. Вес при поступлении 59 кг, рост 159 см, АД 140/90 при пост пульс 86 уд/мин., отеки на голенях. Лабораторные данные ОАК от 19.05.14- Гемоглобин 99 г/л. Эритроциты 3,0 х 1012,Цв.пок.-0,9,тромбоциты-216109,6 Лейкоциты-11,910 , палочкоял-3, сегментояд-83,эозиноф-2, лимфоцит-10, моноциты-2, время сверт.крови-3 мин 40 сек, длительность кровотеч.- 45 сек, гематокрит - 29. СОЭ- 50 мм/ч ОАМ от 19.05.14 -цвет сол-жел, уд.вес 1030 рН 5,5 белок- 2,0 г/л, эпит 9-10, лейкоцит -18-20,эритроциты 3-5, гиалиновые цилиндры 1-2 в п/з глюкоза - 2,8, ацетон - 4,0 ммоль/л. Заключение терапевта от.20.05 Артериальная гипертензияст. ранее существовавшая с протеинурией ЖДА легкой степени. Заключение окулиста от 20.05 Ретинопатия ОК. С учетом наличия преэклампсии по предлагаемому способу было проведено иммуноферментное исследование сыворотки крови с определением эндотелина-1, метаболитов оксида азота и гомоцистеина. Полученные значения Концентрация эндотелина -1 составила 16,2 фмоль/л, гомоцистеина - 35,8 мкмоль/л и оксида азота 11,6 мкмоль/л. Лабораторные данные свидетельствуют о том, у данной беременной преэклампсия тяжелой степени. Назначено соответствующее лечение. Исход 20.05.14 Срочные роды, жен пол. Вес 3400,0, рост -54 см. оценка по шкале Апгар 7-8 баллов. Таким образом, заявляемый способ диагностики является по сравнению с известными более информативным и внедрение данного способа диагностики позволит 1. Количественно определить концентрации эндотелина-1, метаболитов оксида азота (нитрата и пероксинитрита) и гомоцистеина 2. Повысить достоверность диагностики степени тяжести преэклампсии 3. Определить тактику ведения и своевременное назначение соответствующей степени тяжести преэклампсии терапии 4. Проводить мониторинг эффективности лечебных мероприятий. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики тяжести преэклампсии по показателям дисфункции эндотелия, включающий исследование венозной крови иммуноферментным методом для определения содержания уровня специфических биохимических маркеров,отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют содержание эндотелина-1, гомоцистеина,метаболитов оксида азота, и,при увеличении содержания эндотелина-1 от 4,0 до 8,3 фмоль/л, гомоцистеина от 7,0 до 17,6 мкмоль/л,снижении содержания метаболитов оксида азота от 25,6 до 17,3 мкмоль/л, - диагностируют легкую степень преэклампсии при увеличении содержания эндотелина-1 от 8,4 до 17,4 фмоль/л, гомоцистеина от 17,7 до 29,8 мкмоль/л и снижении содержания метаболитов оксида азота от 17,2 до 11,8 мкмоль/л, диагностируют тяжелую степень преэклампсии.