Способ иммунологической диагностики макросомии

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и клинической иммунологии, предназначено для диагностики рождения новорожденного с крупной массой тела (макросомия плода). Способ основан на определении наличии сенсибилизации замедленного типа к антигенам плаценты у беременных женщин с помощью прямой реакции торможения миграции лейкоцитов. Для крупного плода было характерным наличие достоверного торможения миграции лейкоцитов в 87,9 случаев (в 8,7 раза чаще, чем при нормосомии плода), при этом значения индексов торможения миграции лейкоцитов были менее 0,7.(72) Цой Игорь ГиленовичТастанбекова Шолпан Оразхановна(56) Кравец Е.Б., Посевкина В.Н., Казанцева Н.В. Клинико-метаболический статус плода и новорожденного при рождении с крупной массой // Педиатрия, 1992,1, с. 18-21(54) СПОСОБ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ МАКРОСОМИИ 22540 Изобретение относится к медицине, а именно к акушерской патологии и клинической иммунологии,предназначено для лабораторной диагностики крупного плода (макросомии). Известным иммунологическим способом ранней диагностики новорожденного при рождении с крупной массой тела является определение повышенного уровня циркулирующих иммунных комплексов(ЦИК) в материнской венозной крови, что может являться стимулом для ускоренного развития иммунной системы новорожденного (Кравец Е.Б., Посевкина В.Н.,Казанцева Н.В. Клиникометаболический статус плода и новорожденного при рождении с крупной массой // Педиатрия.- 1992.1. - с. 18-21). При этом уровень ЦИК в крови беременных и пуповинной крови новорожденных коррелировал с уровнем гиперлипидемии. Основными недостатками известного способа является следующие моменты- уровень ЦИК в крови характеризует гуморальный тип иммунного ответа на антигены плаценты,тогда как ведущим в этом плане является сенсибилизация клеток, в большей степени определяющая иммунопатологию и аутоиммунные процессы- общая концентрация ЦИК в сыворотках крови характеризует интенсивность антителогенеза не только к антигенам плаценты, но и к большому числу других антигенов, к которым сформировался гуморальный иммунный ответ- высокий уровень ЦИК в сыворотках крови не является строго специфичным признаком для крупного плода, он имеет место практически при всех инфекционно-воспалительных процессах и нарушениях состояния фагоцитарной системы, которые,как правило, отмечаются при осложненном течении беременности или обострении сопутствующих фоновых заболеваний- небольшие различия между средними значениями концентрации ЦГК в сыворотках беременных при макросомии и нормосомии, не имеющие достоверности различий по средним значениям 66,66,8 ед.опт.пл. и 58,44,75 ед.опт.пл.(Кравец Е.Б., Посевкина В.Н., Казанцева Н.В. Клинико-метаболический статус плода и новорожденного при рождении с крупной массой //Педиатрия.1992. -1. - с. 18-21). Задача изобретения - иммунологический способ ранней диагностики новорожденного с крупной массой тела, основанный на определении степени аллергической перестройки (сенсибилизации) организма замедленного типа к антигенам плаценты в третьем триместре с использованием прямой реакции специфического торможения миграции лейкоцитов из капилляров. Настоящий способ разработан с учетом ведущей роли аллергии (повышенной чувствительности) замедленного типа (клеточного) в иммунопатологических и аутоиммунных процессах,включая сенсибилизацию к антигенам плаценты. Сущность способа заключается в определении степени сенсибилизации организма матери к антигенам плаценты с помощью прямой реакции торможения миграции лейкоцитов, когда сенсибилизиро 2 ванными Т-лимфоцитами под действием специфического (плацентарного) антигена вырабатывается фактор, тормозящий миграцию лейкоцитов, интенсивность секреции которого находится в прямой зависимости от уровня повышенной чувствительности замедленного типа. Показателями степени сенсибилизации организма беременной к антигенам плаценты являются интенсивность торможения миграции лейкоцитов из капилляров в присутствии антигена. Высокому уровню сенсибилизации к плацентарным антигенам соответствует повышенный риск рождения новорожденного с крупной массой тела. Способ осуществляется следующим способом. Прямая реакции торможения миграции лейкоцитов. К венозной крови с антикоагулянтом (гепарин,ЭДТА, цитрат натрия и др.) для осаждения эритроцитов приливается 10-ный раствор желатины из расчета 110. Осадок лейкоцитов дважды отмывают центрифугированием в забуференном физиологическом растворе с рН 7,2 (15 минут при 1500 об/мин). После подсчета лейкоцитарных клеток традиционным способом в камере Горяева, клеточную взвесь разводят средой 199 до концентрации 5 х 1 06/мл(рабочая взвесь). Лейкоцитарной рабочей взвесью заполняют стеклянные капилляры диаметром 1,0 мм и длиной 2,0 см, один из концов которых запаиваются парафином. Капилляры инкубируют в 96 луночных круглодонных планшетах для иммунологических исследований в течение 24 часов при 37 С в атмосфере с содержанием 5,0 СО 2. Перед инкубацией в опытные лунки добавляют водно-соленой экстракт антигена плаценты в конечной концентрации по белку 50 мкг/мл, контрольные пробы инкубируются без антигена. Настоящая дозировка антигена предварительно была оттитрована на донорских клетках и не вызывала достоверного изменения миграции клеток. Водно-солевые антигены из плацент готовятся стандартным методом с использованием ткани плаценты доноров (1), -, сохраняются в лиофильно высушенном виде. По окончанию инкубации подсчитывали с помощью камеры Горяева количество мигрировавших из капилляров лейкоцитов в опытные и контрольные лунки планшета. Отношение абсолютного количества лейкоцитов в опытных пробах к соответствующим контролям отражали степень интенсивности торможения миграции лейкоцитов и соответственно уровень сенсибилизации к плацентарным антигенам, величину которого выражали с помощью индекса торможения миграции лейкоцитов (ИТМЛ). Его значения ниже 0,7 указывали на наличие достоверного торможения миграции лейкоцитов в опытных пробах и на наличие повышенной чувствительности замедленного к плацентарным антигенам, что соответствовало риску развития макросомии плода. Пример 1. С использованием предлагаемых способов была обследована группа беременных женщин(40 человек), в последующем родивших новорожденных с крупной массой тела, и 20 беременных (кон 22540 трольная группа), родивших детей с нормосомией. Полученные результаты приведены в таблице 1. Таблица 1 Результаты прямой реакций торможения миграции лейкоцитов и антигензависимого Е-розеткообразования Т-лимфоцитов периферической крови с плацентарными антигенами при макро- и нормосомии плодов Сравниваемые группы Положительных реакцийМакросомия плода (40) Нормосомия плода (20) Р Реакция торможения миграции лейкоцитов ИТМЛ 87,95,2 0,760,02 10,06,7 0,940,08 0,01 0,05 Примечание ИТМЛ - индекс торможения миграции лейкоцитов Из приведенных в таблице 1 данных видно, что в случае макросомии плода в реакции антигензависимого Е-розеткообразования с лимфоцитами периферической крови беременных женщин достоверно чаще регистрировалось под влиянием кратковременного действия плацентарного антигена усиление экспрессии рецепторов к эритроцитам барана, что отражалось в увеличении относительного количества определяемых Е-розетообразующих лимфоцитов в опытных пробах, в сравнении с соответствующими контрольными пробами. Так, стимулирующий эффект плацентарного антигена при макросомии регистрировался в 67,57,4 случаев, тогда как в случаях рождения новорожденных с нормальной массой тела только в 25,09,7, т.е. в 2,7 раза реже. Вместе с тем обратный, ингибирующий эффект в опытной группе с макросомией плода наблюдался в 2,25 раза реже, чем при нормосомии (20,06,3 и 45,0 11,1 соответственно). Также при рождении крупных новорожденных в 2,4 раза реже отсутствовал достоверный эффект антигена на экспрессию Ерецепторов на Т-лимфоцитах периферической крови(12,55,2 и 30,010,2 соответственно). В последним двум показателям статистическая достоверность различий не определялась, что, естественно, связано с относительно небольшим числом наблюдений и при увеличении последнего различия будут статистически значимыми. Еще более существенные различия были выявлены при сравнении результатов прямой реакции торможения миграции лейкоцитов в присутствии плацентарного антигена. В данном случае по частоте положительных реакций у беременных с макросомией плода они регистрировались в 8,8 раза чаще,чем в случаях рождения новорожденных с нормальной массой тела (87,95,2 и 10,06,7 соответственно, р 0,01). Достоверные различия имели место и по средним значениям индексов торможения миграции лейкоцитов. В частности, у беременных женщин,родивших в последующем новорожденных с крупной массой тела, этот показатель равнялся 0,760,02, а при нормосомии плода - 0,940,08,р 0,05). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ иммунологической диагностики макросомии, включающий исследование крови женщин в третьем триместре, отличающийся тем, что при исследовании выявляют степень сенсибилизации организма матери к антигенам плаценты с помощью прямой реакции торможения миграции лейкоцитов,определяют индекс торможения миграции лейкоцитов и при его значении ниже 0,7 диагностируют макросомию.