Штамм Picornavirus aphtae AV-0265 вируса ящура типа А для изготовления диагностических и вакцинных препаратов

Номер инновационного патента: 30408

Опубликовано: 15.10.2015

Авторы: Абишов Абдикалык Абдижаппарович, Хайруллаева Куралай Амангельдиевна

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

РЕФЕРАТ
ШТАММ AV-0265 ВИРУСА ЯЩУРА ТИПА А ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИННЫХ И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ
ПРЕПАРАТОВ
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении диагностических и профилактических биопрепаратов против ящура животных, обуслов­ленного вирусом ящура типа А.
Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении клона штамма вируса ящура типа А, пригодный для изготовления инактивированной вакцины, типоспецифического антигена и сыворотки для серологической диагностики ящура животных.
Штамм AV-0265 вируса ящура типа А КазНИВИ «АК-2000-12» депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО «Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт» (КазНИВИ), используемый для изготовления вакцинных и
диагностических препаратов.

Текст

Смотреть все

(51) 61 35/76 (2006.01) 12 7/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ изготовлении диагностических и профилактических биопрепаратов против ящура животных, обусловленного вирусом ящура типа А. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении клона штамма вируса ящура типа А, пригодный для изготовления инактивированной вакцины,типоспецифического антигена и сыворотки для серологической диагностики ящура животных. Штамм -0265 вируса ящура типа А КазНИВИ АК-2000-12 депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт (КазНИВИ), используемый для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ШТАММ 0265 ВИРУСА ЯЩУРА ТИПА А ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении диагностических и профилактических биопрепаратов против ящура животных, обусловленного вирусом ящура типа А. Известен вирус ящура типа А используемой для изготовления инактивированной вакцины против ящура А.А.Бойко,Ф.С.Шуляк Иммунобиологические свойства вируса // в кн. Ящур - М. Колос, 1971, с.23. Недостатком указанного штамма вируса является несоответствие по антигенной активности с современными циркулирующими в природе возбудителями ящура типа О и обладает слабой иммуногенной активностью. Задачей изобретения является получение клона штамма вируса ящура типа А с высокой антигенной и биологической активностью, пригодный для изготовления вакцинных и диагностических биопрепаратов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении клона штамма вируса ящура типа А, пригодной для изготовления инактивированной вакцины,типоспецифического антигена и сыворотки для серологической диагностики ящура животных. Клон штамма вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12, используемый для получения биологической массы репродуцируют в перевиваемой линии культуры клеток ВНК-21/13 и клонируют методом предельного разведения. Штамм -0267 вируса ящура типа А депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ), используемый для изготовления вакцинных и диагностических препаратов. Штамм вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12 Штамм вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12 получен из полевого изолята вируса ящура типа А, путем размножения его в организме 1-2 суточных крольчат с последующей адаптацией к перевиваемой линии культуры клеток ВНК-21/13 и обозначен как штамм АК-2000-12. Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Штамм вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12 обладает высокой репродуктивной активностью на культуре клеток ВНК-21/13,антигенной и иммуногенной активностью. Повышает эффективность профилактических препаратов и диагностики ящура животных. Штамм используют для изготовления вакцинных и диагностических биопрепаратов. Состав среды и условия культивирования Среда Игла-МЕМ, содержащий 5 сыворотки крови крупного рогатого скота. Морфологические признаки. Вирус ящура типа А относится к мелким вирусам парнокопытных животных. Размер вириона 22-25 нм, имеет сферическую (икосаэдрический) форму, состоит из одноцепочечной линейной молекулы РНК,2 заключенную в белковую оболочку, состоящей главным образом из четырех структурных белков Р 1 Р 2, Р 3, 4. Вирус содержит 31,5 РНК и 68,5 протеинов. Молекула белка состоит из 5 полипептидных цепей, который содержит 18 аминокислот. Штамм -0265 КазНИВИ АК-2000-12 вируса ящура типа А обладает морфологическими признаками, свойственными для возбудителя ящура рода афтовирусов семейства пикорновирусов. Культуральные свойства. Штамм вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12 репродуцируется и накапливается в перевиваемой линии клеток ВНК-21/13 в титре 109,50 ТЦД 50/см 3. В указанной перевиваемой культуре клеток штамм-0265 КазНИВИ А-2003-12 вируса ящура типа А активно размножается и начало цитопатического действия отмечается через 8-9 часов после инфицирования, поражая к 20-30 часам около 8090 монослоя клеток. Штамм вируса на уровне 5-7 пассажей в культуре клеток ВНК-21/13 характеризуется высокой репродуктивной активностью. Повышение инфекционной и комплементсвязывающей активности достигнуто в результате клонирования исходного культурального штамма,путем предельного разведения. Биологическая активность клонированных вариантов штамма перевиваемой линии клеток ВНК-21/13 достигает до 9,50 ТЦД 50/см 3. Антигенные свойства. Штамм вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12 в организме зараженных животных (белые мыши, морские свинки, кролики, крупный рогатый скот) вызывает образование вируснейтрализующих,комплементсвязывающих и прецепитирующих антител. Патогенные свойства. Штамм вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12 у инфицированных мышат-сосунов и крольчат вызывает развитие типичных клинических признаков болезни ящура (парезы и параличи конечностей,мышц туловищ и шеи),заканчивающиеся гибелью животных в течение 2026 ч после заражения. В организме зараженных лабораторных животных вирус накапливается в титрах 108,5-109,3 ЛД 50/0,1 мл (летальная мышиная доза,вызывающих 50 гибель мышат-сосунов). Иммуногенная свойства. Штамм вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12 репродуцированный в культуре клеток ВНК-21/13,инактивированный димером этиленимина и добавленный масляного адъюванта при подкожном введении крупному рогатому скоту в дозе 3 мл стимулирует образования напряженного противоящурного иммунитета. Все иммунизированные животные при контрольном заражении оставались клинически здоровыми в течение 10 суток после их инфицирования вирулентным вирусом ящура типа А. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12, 30408 при культивировании в культуре клеток ВНК-21/13 сохраняются в течение 12 пассажей (срок наблюдения). Сохраняемость. Штамм вируса ящура типа-0265 КазНИВИ АК-2000-12 в виде культуральной суспензии не снижает биологическую активность при температуре 41 С в течение 40 сут, при минус 30 С - 18 мес, а в виде фарша из тушек крольчат с консервантом(глицеринфизиологический раствор аа) при 7,5 в течение 6 месяцев при температуре 41 С,36 мес - при минус 40 С. Пример 1. Для изготовления инактивированной вакцины против ящура вирус из штамма -0265 КазНИВИ АК-2000-12 типа А репродуцирует суспензионным способом на перевиваемой линии клеток ВНК-21/13 в питательной среде Игла-МЕМ,после сбора биомассы, вирус инактивируют раствором димера этиленимина в течение 20 ч и смешивают с масляным адъювантом. Полученный таким образом препарат применяют в качестве противоящурной вакцины для иммунизации животных. Пример 2. Штаммом вируса ящура типа 0265 КазНИВИ АК-2000-12 инфицируют культуру клеток ВНК-21/13 в дозе 0,001 ТЦДКЛ. В период максимального развития цитопатических действий ферментер с пораженными клетками останавливают,охлаждают до комнатной температуры, сливают в сосуды и замораживают при минус 20 С. В дальнейшем вирусная суспензия используется для изготовления антигена. Для этого вирусную суспензию размораживают при температуре 22 С и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильную посуду и инактивируют раствором димера этиленимина при температуре 22 С в течение 24 часов, затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин. В готовый антиген добавляют стабилизаторы,тщательно перемешивают, расфасовывают в стерильные ампулы по 1 мл, подвергают лиофилизации и получают целевой продукт. Пример 3. Для получения типоспецифической гипериммунной сыворотки к вирусу ящура животных, штаммом -0265 КазНИВИ АК- 200012 инфицируют культуру клеток ВНК-21/13 в дозе 0,001 ТЦДКЛ. Через 30-36 часов после инфицирования и при поражении вирусом 70-80 монослоя клеток сосуды замораживают при температуре минус 20 С, затем размораживают при температуре 22 С и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин. Вируссодержащую суспензию инактивируют раствором димера этиленимина при температуре 22 С в течение 24 часов и добавляют масляный адъювант, далее используют в качестве антигена для иммунизации и гипериммунизации животных. Их иммунизируют четырехкратно в дозе 2 мл внутримышечно с интервалом в 7 дней. Через 14 дней после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови с последующим получением сыворотки. Полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при температуре 56 С в течение 30 мин. После чего разливают в стерильные ампулы или флаконы по 1 мл, подвергают сублимационной сушке и получают готовый продукт. Использование штамма -0265 вируса ящура типа А позволят повысит эффективность профилактических и диагностических препаратов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штаммвируса ящура типа А,депонирован в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт под номером А-2000-12,используемый для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.

МПК / Метки

МПК: C12N 7/00, A61K 35/76

Метки: вируса, ящура, picornavirus, диагностических, изготовления, aphtae, av-0265, вакцинных, препаратов, штамм, типа

Код ссылки

<a href="https://kz.patents.su/3-ip30408-shtamm-picornavirus-aphtae-av-0265-virusa-yashhura-tipa-a-dlya-izgotovleniya-diagnosticheskih-i-vakcinnyh-preparatov.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Штамм Picornavirus aphtae AV-0265 вируса ящура типа А для изготовления диагностических и вакцинных препаратов</a>

Похожие патенты