Штамм гриба Trichophyton equinum F-0274, используемый для изготовления инактивированной вакцины против трихофитии лошадей

(51) 12 1/20 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ профилактики трихофитии лошадей, обусловленной грибом рода . Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении культуральной биомассы гриба родас биологической активностью не менее 250106 микроконидии путем ступенчатого отбора, по признаку спорообразования наиболее быстро растущих колоний с активным накоплением микроконидий. Штамм гриба-0274 КазНИВИ 17, депонированный в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления инактивированной вакцины против трихофитии лошадей.(72) Умитжанов Мынбай Боранбаева Райхан Султанмуратовна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ШТАММ ГРИБА-0274, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ ЛОШАДЕЙ(57) Изобретение относится к ветеринарной микологии и может быть использовано для Изобретение относится к ветеринарной микологии и может быть использовано для профилактики трихофитии лошадей, обусловленной грибом рода . Известен штамм гриба,используемый для изготовления живой вакцины против трихофитии лошадей Патент Российской Федерации 2020959, А 61 39/02, С 12 1/14,1994. Недостатком указанного штамма гриба является то, что инактивированная вакцина, полученная на его основе, обладает остаточной вирулентностью. Задачей изобретения является получение штамма гриба с высокой иммуногенной активностью,пригодной для изготовления инактивированной вакцины против трихофитии лошадей и не обладающего остаточной вирулентностью. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении культуральной биомассы гриба родас биологической активностью не менее 250106 микроконидий путем ступенчатого отбора, по признаку спорообразования наиболее быстро растущих колоний с активным накоплением микроконидий. Штамм гриба-0274 КазНИВИ 17, используемый для изготовления инактивированной вакцины против трихофитии лошадей. Указанный штамм гриба 0274 КазНИВИ 17, депонирован в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ. Идентификацию штамма гриба проводят по основным морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам, согласно определителя патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов(П.Н. Кашкин,М.К. Хохряков,А.П. Кашкин.,1979 г.). Селекция штамма. Штамм гриба-0274 КазНИВИ 17, выделен из поверхности кожного покрова больной трихофитией лошади, принадлежавшей крестьянскому хозяйству Сайма-сай, Талгарского района Алматинской области. После очищения полученного патматериала, культуру гриба засевают суслоагар и ставят в термостат на 14 сут при температуре 28 С. Далее из одной колонии выращенного гриба делают повторный пятикратный пересев. Методом разведения выделяют клоны названного гриба выросших в чашках Петри на суслоагаре, которые при дальнейшем посеве дают наибольший рост. Накапливают биомассу и определяют количество макро- и микроконидий в камере Горяева по общепринятой методике. Выделенный полевой изолят гриба из родаиспользуют в работе. Для получения вакцинного штаммаполевой изолят подвергают направленному ступенчатому отбору, по признаку спорообразования быстро растущих колоний с активным накоплением микроконидий. Полученный штамм отличается от эпизоотического штамма слабой вирулентностью, 2 высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Штамм характеризуется следующими признаками. Культуральные свойства. Колония на средах с триптофаном или никотиновой кислотой растет быстро, к 10-ой сутки достигает диаметром 22-55 мм, на среде Сабуро - 12-16 мм. После 15-17 суток становятся складчатыми, бархатистопушистыми,беловатыми. Бахромчатые,погруженные в субстрат края колонии желтоватого цвета, иногда блестящие. Обратная сторона колоний желтовато-оранжевая в зрелых и старых культурах розовато-красноватая. Мицелий септированный,ветвящиеся, шириной от 3 до 4 мкм, редко завитки(спирали и кольце-видные) окончания гиф и интеркалярными хламидоспорами диаметром 2,59,53-4,5 мкм. Микроконидии многочисленные,округлые или продолговатые,овальные,грушевидные, нередко булавовидные на тонких коротких ножках расположены по бокам мицелия. Средние размеры их 3,5-7,53-3,5 мкм. Макроконидии встречается редко по форме они слегка булавовидные, удлиненно-овальные с тупым наружным концом, 1-4-клеточные (перегородками),тонкостенные, гадкие размером 3,5-7,513-47 мкм. Многочисленные хламидоспоры встречаются в старых культурах и достигают от 13 до 15,5 мкм в диаметре, единичные. Артроспоры отсутствуют. Биохимические свойства. Штамм гриба-0274 КазНИВИ 17,хорошо растет в присутствии триптофана,никотинамида, никотиновой кислоты или ее эквивалентов, имеющихся, в лошадином волосе,избирательно поражаемом данным грибом. На волосах других многочисленных животных гриб развивается лишь при условии добавления к ним раствора никотиновой кислоты. Культивирует при температуре 28 С в течение 18-21 суток. В этих условиях наблюдается ускорение лагфазы и усиливается накопление биомассы (у эталонного штамма за 18-21 сут). Бахромчатые, погруженные в субстрат края колонии желтоватого цвета, иногда блестящие. Обратная сторона колоний желтоватооранжевая в зрелых и старых культурах розоватокрасноватая. Из числа углеводов плохо усваивается сахароза. Факторами роста является триптофан,никотинамида, никотиновой кислоты и др. Элементами питания является азот, углерод,водород,кислород,а наиболее важные микроэлементы - фосфор и сера. Все эти микро- и макроэлементы участвуют во всех биохимических реакциях, происходящих в клетках. Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма в организме лошадей, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Маркерные признаки. Биохимические - на суслоагаре при 7,2-7,4 до концентрации 250 350 млн/см 3. Микроконидии многочисленные, округлые или продолговатые, овальные, грушевидные, нередко булавовидные на тонких коротких ножках расположены по бокам мицелия. Средние размеры их 3,5-7,53-3,5 мкм. Макроконидии встречаются редко по форме они слегка булавовидные, удлиненно-овальные с тупым наружным концом, 1-4-клеточные (перегородками),тонкостенные, гадкие размером 3,5-7,513-47 мкм. Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. В минеральном питании для основного обмена грибов, необходимо азот, углерод, кислород, водород, сера, фосфор,калий, магний, железо, медь, цинк, марганец,молибден, кальций, кобальт, галлий, бор, скандий,ванадий. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства.0274 КазНИВИ 17, патогенный для лошадей,свиней и лабораторных животных. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 21106 микроконидии создают напряженный иммунитет у привитых лошадей, кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией с продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0274 КазНИВИ 17, безвреден для лошадей, кроликов и морских свинок в дозе 20106 микроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0274 КазНИВИ 17, слабореактогенен для лошадей при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,0-1,5 см, который самопроизвольно излечивается в течение двух недель. Спророобразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 300-350 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба отличается от эпизоотического изолята слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0274 КазНИВИ 17,стабильно сохраняются на протяжении 5 лет при условии редких пересевов (2-3 раза в год) не ослабляет патогенные свойства. Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии 10 сахарозы и 1,5 желатина или жидкого обезжиренного молока штамм гриба-0274 КазНИВИ 17, не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев, в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С ив течение 6 месяцев, при ниже минус 20 С в течение 2 лет. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой при 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28 С в течение 5 час, при 4 С - 3 сут. Пример. Для приготовления вакцины против трихофитии лошадей используют 10-14 дневные культуры штаммов, выращенные в колбах Тартаковского на суслоагаре ( 7,2-7,4) при температуре 28 С в течение 18-21 сут. Выращенную грибницу культуры в условиях асептики, снимают с поверхности питательной среды специальными скребками и помещают в стерильные банки. Грибную массу гомогенизируют в миксерах, а затем с помощью стерильной воды или физиологического раствора полученный гомогенат ресуспензируют до концентрации микроконидии 20106/см 3. Ресуспензирование проводят в присутствии антибиотиков (пенициллина или стрептомицина) из расчета 100 ЕД/см 3 гомогената. К полученной суспензии грибной массы добавляют равное количество стабилизатора ( 7,2-7,4), содержащего в воде 10 сахарозы и 1,5 желатина или жидкого обезжиренного молока, и все тщательно перемешивают, разливают в стерильные флаконы (ампулы) и лиофильно высушивают. Для профилактической иммунизации лиофилизированную вакцину применяют внутримышечно двукратно с интервалом 14 дней,растворяют и разводят в физиологическом растворе хлористого натрия ( 7,2-7,4), а больным вводят двукратно с интервалом 14 дней в удвоенной профилактической дозировке. Приготовленный таким образом вакцинный гомогенат из штамма-0274 КазНИВИ 17, при использовании позволяет надежно профилактировать заболеваемость поголовья лошадей от трихофитии. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм гриба-0274 КазНИВИ 17, депонированный в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления инактивированной вакцины против трихофитии лошадей.