Способ получения кормовой добавки Бентобак

(51) 23 3/02 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) 12 1/02 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Задача изобретения повышение антагонистической активности кормовой добавки в отношении возбудителей кишечных инфекций,содержания в ней клеток пробиотических бактерий и витамина В 12. Сущность изобретения. В составе кормовой добавки штамм-15 заменен на 8. Техническим результатом является получение кормовой добавки бентобак со штаммом-С-8, введенным взамен-15,превосходит прототип по антагонистической активности в отношении возбудителей кишечных инфекций,содержанию в ней клеток пробиотических бактерий и витамина В 12.(76) Саданов Аманкелди Курбанович Гаврилова Нина Николаевна Ратникова Ирина Александровна Шорабаев Ерик Жарылкасынович(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ БЕНТОБАК(57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в процессе производства кормовой добавки бентобак,содержащей микробную массу живых клеток целлюлолитических бактерий Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в процессе производства кормовой добавки бентобак, которую применяют для лучшего усвоения грубых кормов, снижения риска ацидоза у животных, нормализации белкового обмена, повышения продуктивности животных. Кормовая добавка содержит микробную массу живых клеток целлюлолитических бактерий-22 и пропионовокислых бактерий-15,адсорбированных на бентоните (А.с. 1684972. Кормовая добавка бентобак //Гаврилова Н.Н.,Пятаева М.И., Илялетдинов А.Н. и др., 1991). Задача изобретения повышение антагонистической активности кормовой добавки в отношении возбудителей кишечных инфекций,содержания в ней клеток пробиотических бактерий и витамина В 12. Поставленная задача достигается тем, что в состав кормовой добавки взамен штамма-15 вводится штамм-С-8 применяющийся в составе закваски Казбиосил для силосования растительных кормов (Патент 24801 Закваска Казбиосил для силосования растительных кормов(варианты)//Саданов А.К., Айткельдиева С.А.,Гаврилова Н.Н., Ратникова И.А., опубл. 2011 г) и превосходящий первый по антимикробной активности в отношении возбудителей кишечных инфекций, по биосинтезу витамина В 12 и стимуляции роста целлюлолитических бактерий. Штамм 8 ИМВ представляет собой палочкизакругленными концами, размером 0,5-1,52,0 мкм, грамположительные,неподвижные,аспорогенные. Однако морфология и размеры клеток меняются в зависимости от условий культивирования и состава питательной среды. Клетки могут быть кокковидными при росте в среде без кобальта, при 4,5-5,0, а также при температуре 35-37 С(оптимальные температура роста 28-30 С,- 6,87,0). Сбраживает лактозу, сахарозу, мальтозу,глюкозу, арабинозу, манит, использует молочную,винную, хинную кислоты, глицерин. Усваивает различные источники азота, начиная от сложных их форм и кончая солями аммония. Продуцирует витамин В 12. Обладает каталазной активностью. Является факультативным анаэробом, но лучше растет в анаэробных условиях. Штамм .С-8 ИМВ депонирован в коллекции Института микробиологии и вирусологии под номером ИМиВ В-78. По результатам испытаний установлено, что штамм . -С-8 обладает более высокой антагонистической активностью в отношении возбудителей кишечных инфекций по сравнению спротивопоставляемым, что будет способствовать повышению профилактического эффекта препарата. Введение предлагаемого штамма в состав кормовой добавки позволяет также повысить в ней содержание пробиотических микроорганизмов и витамина В 12. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами. Пример 1. Исходный штамм . -15 и предлагаемый штамм Р. -С-8 выращивают на питательной среде,используемой для совместного культивирования пропионовокислых и целлюлолитических бактерий следующего состава г/л 1. Кукурузный экстракт ГОСТ 18206 -15,0(по сухому веществу) 2. Крахмал - 10,0 3. Глюкоза - 10,0 4. 2 НР 4 - 1,0 5. С - 0,5 6. 472 - 0,5 7. (4)24 - 2,5 8. о 2 - 0,03 9. Вода - остальное,6,8 - 7,0. Культивирование производят в термостате при температуре 28-30 С в течение 18-20 ч., затем в жидких культурах определяют титр бактерий путем высева из соответствующих разведений в твердую питательную среду приведенного выше состава и содержание витамина В 12 - методом диффузии в агар с использованием витамин зависимого штаммас 113-3. Результаты, представленные в таблице 1,свидетельствуют, что штамм .С-8 превосходит штамм . -15 по накоплению бактериальных клеток в 3,0 раза, витамина В 12 - в 2 раза. Таблица 1 Сравнительная характеристика продуктивности штаммов пропионовокислых бактерий Пример 2. Штаммы перечисленных выше пропионовокислых бактерий выращивают аналогично примеру 1. Через 24 ч культивирования в них определяют антагонистическую активность методом диффузии в агар по отношению к 2 ак видно из представленной таблицы 2, Р. 8 обладает более высокой антагонистической активностью в отношении испытанных тест-культур, в том числе к возбудителям кишечных инфекций, по сравнению со штаммом . -15. Таблица 2 Антагонистическая активность исследуемых штаммов пропионовокислых бактерий Штаммы Зоны подавления роста тест-культур, мм 1 2 3 4 5 6 7 Исходный 21,0 21,0 19,0 20,0 10,0 10,0 10,0 С-8 26,0 30,0 29,0 28,0 26,0 18,0 12,0 Примечание 1- Е. , 2 - . , 3 - .9, 4 - .3316, 5 -444, 6 -, 7 - .Пример 3. Получение сухой кормовой добавки бентобак. При наработке кормовой добавки используют штаммы бактерий С.(ЦЛБ)-22, .(ПКБ)-С-8 или .(ПКБ)-15. Маточную расплодку штаммов выращивают на питательной среде, описанной в примере 1, в колбах в термостате при температуре 28-30 С в течение 1820 ч. Засев колб с 300 мл питательной среды культурами целлюлолитических и пропионовокислых бактерий производят со скошенной агаризованной среды. Посевной материал бактерий выращивают в колбах в количестве 1,5 л в течение 20 ч на питательной среде описанного выше состава. Наработку культуральной жидкости целлюлолитических и пропионовокислых бактерий производят в ферментере вместимостью 30 л без аэрации при избыточном давлении 0,3-0,5 атм. в питательной среде для посевного материала. Питательную среду готовят в ферментере и стерилизуют при 121 С в течение 30 минут. После охлаждения до 28 С ее засевают пятью процентами посевного материала целлюлолитических бактерий и пятью процентами одного из штаммов пропионовокислых бактерий. Культивирование бактерий осуществляют при следующем режиме Температура культивирования 28-30 С Избыточное давление в аппарате 0,3-0,5 атм. Время культивирования 18-24 час В культуральную жидкость, полученную после ферментации, добавляют растворенный в питьевой воде бентонит (3) и хлористый кальций (0,1),смесь хорошо перемешивают и оставляют в прохладном месте на 3 ч. За это время биомасса адсорбируется на бентоните и осаждается. Надосадочную жидкость декантируют,а оставшийся осадок центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин. В отцентрифугированную биомассу бактерий добавляют защитные компоненты глюкоза 10,уксуснокислый натрий 0,5, лимоннокислый натрий 0,5 и хорошо перемешивают на механической мешалке. Затем бактериальную пасту высушивают сублимационным способом при следующем режиме замораживание продукта при 40 С в течение 6 часов температура плит - 10 С температура досушивания продукта 20-25 С разряжение 45 мА продолжительность сушки 2024 часа. В сухих кормовых добавках определяют содержание жизнеспособных клеток, витамина В 12 аналогично примеру 1 и целлюлолитическую активность (Сх) чашечным методом по зонам гидролиза -КМЦ. Результаты по содержанию титров бактерий представлены в таблице 3. Таблица 3 Показатели качества сухих кормовых добавок, полученных сублимационным способом Титр сухого препарата, млн КОЕ/г Штаммы Как видно из представленной таблицы 3,содержание бактериальных клеток в жидкой культуре, бактериальной пасте и сухой кормовой добавке выше в вариантах со штаммом . С-8, при этом предложенный штамм оказывает стимулирующее действие на рост целлюлолитических бактерий. По содержанию витамина В 12 и целлюлолитической активности кормовые добавки со штаммом . 8 также превосходят противопоставляемый вариант (таблица 4). Таблица 4 Целлюлолитическая активность пастообразных и сухих кормовых добавок и содержание в них витамина В 12 Содержание витамина В 12, мкг/г в препаратах пастообразный сухой 44 43 38 41 Таким образом, кормовая добавка бентобак со штаммом . -С-8, введенным взамен. -15, превосходит прототип по антагонистической активности в отношении возбудителей кишечных инфекций, содержанию в ней пробиотических бактерий и витамина В 12. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения кормовой добавки,содержащий микробную массу живых клеток целлюлолитических бактерий-22 и пропионовокислых бактерий,адсорбированных на бентоните, отличающийся тем, что в качестве пропионовокислых бактерий используют штамм 8.