Способ диагностики инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина

(51) 61 39/00 (2006.01) 01 33/53 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ выявлении овисных антител в сыворотках крови больных животных при помощи конглютинирующего комплекса (комплемента и конглютинина), источником которого служит сыворотка крови крупного рогатого скота. В способе диагностики инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина серологическое исследование испытуемой сыворотки крови проводится путем добавления к ней овисного антигена,комплемента,и индикаторной системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, в качестве комплемента используют конглютинирующую сыворотку крови крупного рогатого скота, при этом результаты реакции учитывают по наличию или отсутствию конглютинации эритроцитов, антиген используют в рабочем титре, устанавливаемом путем титрования, конглютинирующую сыворотку используют в рабочем титре, установленном при титровании ее в присутствии физиологического раствора и испытуемой сыворотки. 1 табл.(72) Сайдулдин Тлеуберды Ильгекбаева Алтынай Куанышкызы Ильгекбаева Гульназ Дуйсековна Хамзин Салимбек Кинаятович(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ В РЕАКЦИИ САЙДУЛДИНА(57) Изобретение относится к области ветеринарии,а именно к области диагностики и может найти широкое применение для серологической диагностики инфекционного эпидидимита баранов. Задачей изобретения является диагностика инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина путем обнаружения в сыворотке крови противоовисных антител. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в эффективном 21095 Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к области диагностики и может найти широкое применение для серологической диагностики инфекционного эпидидимита баранов. Уровень известной техники. Наиболее близким к предполагаемому изобретению является способ диагностики инфекционного эпидидимита баранов в реакции длительного связывания комплемента(РДСК), где исследование испытуемой сыворотки крови проводится путем добавления к ней овисного антигена, комплемента, гемолитической системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, результаты учитывают по наличию или отсутствию гемолиза эритроцитов Наставление по диагностике бруцеллеза животных/В кн. Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции Справочник. Составители Б.И.Антонов, В.В.Борисова, П.М.Волкова др. Под ред. Б.И.Антонова. - М. Агропромиздат, 1986. С.70 - 80 Недостатком РДСК является ее недостаточная чувствительность,обусловленная низкой аффинностью комплемента морской свинки в отношении антител в сыворотке крови овец. Задачей изобретения является диагностика инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина путем обнаружения в сыворотке крови противоовисных антител. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в эффективном выявлении овисных антител в сыворотках крови больных животных при помощи конглютинирующего комплекса (комплемента и конглютинина), источником которого служит сыворотка крови крупного рогатого скота. В указанных признаках общими дляи РДСК являются следующие в обоих случаях к смеси испытуемой сыворотки с антигеном добавляются дополнительный фактор и индикаторная система. Результаты учитывают по наличию или отсутствию реакции между дополнительным фактором и индикаторной системой. В обоих способах индикаторной системой служат сенсибилизированные гемолизином эритроциты барана. Отличительные признаки в РДСК дополнительным фактором служит комплемент, под действием которого эритроциты в индикаторной системе гемолизируются. Вдополнительным фактором служит конглютинирующая сыворотка,которая подвергает конглютинации эритроциты в индикаторной системе. В способе диагностики инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина серологическое исследование испытуемой сыворотки крови проводится путем добавления к ней овисного антигена,комплемента,и индикаторной системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, в качестве комплемента используют конглютинирующую сыворотку крови крупного рогатого скота, при этом результаты реакции учитывают по наличию или отсутствию конглютинации эритроцитов, антиген 2 используют в рабочем титре, устанавливаемом путем титрования, конглютинирующую сыворотку используют в рабочем титре, установленном при титровании ее в присутствии физиологического раствора и испытуемой сыворотки. Способ диагностики инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина состоит в следующем. Пример 1. Реакцию ставят в пробирках в объеме 1,0 см 3. Необходимы следующие компоненты испытуемая сыворотка овец, овисный антиген,конглютинирующая сыворотка, овисная сыворотка,негативная сыворотка, гемолитическая сыворотка,эритроциты барана, физиологический раствор. Для приготовления индикаторной системы взвесь эритроцитов и гемолитической сыворотки смешивают в равных объемах и выдерживают при 37-38 С в течение 15-20 минут. Испытуемые сыворотки овец должны быть свежими или консервированными по принятым методам, без признаков гемолиза и помутнения. Для титрования конглютинирущей сыворотки во флакон (ампулу) с лиофилизированной сывороткой вносят физиологический раствор в количестве,указанном на этикетке, и растворяют путем легкого встряхивания. Готовят основное разведение 110,для чего к 0,5 см 3 сыворотки добавляют 4,5 см 3 физиологического раствора и тщательно перемешивают. Разведенную конглютинирующую сыворотку разливают в 2 ряда пробирок в объеме от 0,1 см 3 до 0,5 см 3 с интервалом по 0,05 см 3. Общий объем в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 0,5 см 3. В первый ряд пробирок добавляют по 0,25 см 3 физиологического раствора,во второй ряд - столько же сыворотки крови овец,инактивированной при(60-62)С. Смесь выдерживают в водяной бане 30 мин при 37 С,добавляют во все пробирки по 0,25 см 3 индикаторной системы и снова выдерживают в водяной бане при 37 С в течение 1 ч, учитывают результаты. За титр принимают наименьшее количество конглютинирующей сыворотки,обусловливающее полную конглютинацию эритроцитов. Рабочее разведение на 1 интервал(0,05 см 3) больше. Расчет количества неразведенной конглютинирующей сыворотки, необходимого для главного опыта, делают по формуле- количество неразведенной конглютинирующей сыворотки А - рабочая доза конглютинирующей сыворотки В - количество пробирок в опыте 10 - основное разведение конглютинирующей сыворотки (110). Пример Так как количество конглютинирующей сыворотки в рабочем разведении, требующееся для всей реакции (в данном примере 100 пробирок), 21095 3 равно 25 (0,25 х 100), то к 3 см неразведенной конглютинирующей сыворотки следует добавить 22 см 3 физиологического раствора. Для постановки главного опыта испытуемые сыворотки крови овец в разведениях 15, 15 и 110 в объеме по 0,25 см 3 инактивируют в водяной бане при (60-62)С в течение 30 мин. В первую пробирку добавляют по 0,25 см 3 физиологического раствора,во вторую и третью пробирки - столько же овисного антигена в рабочем титре. Пробирки встряхивают и во все пробирки вносят по 0,25 см 3 конглютинирующей сыворотки в рабочем разведении и выдерживают в водяной бане 30 мин при 37 С. Добавляют по 0,25 см 3 индикаторной системы и выдерживают 1 час в водяной бане при(37-38)С, при комнатной температуре еще 1 час и учитывают результаты. Одновременно с главным опытом ставят следующие контроли с позитивной овисной сывороткой в разведениях 15 без антигена, 15 и 110 и до предельного титра с антигеном, с негативной сывороткой в разведениях 15 без антигена, 15 и 110 с антигеном. Постановку реакции считают правильной и учет результатов производят в случае, если в пробирках с позитивной овисной сывороткой взвесь эритроцитов остается гомогенной во всех разведениях до предельного титра сыворотки, а в контрольной пробирке в разведении 15 без антигена и в контроле с негативной сывороткой во всех пробирках произойдет полная конглютинация эритроцитов. Реакцию учитывают визуально по степени конглютинации эритроцитов. Полная задержка конглютинации - эритроциты оседают на дно пробирки в виде пуговки, при встряхивании образуют равномерная взвесь Частичная задержка конглютинации эритроциты оседают на дно пробирки в виде пуговки, образуя слабый зонтик, при встряхивании появляются мелкие хлопья на фоне свободных эритроцитов, просветление жидкости частичное Полная конглютинация - эритроциты оседают на дно пробирки в виде зонтика и при встряхивании образуют крупные хлопья на прозрачном фоне. Диагностическая оценка результатов реакции Полная задержка конглютинации в разведении сыворотки крови 15 и частичная задержка конглютинации в разведениях сыворотки крови 15 и 110 при полной конглютинации в контроле без антигена оценивается как положительный результат. Частичная задержка конглютинации в разведении сыворотки крови 15 при полной конглютинации в контроле без антигена оценивается как сомнительный результат. Полная конглютинация эритроцитов как в опытных, так и в контрольной пробирках оценивается как отрицательный результат. Пример 2. Опыты проводились в хозяйствах Талгарского района Алматинской области. Из неблагополучных по инфекционному эпидидимиту Кендалинского, Туздыбастауского сельских округов исследовали 57 баранов. С сыворотками крови ставили реакцию длительного связывания комплемента (РДСК) и реакцию Сайдулдина . Результаты приведены в таблице 1. Как видно из таблицы, в 43 пробы показали отрицательный результат, 14 - положительный 2 сыворотки крови реагировали в титре 15, 2 -110,4120,2-140, 1 - 180 и 3 - 1160. Все сыворотки крови, реагировавшие вотрицательно и положительно в разведении 15,показали отрицательный результат в РДСК. Из 2 проб, с титром в 110, в РДСК одна реагировала отрицательно, другая - положительно в разведении сыворотки 15. Сыворотки крови 4 баранов реагировали положительно вв титре 120. Из них только 3 дали аналогичный результат в РДСК. 6 пробы показали положительный результат вв разведении 140 и выше. Все они реагировали положительно в РДСК в титрах 15 - 120. Таким образом, из 57 сывороток крови баранов,принадлежащих неблагополучным по инфекционному эпидидимиту хозяйствам, вдиагноз подтвердился в 14, а в РДСК в 10 случаях. При этом титры овисных антител вбыли намного выше, чем в РДСК. При исследовании 26 сывороток крови баранов,принадлежащих благополучному по инфекционному эпидидимиту Панфиловскому сельскому округу, результатыи РДСК были отрицательными. Таким образом, реакция Сайдулдина является чувствительным тестом при диагностике инфекционного эпидидимита баранов. Эффективность обнаружения больных животных значительно выше, чем РДСК. Таблица Результатыв сравнении с РДСК при инфекционном эпидидимите баранов 21095 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина. включающем серологическое исследование испытуемой сыворотки крови путем добавления к ней овисного антигена,комплемента,и индикаторной системы из сенсибилизированных гемолизином эритроцитов барана, отличающийся тем, что в качестве комплемента используют конглютинирующую сыворотку крови крупного рогатого скота, при этом результаты реакции учитывают по наличию или отсутствию конглютинации эритроцитов, антиген используют в рабочем титре, устанавливаемом путем титрования,конглютинирующую сыворотку используют в рабочем титре, установленном при титровании ее в присутствии физиологического раствора и испытуемой сыворотки.