Способ выделения бергаптена из Peucedanum morisonii Bess. (горичник Мориссона ), обладающего нейротоксической активностью

(51) 08 101/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ упаривания осаждают 30-ным водным метанолом,и остаток (6 г) делят колоночной хроматографией на силикагеле смесью растворителей гексан- ЕЮАс,повышая полярность элюента. При элюировании смесью гексан-(133) выделяют вещество 1(100 мг), которое идентифицируют как бергаптен. Задачей изобретения является разработка способа выделения 1 из растительного сырья, (горичник Мориссона),произрастающего на территории Республики Казахстан и использовании нетоксичных растворителей, таких как метанол и этанол. Способ выделения бергаптена, обладающего нейротоксической активностью,включающий экстракцию и колоночную хроматографию,отличающийся тем, что воздушно-сухое сырье надземной части растения экстрагируют метанолом или этанолом полученный экстракт после упаривания осаждают 30-ным водным метанолом или этанолом, и остаток делят колоночной хроматографией на силикагеле элюированием смесью растворителей гексанэтилацетат в соотношении 133.(73) Республиканское государственное казенное предприятие Евразийский национальный университет им. Л.Н. Гумилева Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ БЕРГАПТЕНА ИЗ. (ГОРИЧНИК МОРИССОНА),ОБЛАДАЮЩЕГО НЕЙРОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ(57) Изобретение относится к области биоорганической химии, химии природных и физиологически активных веществ. Способ выделения бергаптена 1 из сырья, (горичник Мориссона),обладающего нейролептической активностью заключается в том, что воздушно-сухое сырье надземной части растения Р,(1 кг),исчерпывающе экстрагируют метанолом или этанолом. Полученный экстракт (88.15 г) после Изобретение относится к области биоорганической химии, химии природных и физиологически активных веществ. Значительный интерес в поиске биологически активных соединений представляют вещества,имеющие нейролептическую (нейротоксичную) активность. Нейролептики(нейролептические средства). Термин нейролептики (нейролептические средства) был предложен еще в 1967 г., когда разрабатывалась первая классификация психотропных препаратов. Им обозначали средства,предназначенные для лечения тяжелых заболеваний ЦНС (психозов). Разработан способ выделения бергаптена 1 . нейролептической активностью. Преимуществом изобретения является то, что разработан способ выделения 1 из растительного сырья,(горичник Мориссона),произрастающего на территории Республики Казахстан и использовании нетоксичных растворителей таких как метанол и этанол. Близкими аналогами бергаптену 1 по структуре и способу выделения являются 2, 3 и другие фуранокумарины М.Н.А.(1979). Следует отметить, что при выделении данных веществ аналогичным способом, включающим экстракцию и колоночную хроматографию,используется токсичный хлороформ, что исключено в нашем способе. Аналогом по назначению является препарат резерпин 4 Машковский М. Д. Лекарственные средства. В двух частях. Ч. 1. - 12-е изд., перераб. и доп. - М. Медицина, 1998. - 736 с, алкалоид,выделенный из. Следует отметить, что выделении резерпина изпредставляет более многостадийный дорогостоящий процесс. произрастающего на территории Республики Казахстан и использовании нетоксичных растворителей, таких как метанол и этанол. Пример 1. Воздушно-сухое сырье надземной части растения . , которое собирали в окр. Ивановского хребта(Алтай) ВосточноКазахстанской области в августе 2007 года,исчерпывающе экстрагируют метанолом. Полученный экстракт (88.15 г) после упаривания осаждают 30-ным водным метанолом, и остаток(6 г) делят колоночной хроматографией на силикагеле смесью растворителей гексан- ЕАс,повышая полярность элюента. При элюировании смесью гексан- ЕАс (133) выделяют вещество 1(100 мг), которое идентифицируют как бергаптен. С 1284 , белые кристаллы с т.пл. 188-189 С УФ 222, 245, 250, 259, 268, 311 нм. Масс-спектр Е 218 216, 201, 188, 173, 157, 145,131, 117, 108, 101, 89, 75, 63,51.671, 597,560,533,501, 468, 455 (2 М), 444, 376, 365, 360,352, 345, 271, 239 (М), 228, 217, (МН), 208,206, 203, 203, 200, 196, 192 ИК (, см-1, КВ) 3751, 3414, 3145, 3088, 3013,2960, 2373, 2341, 1833, 1731 , 1627,1583, 1544, 1469, 1359, 1289, 1258, 1215, 1157, 1124,1080, 1033, 983, 964, 895, 865, 831, 760, 722, 646,604, 577, 536, 501 1 ЯМР(ДМСО -6) 63, 8.15, 7.6 7.15, 7.03,4.15 (-3) 13 СЯМР (ДМСО- 6) 161.1, 158.2, 152.6, 149.4,144.7, 139.1, 112.6, 112.4, 106.3, 105.0, 93.8, 60.1. Испытание нейротоксической активности 1. . Способ выделения бергаптена 1 из сырья, (горичник Мориссона),обладающего нейролептической активностью заключается в том, что воздушно-сухое сырье надземной части растения Р,(1 кг),исчерпывающе экстрагируют метанолом или этанолом. Полученный экстракт (88.15 г) после упаривания осаждают 30-ным водным метанолом,и остаток (6 г) делят колоночной хроматографией на силикагеле смесью растворителей гексан- ЕАс,повышая полярность элюента. При элюировании смесью гексан- ЕАс (133) выделяют вещество 1(100 мг), которое идентифицируют как бергаптен. Задачей изобретения является разработка способа выделения 1 из растительного сырья, (горичник Мориссона),2 Делительную воронку на 55 мл заполняют искусственной морской водой и добавляют 200 мг яиц. Выдерживают в течение 3-х дней при мягкой подаче воздуха пока рачки не выведутся из яиц. Одну сторона трубы покрывают алюминиевой фольгой, и 5 мин спустя, личинок,которые собираются на яркой стороне делительной воронки, вынимают пипеткой Пастера. 20-40 личинок помещают в 990 морской воды в каждой из 24 микроплошек. Подсчитывают мертвых личинок под микроскопом. Добавляют по 10 раствора диметилсульфоксида на 10 мг/мл образца. В качестве препарата сравнения используют актиномицин Д или стауроспорин. Для отрицательного контроля добавляют только 10 1 диметилсульфоксида. После 24 ч инкубации и дальнейшем выдерживании микроплошки в течение 24 ч (для обеспечения неподвижности) посчитывают мертвые личинки под микроскопом. Образцы с высокой цитостатической эффективностью (менее 5 выживших личинок) проверяют снова с концентрациями 50, 10, 5 и 1/. Смертность Р определяют по следующей формуле Аколичество мертвых личинок после 24 чколичество мертвых личинок до проведения теста Всреднее количество мертвых личинок в отрицательном контролеобщее количество личинок. На основании проведенного эксперимента можно предположить, что соединение 1 имеет потенциальную нейротоксическую(нейролептическую) активность - личинки остаются живы, но значительно обездвижены. 1. Способ выделения бергаптена 1, общей формулы обладающего отличающийся тем, что его источником служит растительное сырье., произрастающая на территории Республики Казахстан включающий экстракцию метанолом,осаждением балластным веществ 30- ным метонолом или этанолом и с последующей колоночной хроматографией полученного экстракта на силикагеле элюированием смесью растворителей гексан-этилацетат в соотношении 133. 2. Способ выделения бергаптена 1,отличающийся тем, что экстракция проводится другими полярными и неполярными растворителями такими как пентан, петролейный эфир, гексан, гептан, циклогексан, бензол,тетрахлорметан, дихлорметан, хлороформ, этанол,пропанол, бутанол, этилацетат, пропилацетат, бутилацетат,ацетонитрил,сверхкритический углекислый газ, сверхкритическая и надкритическая вода, сжиженные газы и др. с последующей колоночной хроматографии полученного экстракта на силикагеле, полиамиде, сефадексе-20 и других сорбентах элюированием смесью таких растворителей как пентан, петролейный эфир,гексан,гептан,циклогексан,бензол,тетрахлорметан, дихлорметан, метанол, этанол,пропанол, бутанол, этилацетат, пропилацетат,бутилацетат,ацетонитрил,сверхкритический углекислый газ, сверхкритическая и надкритическая вода, сжиженные газы и других или их смесей в подходящих соотношениях. 3. Способ выделения бергаптена 1,отличающийся тем, что проводится экстракция водой с добавкой необходимого количества циклодекстринов,с последующим отфильтровыванием нерастворенного остатка,отгонкой воды, растворением полученного экстракта в этаноле,отфильтровыванием нерастворенного остатка, сгущением полученного раствора и препаративной колоночной хроматографии полученного остатка на силикагеле, полиамиде, сефадексе-20 и других сорбентах элюированием смесью таких растворителей как пентан, петролейный эфир,гексан,гептан,циклогексан,бензол,тетрахлорметан, дихлорметан, метанол, этанол,пропанол, бутанол, этилацетат, пропилацетат,бутилацетат, ацетонитрил, сверхкритический углекислый газ,сверхкритическая и надкритическая вода, сжиженные газы и других или их смесей в подходящих соотношениях. 4. Способ выделения бергаптена,отличающийся тем, что для его выделения используются другие виды растений, как,, в которых содержится бергаптен 1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ выделения бергаптена, обладающего нейролептической активностью,включающий экстракцию и колоночную хроматографию,3 отличающийся тем, что воздушно-сухое сырье надземной части растения .экстрагируют метанолом или этанолом полученный экстракт после упаривания осаждают 30-ным водным метанолом или этанолом, и остаток делят колоночной хроматографией на силикагеле элюированием смесью растворителей гексанэтилацетат в соотношении 133.