Транспортная питательная селективная среда для бактериологической диагностики бруцеллеза

(51) 12 1/20 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Транспортная питательная селективная среда для бактериологической диагностики бруцеллеза,включающая питательную основу и дополнительные компоненты,в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат инактивированной бактериальной массы бруцелл и дополнительно агар-агар, натрия хлорид,глюкозу, глицерин, дрожжевой экстракт, -цистеин,цитрат натрия, селективный агент, состоящий из антибактериального препарата цефалоспоринового ряда - Фортум и фунгицидного препарата Клотримазол при следующем соотношении компонентов, мас. агар-агар 1,0-3,5 натрия хлорид 0,5-1,0 глюкоза 0,5-3,0 глицерин 0,5-3,0 дрожжевой экстракт 0,5-3,0-цистеин 0,01-0,035 цитрат натрия 3.0-5,0 селективный агент антибактериальный препарат Фортум 0,002-0,004 фунгицидный препарат Клотримазол 0,1-0,3 ферментативный гидролизат остальное инактивированной бактериальной массы бруцелл 1 табл.(72) бутлп спен Тен Виктор Борисович Султанов Ахметжан Акиевич Аманжол Рафилбек Аманжоллы Туяшев Есен Курмашевич Нысанов Ерсаин Салаватович Тажбаева Даурия Талаповна Елеусинова Гульнар Талиповна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ТРАНСПОРТНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СЕЛЕКТИВНАЯ СРЕДА ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для предварительного выращивания при транспортировке крови больных,подозреваемых на заболевание бруцеллезом животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении транспортной питательной среды с антикоагулентом и селективным агентом для эффективного использования при бактериологической диагностике бруцеллеза. Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для предварительного выращивания при транспортировке крови больных, подозреваемых на заболевание бруцеллезом животных. Известна транспортная питательная среда для предварительного выращивания бруцелл из патологического материала животных, включающая ферментативный гидролизат инактивированной бактериальной массы бруцелл и дополнительно включает агар-агар, натрия хлорид, глюкозу,глицерин,дрожжевой экстракт,-цистеин Предварительный патент РК 16098, кл. С 12 1/20 // (С 12 1/20, 12 101), 2005 Недостатком существующей питательной среды то, что кровь быстро свертывается и затрудняет дальнейшую работу с ней, при этом проявляется низкая высеваемость и интенсивность роста бруцелл из крови подозрительных и серопозитивных животных. Задачей изобретения является разработка транспортной питательной среды с селективным агентом, исключающий свертывание исследуемой пробы крови,повышающая эффективность выделения культур бруцелл из патологического материала и крови подозрительных и серопозитивных животных и при этом ингибирующей рост посторонней микрофлоры. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении транспортной питательной среды с антикоагулентами и селективным агентом для эффективного использования при бактериологической диагностике бруцеллеза. Транспортная питательная селективная среда для бактериологической диагностики бруцеллеза,включающая питательную основу и дополнительные компоненты,в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат инактивированной бактериальной массы бруцелл и дополнительно агар-агар, натрия хлорид,глюкозу, глицерин, дрожжевой экстракт, -цистеин,цитрат натрия, селективный агент состоящий из антибактериального препарата цефалоспоринового ряда Фортум и фунгицидного препарата Клотримазол при следующем соотношении компонентов, мас. агар-агар 1,0-3,5 натрия хлорид 0,5-1,0 глюкоза 0,5-3,0 глицерин 0,5-3,0 дрожжевой экстракт 0,5-3,0-цистеин 0,01-0,035 цитрат натрия 3,0-5,0 селективный агент антибактериальный препарат Фортум 0,002-0,004 фунгицидный препарат Клотримазол 0,1-0,3 ферментативный гидролизат остальное инактивированной бактериальной массы бруцелл. Для подбора транспортной питательной селективной среды для бактериологической диагностики бруцеллеза, были апробированы различные процентные соотношения компонентов. Пример 1. Транспортную питательную селективную среду для бактериологической диагностики бруцеллеза используют при следующем соотношении компонентов агар-агар 1,0 натрия хлорид 0,5 глюкоза 0,5 глицерин 0,5 дрожжевой экстракт 0,5-цистеин 0,01 цитрат натрия 3,0 селективный агент антибактериальный препарат Фортум 0,002 фунгицидный препарат Клотримазол 0,1 ферментативный гидролизат остальное инактивированной бактериальной массы бруцелл. Пример 2. Транспортную питательную селективную среду для бактериологической диагностики бруцеллеза используют также, как и в примере 1,при следующем соотношении компонентов агар-агар 2,0 натрия хлорид 0,7 глюкоза 1,0 глицерин 2,0 дрожжевой экстракт 2,0-цистеин 0,025 цитрат натрия 4,0 селективный агент антибактериальный препарат Фортум 0,003 фунгицидный препарат Клотримазол 0,2 ферментативный гидролизат остальное инактивированной бактериальной массы бруцелл. Пример 3. Транспортную питательную селективную среду для бактериологической диагностики бруцеллеза используют также, как и в примере 1,при следующем соотношении компонентов агар-агар 3,5 натрия хлорид 1,0 глюкоза 3,0 глицерин 3,0 дрожжевой экстракт 3,0-цистеин 0,035 цитрат натрия 5,0 селективный агент антибактериальный препарат Фортум 0,004 фунгицидный препарат Клотримазол 0,3 ферментативный гидролизат остальное инактивированной бактериальной массы бруцелл. Транспортную питательную селективную среду для бактериологической диагностики бруцеллеза готовят следующим образом Пример 4. Берут 20,0 г/л агар-агара и растворяют в 1 литре ферментативного гидролизата инактивированной бактериальной массы бруцелл,затем берут натрия хлорид 7,0 г/л глюкозу 10,0 г/л глицерин 20,0 мл/л дрожжевой экстракт 20 г/л цистеин 250 мг/л цитрат натрия 40,0 г/л, все компоненты тщательно перемешивают и автоклавируют при 0,5 атм 20 мин. После полученный раствор фильтруют через плотную ткань и устанавливают рН 7,0-7,2, далее среду стерилизуют при 0,7-0,8 атм 45 мин. В готовую транспортную питательную среду после остывания до 45-50 С вносят селективный агент, состоящий из антибактериального препарата цефалоспоринового ряда Фортум в концентрации 30 мкг/мл и фунгицидного препарата Клотримазол в концентрации 2 мг/мл. После разливают в стерильных условиях в 20 мл флаконы (по 5 мл среды на один флакон), закрывают резиновыми пробками и запечатывают алюминиевыми колпачками. Затем транспортную питательную селективную среду для проверки стерильности помещают на 48 ч в термостат. Далее проводят искусственное заражение лабораторных животных вакцинным штаммом В. абортус 19. Для этого 4 морским свинкам вводят 1 млрд бруцеллезную взвесь (по стандарту мутности) в объеме 1 мл подкожно в паховую область и через 15 дней проводят сбор крови из сердца при помощи одноразовых инъекционных шприцов в объеме 5 мл и вносят в транспортную питательную селективную среду. Далее флаконы со средой помещают в термостат при 37 С и через каждые 4 суток в течение 20 дней делают высев на плотную питательную среду(эритрит-агар коммерческий). В качестве контроля использовали питательный бульон для культивирования микроорганизмов (изготовленный НПО Питательные среды, г. Махачкала, РФ. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1. Из таблицы 1 видно, что по истечении 15 дней после заражения из 4 исследуемых проб крови от опытных животных при использовании транспортной питательной селективной среды на питательной основе из инактивированной бактериальной массы бруцелл и контроля было получено 2 3 3 2 - положительных результата соответственно (рост культур бруцелл) после 4 дней инкубации, 3 4 4 2 - положительных результата соответственно (рост культур бруцелл) после 8 дней инкубации, 3 4 4 3 - положительных результата соответственно (рост культур бруцелл) после 12 дней инкубации, 3 4 4 3 - положительных результата соответственно (рост культур бруцелл) после 16 дней инкубации, 4 4 4 4 - положительных результата соответственно (рост культур бруцелл) после 20 дней инкубации. Пророст посторонней микрофлоры наблюдался в единичных случаях в контрольной среде. Следовательно,предложенная транспортная питательная селективная среда в примерах 2 и 3 имеет преимущество при выделении культур бруцелл из крови искусственно зараженных лабораторных животных по сравнению с примером 1 и контролем, однако доверительные границы процентного соотношения в примере 2 наиболее целесообразнее может быть использовано в лабораторной практике для бактериологических исследований. Предложенная транспортная питательная селективная среда позволяет повысить эффективность выделения гемокультур из крови больных бруцеллезом животных в два раза (по сравнению с контролем) и ингибирует рост посторонней микрофлоры, что делает более эффективной и продуктивной бактериологическую диагностику в целом. Таблица 1 Результаты выделения культур бруцелл из крови зараженных морских свинок Кол-во дней инкубации Предложена транспортная питательная селективная среда (ТПСС) Пример 1 Пример 2 Пример 3 2 3 3 3 4 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Транспортная питательная селективная среда для бактериологической диагностики бруцеллеза,включающая питательную основу и дополнительные компоненты, отличающаяся тем,что в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат инактивированной бактериальной массы бруцелл и дополнительно включает глюкозу, глицерин, -цистеин, цитрат натрия, селективный агент, состоящий из антибактериального препарата цефалоспоринового ряда - Фортум и фунгицидного препарата Клотримазол при следующем соотношении компонентов, мас. агар-агар 1,0-3,5 натрия хлорид 0,5-1,0 глюкоза 0,5-3,0 3-цистеин цитрат натрия селективный агент антибактериальный препарат Фортум 0,002-0,004 фунгицидный препарат Клотримазол 0,1-0,3 ферментативный гидролизат инактивированной бактериальной массы бруцелл остальное.