Вакцина против некробактериоза животных

(51) 61 39/114 (2010.01) 61 31/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ иммуногенности вакцины и устранении ее реактогенности. Вакцина против некробактериоза животных включающая инактивированный формалином антигени адьювант, в качестве антигена содержит штамм эпизоотической культурыВ-0063 при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штаммаВ-0063 (3,0-3,5 млрд. м. т. в 1,0 см 3) 69,0-70,0 Формалин(36,5 раствор формальдегида) 0,5-0,7 гель гидрата окиси алюминия (3 раствор) остальное(72) Горелов Юрий Михайлович Сущих Владислава Юрьевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ВАКЦИНА ПРОТИВ НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой инактивированную вакцину против некробактериоза животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении 25407 Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой инактивированную вакцину против некробактериоза животных. Известна вакцина против некробактериоза крупного рогатого скота,включающая инактивированный формалином антигени адьювант (Патент Российской Федерации 2098127, кл. А 61 К 39/116, С 12 1/20, 1997). Недостатком данной вакцины является то, что она не имеет в своем составе антигена из эпизоотической культуры необходимого для высокой иммунологической активности препарата. Задачей изобретения является создание вакцины против некробактериоза животных,обеспечивающей высокую профилактическую эффективность и повышенную иммуногенность при ее двукратном введении. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении иммуногенности вакцины и устранении ее реактогенности. Вакцина против некробактериоза животных включающая инактивированный формалином антигени адьювант, в качестве антигена содержит штамм эпизоотической культурыВ-0063 при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штамма(36,5 раствор формальдегида) 0,5-0,7 гель гидрата окиси алюминия. Штамм культурыВ 0063 депонирован в Лаборатории по изучению генофонда культур микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт (КазНИВИ). Идентификацию штаммов культурВ-0063, входящих в вакцину, проводят по основным биологическим свойствам (морфологическим, культуральным,биохими-ческим),согласно определителю бактерий,,1.2.- 610-673 . Штамм характеризуется следующими признаками. ШтаммВ-0063. Морфологические свойства. Штамм В-0063 обладает морфологическими признаками характерными для возбудителя некробактериоза животных.В-0063 представляют собой неподвижные грамотрицательные нити или палочки. Культуральные свойства. ШтаммВ-0063 растет на жидких питательных средах (ППБ, МПК, ПГКМД) при температуре 37-38, с обильным газообразованием, сбраживает галактозу, глюкозу, разжижает желатину, образует сероводород и индол. Спорообразование. Штамм В-0063 спор и капсул не образует. Антигенные свойства. В организме животных после введения антигенаВ-0063 образуются специфические агглютинины в титрах 132-164.В-0063 вызывает гибель белых мышей в дозе 0,5 см 3. Иммуногенность. Кролики после введения инактивированного антигена, полученного из разрушенных клеток штаммаВ-0063 в дозе 0,5 см 3 в 70-78 случаях приобретают устойчивость к заражению 24-часовой вирулентной культуройВ-0063, введенной в дозе 0,5 см 3. Инактивированный антиген, полученный из штаммаВ-0063 при двукратном введении в дозе 5,0 см 3 крупному рогатому скоту обуславливает напряженный иммунитет у 75-85, с образованием агглютининов в титрах 116-164. Реверсабельность. Штамм В-0063 по основным культуральным,морфологическим и биологическим свойствам не отличается от музейных культур. Многократные пересевы не изменяют морфологических и культуральных свойств. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штаммаВ-0063 стабильно сохраняются на питательной среде Китт-Тароцци в течение 30-90 суток, на среде ПГКМД до 12 месяцев. 4-5 разовые пассажи культуры на питательных средах не изменяют его свойств. Лиофильно высушенные культуры сохраняют свои исходные свойства не менее 2-х лет. ШтаммВ-0063 отобран нами по интенсивности роста на бактериологических средах и способности накапливать большое количество бактериальной массы. Изобретение иллюстрируется следующими примерами Пример 1. Питательные среды для культивирования анаэробных микроорганизмов, их инактивации и концентрирования. Для культивирования анаэробных микроорганизмов используют мясопептонный печеночный бульон (МППБ) под вазелиновым маслом и среду панкреотических гидролизатов казеина, вываренного мясного фарша и дрожжей(ПГКМД). Для получения антигенов для вакцины пробирки с МППБ под вазелиновым маслом засеянные культуройпомещают в термостат с температурой 37 С и выдерживают 24 часа. После проверки чистоты роста путем 25407 микроскопии мазков, культуры - каждую раздельно,высевают во флаконы объемом 0,4 л со средой ПГКМД. Для засева одного флакона используют весь объем суточной культуры, выращенной в двух пробирках. Посевы выдерживают при 37 24 часа и вновь проверяют на чистоту и типичность морфологии. Пример 2. Изготовление вакцины против некробактериоза животных. Полученные культуры используют для засева в бутыли с ПГКМД, в количестве 10-15 от общего объема. Засеянные бутыли помещают на 2-3 суток в термостат при 37. Для проверки чистоты и типичности морфологии микробных клеток, выборочно делают мазки и микроскопируют. Чистые культуры с типичной морфологией микроорганизмовв концентрации 2-4 млрд.см 3 с 5,5 - 6,5 при температуре 37-39 обезвреживают формалином, который добавляют в количестве 0,5-0,7 в чистом виде или разведенном до 20 концентрации (пересчет ведут на 40 формальдегид). Формалинизированные культуры выдерживают при температуре 38-42 в течение 10 суток,периодически перемешивая 2-3 раза в сутки. По истечению указанного срока культуры проверяют на стерильность путем высева на МПБ,МППБ, МПА. Наблюдение за посевами ведут 10 суток, в течение которых они должны оставаться стерильными. В реактор с формалинизированными культурами после установления их стерильности, добавляют стерильный 3 раствор гидрата окиси алюминия(ГОСТ 18287) в количестве 305 к общему объему при 4,5-7,0. После добавления 3 раствора гидрата окиси алюминия в реакторы, содержимое хорошо перемешивают и оставляют на 2-5 суток при температуре 12-18 до полного просветления надосадочной жидкости. Отстоявшиеся анакультуры концентрируют путем деконтации надосадочной жидкости в количестве 2/3 объема. Соблюдая правила асептики полученную культуру нагревают до 423 и при постоянном перемешивании добавляют стерильный горячий (45-60) 2-3 раствор агар-агара или желатины из расчета 50,0 г сухого вещества на 100,0 дм 3 вакцины. Вакцину вводят двукратно, с интервалом 20 суток, подкожно в область средней трети шеи крупному и мелкому рогатому скоту в дозе 5,0 и 3,0 см 3 соответственно. Наблюдение за опытными животными ведут в течение 12 месяцев. Профилактическую эффективность вакцины проверяли в неблагополучных по некробактериозу хозяйствах Алматинской области. В эксперименте используют 4 группы животных по 30 голов (нетели) в каждой, в которых 3 опытные группы и одна контрольная. Пример 3. Вакцину против некробактериоза животных вводят подкожно при следующем соотношении компонентов антиген из штамма В-0063 (3,0-3,5 млрд. м. т. в см 3) 69,0 формалин, содержащий не менее 36,5 формальдегида 0,6 гель гидрата окиси алюминия(3 раствор) остальное. В опытной группе животных (30 голов) через 6 месяцев заболело 5 голов (16,67). Таким образом,профилактическая эффективность при таком соотношении компонентов составляет 83,3, а продолжительность иммунитета 6 месяцев. Пример 4. Вакцину против некробактериоза животных вводят также как в примере 3, при следующем соотношении компонентов антиген из штамма В-0063 (3,0-3,5 млрд. м. т. в см 3) 70,0 формалин, содержащий не менее 36,5 формальдегида 0,5 гель гидрата окиси алюминия(3 раствор) остальное. В иммунизированной группе животных (30 голов) через 8 месяцев заболело 3 головы (10). Таким образом,профилактическая эффективность вакцины против некробактериоза составляет 90, а продолжительность иммунитета составляет 8 месяцев. Пример 5. Вакцину против некробактериоза животных вводят также как в примере 3, при следующем соотношении компонентов антиген из штамма В-0063 (3,0-3,5 млрд. м. т. в см 3) 70,0 формалин, содержащий не менее 36,5 формальдегида 0,7 гель гидрата окиси алюминия(3 раствор) остальное. В опытной группе животных профилактическая эффективность вакцины была такой же, как в примере 4 (90 и продолжительность иммунитета 7 месяцев). В контрольной группе животных (вакцина не применялась) заболело 9 голов (30) животных,причем течение патологического процесса было тяжелее, чем при заболевании в опытных группах. Таким образом,наиболее эффективные результаты иммунизации были достигнуты в примерах 4 и 5, а соотношение компонентов в примере 5 является наиболее оптимальным для серийного выпуска предлагаемой вакцины. Пример 6. Контроль вакцины некробактериоза животных. Физико-химические и биологические свойства. Внешний вид, цвет. Слегка опалесцирующая коричневая жидкость с рыхлым сероватым осадком,легко разбивающимся в гомогенную взвесь. Наличие посторонних примесей. Вакцина не должна содержать посторонних примесей, плесени,не разбивающихся конгломератов. Показатель(водородных ионов) от 7,0 до 7,2. Стерильность. Посевы и пересевы на бактериологические питательные среды в течение 3 25407 35 суточного выдерживания при температуре от плюс 20 до плюс 37 С должны оставаться стерильными. Типичность. В окрашенных, сделанных из вакцины, обнаруживаются грамотрицательные палочки,характерные для возбудителей некробактериоза. Безвредность. Вакцина, введенная подкожно 3 кроликам массой от 2,0 до 2,5 кг в дозе 4,0 см 3 и 3 морским свинкам массой от 450 до 500 г в дозе 1,0 см 3, не должна вызывать их гибели в течение 10 суточного наблюдения. Иммуногенная активность. Подкожное двукратное введение вакцины 5 кроликам массой от 2,0 до 2,5 кг в дозе 4 см 3 должно через 20 суток обусловить образование антител в сыворотке их крови в титре не менее 132 в реакции агглютинации. Продолжительность иммунитета. У крупного и мелкого рогатого скота, привитых двукратно подкожно в дозе 5,0 и 3,0 см 3, соответственно с интервалом 20 суток, длится 8 месяцев. Надежность. Вакцина, введенная подкожно крупному и мелкому рогатому скоту в объемах 5,0 и 3,0 см 3, соответственно, должна предохранять от заражения не менее 75 иммунизированных животных. Термостабильность. При температуре от 2 до 8 - 18 месяцев При температуре от 15 до 25 90 суток при плюс 37 - 30 суток. Апробация вакцины против некробактериоза животных в неблагополучных по данной инфекции хозяйствах Алматинской области показала, что препарат является безвредным, ареактогенными и высокоиммуногенным препаратом профилактическая эффективность составляет 82 85. Применение вакцины некробактериоза животных позволит профилактировать данную инфекцию у животных и значительно сократить материальные и трудовые затраты животноводческих хозяйств. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Вакцина против некробактериоза животных,включающая инактивированный формалином антигенадъювант,отличающаяся тем, что она в качестве антигена содержит штамм эпизоотической культурыВ-0063 при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штаммаВ-0063 (3,0-3,5 млрд. м. т. в 1,0 см 3) 69,0-70,0 Формалин(36,5 раствор формальдегида) 0,5-0,7 гель гидрата окиси алюминия (3 раствор) Остальное