Штамм picornavirus aphtae av-0267 вируса ящура типа о для изготовления диагностических и вакцинных препаратов

(51) 12 7/00 (2006.01) 61 39/135 (2006.01) МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ изготовлении препаратов диагностики и профилактики против ящура парнокопытных животных, обусловленного вирусом ящура типа О. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении биологической массы вируса ящура типа О с высокой биологической активностью, пригодной для изготовления инактивированной вакцины и антигена, обладающие высокой иммуногенной и диагностической эффективностью. Штамм -0267 вируса ящура типа О депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ), используемый для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Бойко А.А.,Шуляк Ф.С. Иммунобиологические свойства вируса Ящур-М,Колос, 1971, с.19-23(54) ШТАММ 0267 ВИРУСА ЯЩУРА ТИПА О ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано при Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении препаратов диагностики и профилактики против ящура парнокопытных животных, обусловленного вирусом ящура типа О. Известен штамм вируса ящура типа О,используемый для изготовления инактивированной вакцины против ящура А.А. Бойко, Ф.С. Шуляк Иммунобиологические свойства вируса // в кн. Ящур - М. Колос, 1971, с.19-23. Недостатком указанного штамма вируса является несоответствие по антигенной активности с современными циркулирующими в природе возбудителями ящура типа О и обладает слабой иммуногенной активностью. Задачей изобретения является повышение иммуногенной, антигенной и биологической активности и пригодности для изготовления вакцинных и диагностических препаратов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении биологической массы вируса ящура типа О с высокой биологической,иммуногенной и антигенной активностью,пригодной для изготовления инактивированной вакцины и антигена, обладающие высокой протективной и диагностической эффективностью. Штамм -0267 вируса ящура типа О депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ), используемый для изготовления вакцинных и диагностических препаратов. Штамм вируса ящура типа О -0267 КазНИВИ Д-05-12 Штамм вируса ящура типа О -0267 КазНИВИ Д-05-12 получен путем клонирования исходного штамма методом предельного разведения с последующей репродукцией на перевиваемой линии клеток ВНК-21/13 и обозначен как штамм вируса ящура типа О -0267 КазНИВИ Д-05-12. Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Штамм вируса ящура типа О -0267 КазНИВИ Д-05-12 обладает высокой репродуктивной активностью на культуре клеток ВНК- 21/13,антигенной и иммуногенной активностью. Повышает эффективность профилактических препаратов и диагностики ящура животных. Штамм используют для изготовления вакцинных и диагностических биопрепаратов. Состав среды и условия культивирования Среда Игла-МЕМ, содержащий 5 сыворотки крови крупного рогатого скота. Морфологические признаки. Вирус ящура типа О относится к мелким вирусам парнокопытных животных. Размер вириона 22-25 нм, имеет сферическую (икосаэдрический) форму, состоит из одноцепочечной линейной молекулы РНК,заключенную в белковую оболочку, состоящей главным образом из четырех структурных белков 1, 2, 3, 4. Вирус содержит 31,5 РНК и 2 68,5 протеинов. Молекула белка состоит из 5 полипептидных цепей, который содержит 18 аминокислот. Штамм Д-05-12 вируса ящура типа О обладает морфологическими признаками, свойственными для возбудителя ящура рода афтовирусов семейства пикорновирусов. Культуральные свойства. Штамм вируса ящура типа О-0267 КазНИВИ Д-05-12 репродуцируется и накапливается в перевиваемой линии клеток ВНК-21/13 в титре 109,00 ТЦД 50/см 3. В указанной перевиваемой культуре клеток штамм Д-05-12 вируса ящура типа О активно размножается и начало цитопатических изменений отмечается через 8-10 часов после инфицирования,поражая к 32-36 часам около 70- 80 клеток монослоя. Штамм вируса на уровне 10-12 пассажей в культуре клеток ВНК-21/13 характеризуется высокой репродуктивной активностью. Повышение инфекционной и комплементсвязывающей активности достигнуто в результате клонирования исходного культурального штамма,путем предельного разведения. Биологическая активность клонированных вариантов штамма на культуре клеток ВНК-21/13 9,00 ТЦД 50/см 3. Антигенные свойства. Штамм вируса ящура типа О -0267 КазНИВИ Д-05-12 в организме зараженных животных (белые мыши, морские свинки,кролики,крупный рогатый скот) вызывает образование вируснейтрализующих,комплементсвязывающих и прецепитирующих антител. Патогенные свойства. Штамм вируса ящура типа О -0267 КазНИВИ Д-05-12 у инфицированных мышат-сосунов и крольчат вызывает развитие клинических признаков ящура (парезы и параличи конечностей,мышц туловищ и шеи),заканчивающиеся гибелью животных в течение 2026 ч после заражения. В организме зараженных лабораторных животных вирус накапливается в титрах 108,0-10900 ЛД 50/0,1 мл (летальная мышиная доза, вызывающих 50 гибель мышат-сосунов). Иммуногенная свойства. Штамм вируса ящура типа О-0267 КазНИВИ Д-05-12 репродуцированный в культуре клеток ВНК-21/13,инактивированный димером этиленимина и добавленный масляного адъюванта при подкожном введении крупному рогатому скоту в дозе 3 мл стимулирует образования напряженного иммунитета против возбудителя ящура. Все иммунизированные животные при контрольном заражении оставались клинически здоровыми в течение 12 суток после их инфицирования вирулентным вирусом ящура типа О. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма вируса ящура типа О -0267 КазНИВИ Д-05-12, при культивировании в культуре клеток ВНК-21/13 сохраняются в течение 17 пассажей(срок наблюдения). Сохраняемость. Штамм вируса ящура типа О суспензии не снижает биологическую активность при температуре 41 С в течение 40 сут, при минус 30 С - 20 мес, а в виде фарша из тушек крольчат с консервантом (глицеринфизиологический раствор аа) при 7,5 в течение 6 месяцев при температуре 41 С, 36 мес - при минус 40 С. Пример 1. Для изготовления инактивированной вакцины против ящура вирус из штамма вируса ящура типа О -0267 КазНИВИ Д-05-12 репродуцирует суспензионным способом на перевиваемой линии клеток ВНК-21/13 в питательной среде Игла-МЕМ, после сбора биомассы, вирус инактивируют раствором димера этиленимина в течение 22 ч и смешивают с масляным адъювантом. Полученный таким образом препарат применяют в качестве противоящурной вакцины для иммунизации животных. Пример 2. Штаммом вируса ящура типа О 0267 КазНИВИ Д- 05-12 инфицируют культуру клеток ВНК-21/13 в дозе 0,001 ТЦДкл. В период максимального развития цитопатических действий ферментер с пораженными клетками останавливают,охлаждают до комнатной температуры, сливают в сосуды и замораживают при минус 20 С. В дальнейшем вирусная суспензия используется для изготовления антигена. Для этого вирусную суспензию размораживают при температуре 22 С и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильную посуду и инактивируют раствором димера этиленимина при температуре 22 С в течение 22 часов, затем центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин. В антигенную суспензию добавляют стабилизаторы,тщательно перемешивают,расфасовывают в стерильные ампулы или флаконы по 1 мл, подвергают лиофилизации и получают целевой продукт. Пример 3. Для получения типоспецифической гипериммунной сыворотки к вирусу ящура животных, штаммом вируса ящура типа О - 0267 КазНИВИ Д-05-12 инфицируют культуру клеток ВНК-21/13 в дозе 0,001 ТЦДкл. Через 48 часов после инфицирования и при поражении вирусом 70-80 клеток монослоя сосуды замораживают при температуре минус 20 С, затем размораживают при температуре 22 С и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин. Вируссодержащую суспензию инактивируют раствором димера этиленимина при температуре 22 С в течение 22 часов и добавляют масляный адъювант, далее используют в качестве антигена для иммунизации и гипериммунизации животных. Их иммунизируют четырехкратно в дозе 2 мл внутримышечно с интервалом в 7 дней. Через 14 дней после последней инъекции антигена, осуществляют забор крови с последующим получением сыворотки. Полученную сыворотку инактивируют в водяной бане при температуре 56 С в течение 30 мин. После чего разливают в стерильные ампулы или флаконы по 1 мл, подвергают сублимационной сушке и получают готовый продукт. Использование штамма -0267 вируса ящура типа О позволят повысит эффективность профилактических и диагностических препаратов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм-0267 вируса ящура типа О, депонирован в лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно исследовательский ветеринарный институт под номером Д-05-12,используемый для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.