Вакцина живая сухая против чумы верблюдов

(51) 61 39/10 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) 61 31/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой живую вакцину против чумы верблюдов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении,высокоиммуногенной, стабильной, не реактогенной вакцины, создающий напряженный иммунитет против чумы верблюдов. Вакцина живая сухая против чумы верблюдов включающая антиген штамма бактерийи среду высушивания, она содержит антиген штамма бактерийВ- 48- КА и дополнительно в качестве среды высушивания содержит глютаминово-кислый натрий,тиомочевину, желатин, пептон и сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штамма бактерийВ- 48- КА(72) Атшабар Баыт Бахиялы Тугамбаев Тлеули Идрисович Ковалева Галина Геннадьевна Окулова Ирина Владимировна Пономарева Татьяна Сергеевна Сущих Владислава Юрьевна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Казахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций им. Масгута Айкимбаева Комитета по защите прав потребителей Министерства национальной экономики Республики Казахстан(56)19902 4, 15.08.2008 Абзаева Н.В. Повышение жизнеспособностив биомассе вакцины Автореф. дисс.канд. биолог. наук. Ставрополь, 2010. 9 с. Мека-Меченко Т.В. Микробиологический и молекулярно-генетический мониторинг возбудителя чумы из природных очагов разного типаАвтореф. дисс.докт. мед. наук. Алматы, 2010. 36 с.2013149327 1, 13.06.2013(54) ВАКЦИНА ЖИВАЯ СУХАЯ ПРОТИВ ЧУМЫ ВЕРБЛЮДОВ Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и представляет собой живую сухую вакцину против чумы верблюдов. Известна вакцина живая сухая против чумы верблюдов, включающая антиген из штамма бактериии среду высушивания Руководство по изучению штаммов чумного микроба, Некрасова Л.Е., Темиралиева Г.А., МекаМеченко Т.В. и др.- Алматы, 2001. - 39 с Недостатком данной вакцины является то, что она имеет не высокий выход концентрации культуры бактерий, необходимой для более эффективной иммунологической активности препарата. Задачей изобретения является разработка вакцины живой сухой против чумы верблюдов,которая создавала бы напряженный иммунитет при введении ее в организм животного, имела более длительный срок хранения и не обладала бы реактогенными свойствами. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении,высокоиммуногенной, стабильной, не реактогенной вакцины, создающий напряженный иммунитет против чумы верблюдов. Вакцина живая сухая против чумы верблюдов,включающая антиген штамма бактерийи среду высушивания, она содержит антиген штамма бактерийВ- 48-КА и дополнительно в качестве среды высушивания содержит глютаминово-кислый натрий,тиомочевину, желатин, пептон и сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штамма бактерийВ- 48- КА(20,0-25,0 млрд. м. т. в см 3) 84,0 - 90,0 желатин 0,8-1,2 глютаминово-кислый натрий 1,0-1,7 тиомочевина 0,3-0,7 пептон 0,3-0,7 сахароза остальное Штамм культуры бактерийВ- 48 КА депонирован в музее живых культур РГКП Казахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций имени Масгута Айкимбаева(КНЦКЗИ). Идентификацию штамма культуры бактерийВ- 48- КА входящего в вакцину,проводят по основным биологическим свойствам(морфологическим,культуральным,биохимическим), согласно определителю бактерий/, 2005., . ,, 1. ,2.. 587 - 588). Штамм характеризуется следующими признаками. Штамм бактерийВ- 48- КА Морфологические свойства. Штамм бактерий В 48 КА обладает морфологическими признаками характерными для 2 возбудителя чумы верблюдов.В- 48-КА представляют собой полиморфные грамотрицательные овоидные палочки. В мазках из бульонных культур имеют биполярную окраску. Культуральные свойства. Штамм бактерийВ- 48 - КА растет на плотных и жидких питательных средах (агар, бульон Хоттингера) при температуре 28-30 С. На пластинках с агаром колонии мелкие, матовые в-форме с бугристым, зернистым центром,окруженным нежной периферической кружевной зоной. Рост на бульоне прозрачный, на дне образует хлопьевидный осадок. Ферментирует глюкозу, мальтозу, галактозу,маннит с образованием кислоты без газа, не ферментирует глицерин, рамнозу и лактозу. Спорообразование. Штамм бактерий бактерийВ- 48 - КА спор не образует. Образует капсулу. Антигенные свойства. Штамм бактерийВ- 48- КА дает положительный результат в РНГА и РНАт с эритроцитарными диагностикумами.В- 48- КА авирулентин для лабораторных животных. Иммуногенность. Морские свинки после введения антигена, содержащего 20 000 м.к./мл штамма бактерийВ- 48 -КА в дозе 0,5 см 3 в 80-90 случаях приобретают устойчивость к заражению 24-часовой вирулентной культурой 231, введенной в дозе 0,5 см 3. Антиген, полученный из штамма бактерийВ- 48- КА при подкожном введении в дозе 2,0 см 3 верблюдам обуславливает напряженный иммунитет у 80-85, с образованием агглютининов в титрах 132-1128. Реверсабельность. Штамм бактерийВ- 48- КА по основным культуральным,морфологическим и биологическим свойствам не отличается от музейных культур. Многократные пересевы не изменяют морфологических и культуральных свойств. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма бактерийВ- 48- КА стабильно сохраняются на агаре Хоттингера в течение 30 суток. 4-5 разовые пассажи культуры на питательных средах не изменяют его свойств. Лиофильно высушенные культуры сохраняют свои исходные свойства не менее 2-х лет. Штамм бактерийВ- 48-КА отобран по интенсивности роста на бактериологических средах и способности накапливать большое количество бактериальной массы. Изобретение иллюстрируется следующими примерами Полученную вакцину живую сухую вводили однократно, подкожно в область средней трети шеи верблюдам 1- 2 летнего возраста в дозе 1,0 и 2,0 см 3,соответственно. Наблюдение за опытными животными вели в течение 12 месяцев. Профилактическую эффективность вакцины проверяли в эпизоотически неблагополучных по чуме хозяйствах Республики Казахстан. В эксперименте использовали 4 группы животных по 50 голов (старше 2 летнего возраста) в каждой, в которых 3 опытные группы и одна контрольная. Пример 1. Вакцину живую сухую против чумы верблюдов используют подкожно однократно при следующих соотношениях компонентов антиген из штамма бактерийВ- 48- КА(20,0-25,0 млрд. м. т. в см 3) 84,0 желатин 0,8 глютаминово-кислый натрий 1,0 тиомочевина 0,3 пептон 0,3 сахароза остальное В опытной группе животных 50 голов через 12 месяцев заболело 3 головы (6,0). Таким образом,профилактическая эффективность при таком соотношении компонентов составляет 94,0, а продолжительность иммунитета 12 месяцев. Пример 2. Вакцину живую сухую против чумы верблюдов используют подкожно однократно при следующих соотношениях компонентов антиген из штамма бактерийВ- 48- КА(20,0-25,0 млрд. м. т. в см 3) 87,0 желатин 1,0 глютаминово-кислый натрий 1,5 тиомочевина 0,5 пептон 0,5 сахароза остальное В опытной группе животных 50 голов через 12 месяцев заболело 2 головы (4,0). Таким образом,профилактическая эффективность при таком соотношении компонентов составляет 96,0, а продолжительность иммунитета 12 месяцев. Пример 3. Вакцину живую сухую против чумы верблюдов используют подкожно однократно при следующих соотношениях компонентов антиген из штамма бактерийВ- 48- КА(20,0-25,0 млрд. м. т. в см 3) 90,0 желатин 1,2 глютаминово-кислый натрий 1,7 тиомочевина 0,7 пептон 0,7 сахароза остальное В третьей опытной группе животных профилактическая эффективность вакцины была выше и составила 98,0 (1 верблюд из 50 опытных) и продолжительность иммунитета 12 месяцев. В контрольной группе животных (вакцина не применялась) заболело 7 голов (14,0), причем течение патологического процесса было тяжелее,чем при заболевании в опытной группе. Таким образом,наиболее эффективные результаты иммунизации были достигнуты в примерах 2 и 3, а соотношение компонентов в примере 2 является наиболее оптимальным для серийного выпуска предлагаемой вакцины. Пример 4. Питательные среды для культивирования и концентрирования микроорганизма. Для культивирования бактерийВ- 48- КА используют агар Хоттингера,включающий - мясной и казеиновый гидролизаты,хлористый натрий, аммоний молибденовокислый,сульфит натрия, и агар бактериологический и бульон Хоттингера, включающий мясной и казеиновый гидролизаты, и, хлористый натрий. Для получения антигенов для вакцины пробирки с агаром Хоттигера засеянные культурой бактерийВ- 48- КА помещают в термостат с температурой 28 С и выдерживают 48 часов. После проверки чистоты роста путем микроскопии мазков,культуры - каждую раздельно, высевают в матрацы объемом 2,0 л в бульон Хоттингера. Для засева одного матраца используют весь объем 48 часовой культуры, выращенной в двух пробирках. Посевы выдерживают при 28 С 48 часов и вновь проверяют на чистоту и типичность морфологии. Пример 5. Изготовление вакцины сухой живой против чумы верблюдов. Полученные культуры используют для засева в бутыли с бульоном Хоттингера, которые затем помещают на 2 суток в термостат при 28 С. Для проверки чистоты и типичности морфологии микробных клеток, выборочно делают мазки и микроскопируют. Чистую культуру с типичной морфологией микроорганизмов в концентрации 2-2,5 млрд. см 3 и с 7,1-7,3 пересевают в аппарат для культивирования микроорганизмов (АКМ-Ш). Выращивание микробной массы в аппарате для культивирования микроорганизмов проводят на агаре Хоттингера при температуре 28 С 46-48 часов. Через 2 суток полученную бактериальную массу смывают защитной средой и сливают в стерильные бутыли. Готовую вакцинную взвесь проверяют на чистоту и типичность морфологии, концентрация микроорганизмов должна быть не ниже 50 млрд. м.к. в 1 мл. Полученную вакцинную взвесь расфасовывают по 2,0 мл в ампулы, которые накрывают стерильными салфетками и укладывают в кассеты. Кассеты, заполненные ампулами, сразу помещают в низкотемпературные холодильники -30-50 С и замораживают не менее 5 часов. Кассеты с ампулами из холодильника загружают в сушильный котел лиофильных камер на 2436 часов. После полного высушивания лиофильные камеры отключают, открывают и выгружают вакцину. Герметизацию ампул с вакциной проводят методом опая под вакуумом 10-20 Па с помощью горелок. Пример 6. Контроль вакцины живой сухой против чумы верблюдов. Физико-химические и биологические свойства Внешний вид, цвет. Пористая масса сероватобелого цвета. Наличие посторонних примесей. Вакцина не должна содержать посторонних примесей, плесени,3 не разбивающихся конгломератов, а также трещин на ампулах. Герметичность ампул (наличие вакуума). Голубое или розово-голубое свечение,сопровождающееся потрескиванием при проверке аппаратом типа дАрсонваль. Показатель(водородных ионов) от 7,0 до 7,4. Потеря в массе при высушивании (массовая доля влаги). Не более 3 Время растворения. При добавлении 1,8 мл 0,9 раствора хлорида натрия в объеме содержимое ампулы должно раствориться в течение 3 минут. Концентрация живых микробных клеток. Концентрация от 21010 до 61010 млрд/см 3 Стерильность (контаминация бактериальной и грибковой микрофлорой). В посевах вакцины на питательные среды(тиогликолевую,агар Хоттингера, бульон Хоттингера) не должно быть роста(посторонней микрофлоры) аэробной,анаэробной и грибковой микрофлоры в течение 14 сут инкубирования при температуре (222)С,(331)С и (371)С. Специфическая активность (процент живых микробных клеток). Не менее 25. Колебания результатов определения в отдельных ампулах не должны превышать 20 от средней арифметической величины. Безвредность. При подкожном введении морской свинке массой (27525) г 15109 микробных клеток в 1 мл по отраслевому стандарту образца (ОСО) мутности (ОСО 42-28-59-85-П) 10 единиц, вакцина не должна вызывать потери массы к 6-м суткам после введения больше, чем на 20, вызывать видимых патологоанатомических изменений в легких,свойственных специфическому инфекционному процессу (кровоизлияний, очагов воспаления, гранулем, абсцессов), в посевах крови и легких не должно быть роста чумного микроба. В месте введения допускается развитие кровоизлияния и инфильтрата подкожной клетчатки, переходящих в некроз. Во внутренних органах (селезенка и печень) допустимо развитие ограниченной узелковой реакции. Иммуногенная активность. ЕД 50 не должна превышать для морских свинок 1104 живых микробных клеток. Длительность иммунитета. Не менее 12 месяцев. Термостабильность. При температуре хранения вакцины (371)С должна быть не менее 4 суток. Срок годности при 2-8 С. Срок годности препарата 24 месяца. Апробация вакцины живой сухой против чумы верблюдов в ТОО Даулет Бекет, Илийского района на 1900 верблюдах и в КХ Береке,Алакольского района на 38 верблюдах неблагополучных по данной инфекции показала, что препарат является безвредным, ареактогенными и высокоиммуногенным препаратом профилактическая эффективность составляет 96,0 - 98,5. Применение вакцины живой сухой против чумы верблюдов позволит профилактировать данную инфекцию у животных и значительно сократить материальные и трудовые затраты животноводческих хозяйств. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Вакцина живая сухая против чумы верблюдов,включающая антиген штамма бактерийи среду высушивания, отличающаяся тем,что она содержит антиген штамма бактерийВ- 48- КА и дополнительно в качестве среды высушивания содержит глютаминово-кислый натрий, тиомочевину, желатин, пептон и сахарозу при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штамма бактерийВ- 48- КА