Штамм бактерий сampylobacter fetus fetus в – 0115 казниви, используемый для получения кампилобактериозной агглютинирующей моноспецифической сыворотки

(51) 12 1/20 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Известен штамм бактерий(30-ВИЭВ), используемый для получения кампилобактериозной агглютинирующей моноспецифической сыворотки Трубицкий А.Н. Серологическая диагностика кампилобактериоза у овец.- М., Бюлл. ВИЭВ, 1988, в.56, с. 33 -36. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в изыскании вирулентного штамма. Штамм бактерийВ 0115 КазНИВИ, депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно исследовательский ветеринарный институт, используемый для получения кампилобактериозной агглютинирующей моноспецифической сыворотки.(72) Сембина Фатима Егимбаевна Шманов Кайырбай Сагнтаевич(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Трубицкий А.Н. Серологическая диагностика кампилобактериоза у овец.- М., Бюлл. ВИЭВ, 1988,в.56, с. 33 -36 В 0115 КАЗНИВИ,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗНОЙ АГГЛЮТИНИРУЮЩЕЙ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ Изобретение относится к области ветеринарии, в частности ветеринарной микробиологии и представляет собой штамм,используемый для получения кампилобактериозной агглютинирующей моноспецифической сыворотки. Известен штамм бактерий(30-ВИЭВ), используемый для получения кампилобактериозной агглютинирующей моноспецифической сыворотки Трубицкий А.Н. Серологическая диагностика кампилобактериоза у овец.- М., Бюлл. ВИЭВ, 1988, в.56, с. 33 -36. Недостатком известного штамма является возможность утраты вирулентности вследствие длительных пересевов и отсутствие пассажей на восприимчивых животных. Задачей данного изобретения является получение вирулентного штамма с типичными культуральноморфологическими, биохимическими, антигенными свойствами. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в изыскании вирулентного штамма. Штамм бактерийВ 0115 КазНИВИ, депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно исследовательский ветеринарный институт,используется для получения кампилобактериозной агглютинирующей моноспецифической сыворотки. Идентификацию штамма бактерий проводят по морфологическим, культуральным и физиолого биохимическим свойствам согласно определителю-,-,-/, 2005. -.. - 1147 - 1160 . ШтаммВ - 0115 КазНИВИ Селекция штамма. ШтаммВ - 0115 КазНИВИ выделен из абортированного плода овцы, принадлежащего ПК Байганинский Актюбинской области. Ткань головного мозга засевают пастеровской пипеткой в полужидкий агар (ПЖА) с добавлением ферментативного гидролизина. Культивируют при микроаэрофильных условиях (эксикаторе) в термостате при 37 С 36 - 48 часов. Отмечают рост в виде серовато-белого диска под поверхностью агара и незначительное помутнение по ходу столбика среды, что обозначает присутствие посторонней микрофлоры. Затем проводят очистку методом пастеровских пипеток,рассчитанным на использование большой подвижности кампилобактерий, их накопление и рост под поверхностью агара. С этой целью в пастеровские пипетки вносят ПЖА в количестве, чтобы высота столбика была не менее 10-12 см. Посев исследуемого материала проводят путем подсоса 2 через узкую часть пастеровской пипетки и через 3 6 - 4 8 часов культивирования обнаруживают под поверхностью столбика среды рост в виде тонкого диска, который переносят в обычные пробирки для дальнейшего роста и на чашки Петри с мясопептонным печеночным агаром для изоляции отдельных колоний кампилобактерий прозрачного сероватого цвета в -форме. При наличии в культуре в большом количестве подвижной посторонней микрофлоры, проводят ее очистку путем внутрибрюшинного введения взвеси смешанной двухсуточной культуры в количестве 1,0-1,5 см 3 морским свинкам с последующим их убоем через 5-10 мин и посевом крови из сердца в ПЖА в 7-8 пробирках с добавлением 10 ферментативного гидролизина. После изоляции чистых культур кампилобактерий проводят дальнейшее их изучение и идентификцию. В результате проведенных исследований выделяют изолят условно обозначенный штаммомВ - 0115 КазНИВИ,который депонирован в коллекции лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Научно - исследовательский ветеринарный институт. Морфологические признаки.В - 0115 КазНИВИ - изогнутая палочка в виде летящей чайки , 1 - 1 0 мкм в длину и 0,2 - 0,8 мкм в ширину. Кампилобактерий подвижные, с монотрихиально расположенными жгутиками, спор и капсул не образуют. Культуральные свойства. Кампилобактерий являются микроаэрофилами. Растут на полужидком агаре при микроаэрофильных условиях,оптимальная температура роста 37 С, при рН среды 7,0 - 7,2. На ПЖА растут в виде диска под поверхностью агара, на МППА - прозрачные сероватого цвета круглые, выпуклые колонии. При хранении культуры довольно быстро диссоциируют в шероховатые- формы. Учет характера роста необходимо проводить через 36-48 часов. Установив по культуральным и морфологическим признакам родовую принадлежность проводят дальнейшую типизацию для установления видовой и подвидовой типизации. Биохимические свойства. Отличительной особенностью кампилобактерий подвида фетус, в том числе и штаммаВ 0115 КазНИВИ, является то, что они выделяют каталазу, не образуют сероводород, растут на средах с добавлением 1 глицина, 8 глюкозы, 10 желчи, не растут на средах с добавлением 3,5 хлорида, не выделяют индол, аммиак, не разжижают желатин, не свертывают молоко, переводят нитраты в нитриты. Культуры не ферментируют углеводы(глюкозу, лактозу, сахарозу, мальтозу, маннит), не растут на ПЖА при 25 С. Антигенная структура. УВ - 0115 КазНИВИ два основных антигенных комплекса О антиген(соматический) термостабильный, Н - антиген (жгутиковый) белковой природы, термолабилен. У всех серотипов имеется общий жгутиковый белковый антиген (Н 24261 антиген), тогда как соматические антигены специфичны для каждого подвида и подтверждают принадлежность культур к тому или иному серотипу. ШтаммВ - 0115 КазНИВИ является эпизоотическим, обладает абортогенными свойствами для суягных овцематок и высокой вирулентностью для белых мышей За время хранения и пересевах в лабораторных условияхВ - 0115 КазНИВИ не изменил культурально морфологических, биохимических свойств, а также патогенность,вирулентность и антигенную структуру. Маркерные признаки штаммаВ - 0115 КазНИВИ, физиологические хемогетеротроф, является микроаэрофилом. Растет на средах с добавлением глицина. Возможна диссоциация из - в -форму, приобретение лекарственной устойчивости. Серологические при типизации с диагностическими моноспецифическими агглютинирующими кампилобактериозными сыворотками , ,типов имеет положительную реакцию с сывороткойтипа и отрицательную реакцию с сывороткамиитипов. Патогенные свойства. ШтаммВ - 0115 КазНИВИ обладает патогенными свойствами для белых мышей массой 16 -18 граммов, при подкожном введении 0,4 см 3 суточной бульонной культуры, вызывая гибель всех 10 мышей.В - 0115 КазНИВИ обладает абортогенными свойствами для суягных овцематок. При подкожном введении 1-5 млрд м. т./см 3 штаммВ-0115 КазНИВИ вызывает аборты у овец. Вирулентность для белых мышей. ШтаммВ - 0115 КазНИВИ обладает выраженной вирулентностью для белых мышей массой 1 6 - 1 8 граммов, вызывая гибель 100 животных при подкожном введении 250 тыс. м. к. в 1 см 3 в дозе 0,4 см 3 на 2 - 3 сутки. Иммунохимические - реакция агглютинации(РА) в титре - 13200. Дополнительные сведения. ШтаммВ-0115 КазНИВИ свободен от бактериальных, грибковых, микоплазменных и вирусных контаминантов. Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующим примером. Пример. Питательной средой для получения бакмассы при изготовлении антигена с целью получения кампилобактериозной агглютинирующей моноспецифической сыворотки служит 0,15 полужидкий мясо-пептонный печеночный агар(ПЖА) с добавлением 10 ферментативного гидролизина. Для приготовления питательной среды используют 1 часть мясной воды, 1 часть печеночного отвара, 2 части дистиллированной воды, добавляют 1 пептона, 0,5 хлорида натрия и 0,15 агара,затем приливают 10 ферментативного гидролизина,концентрация водородных ионов должна быть 7,0 -7,2. Автоклавируют при 1 атм. 30 мин. Для контроля стерильности приготовленную питательную среду засевают на питательные среды МПА, МПБ, среду Сабуро. Готовая питательная среда должна быть стерильной, прозрачной, рН 7,0 -7,2 и содержать аминный азот 200, 0 -250,0 мг. Приготовление посевного материала. Для изготовления антигена с целью получения кампилобактериозной агглютинирующей моноспецифической сыворотки для серологической диагностики кампилобактериоза каждый раз используют отдельную ампулу с лиофилизированной кампилобактериозной культурой. Ампулу с лиофильно высушенной культурой штамма вскрывают и добавляют в нее 2,0 см 3 стерильного физиологического раствора и рассевают с помощью пастеровских пипеток в пробирках на ПЖА с добавлением 10 ферментативного гидролизина. Культуры выращивают в термостате при 37 С в эксикаторах при микроаэрофильных условиях в течение 48 часов. Культуры двухсуточного роста проверяют по результатам микроскопического исследования и отбирают наиболее типичные по морфологическим признакам колонии, затем рабочие культуры проверяют в РА с моноспецифическими кампилобактериозными сыворотками , ,типов на антигенную активность и специфичность. Бактерии штаммаВ-0115 КазНИВИ агглютинируются сывороткамитипа. После уточнения типовой принадлежности проводят контрольное типирование по культурально биохимическим свойствам. Для расплодки штамма отбирают культуры соответствующие видовым характеристикам по результатам типирования. Последующее накопление бакмассы производят во флаконах с ПЖА,после двухсуточного культивирования проверяют на чистоту роста микроскопией мазков, окрашенных по Граму,типичность роста, стерильность и рассевают в колбы Тартаковского с 2,5 - 3,0 мясо-пептонным печеночным агаром (МППА). После 2-3 суточного культивирования чистый рост культуры смывают формалинизированным(0,3) стерильным физиологическим раствором. Смыв культуры дважды промывают на центрифуге при 3000 оборотах в минуту, суспендируют до концентрации 10 миллиардов микробных тел в 1 см 3 по оптическому стандарту мутности и используют в качестве антигена для иммунизации кроликов. Использование штамма позволит получить кампилобактериозные агглютинирующие моноспецифические сыворотки для диагностики кампилобактериоза в реакции агглютинации. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерийВ 0115 КазНИВИ, депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно исследовательский ветеринарный институт, используемый для получения кампилобактериозной агглютинирующей