Способ изготовления вакцины из бруцелл

(51) 61 39/10 (2006.01) 61 43/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении профилактической активности препарата. Способ изготовления вакцины из бруцелл,включающий выращивание бруцелл на эритритагаре при температуре 37,5 С, смыв бактериальный массы физиологическим раствором поваренной соли и приготовление микробной взвеси с последующей лиофилизацией, в бактериальную взвесь живых бруцелл в конечной концентрации перед лиофилизацией добавляют ультразвуковой лизат-1 В-0268 в количественном соотношении лизата и полученной суспензии 12,затем бактериальную массу разводят физиологическим раствором до концентрации 2109 КОЕ/мл, после чего лиофилизируют и используют в качестве целевого продукта.(72) Иванов Николай Петрович Тен Виктор Борисович Арысбекова Алтынай Танибергеновна Оспанов Ержан Калиолдинович Бакиева Флюр Альбертовна Саримбекова Сауле Нургалиевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ИЗ БРУЦЕЛЛ(57) Изобретение относится к области ветеринарии,в частности, к изготовлению биологических препаратов и может быть использовано для производства бруцеллезной аллерген-вакцины для овец. Изобретение относится к области ветеринарии, в частности,к изготовлению биологических препаратов и может быть использовано для производства бруцеллезной аллерген-вакцины для овец. Известен способ изготовления вакцины из бруцелл, включающий выращивание бруцелл на эритрит-агаре при температуре 37,5 С, смыв бактериальный массы физиологическим раствором поваренной соли и приготовление микробной взвеси с последующей лиофилизацией Патент Республики Казахстан 14723, кл. 01 33/53 (2006.01),А 61 39/00 (2006.01), 2007. Недостатком этого способа является относительно низкая чувствительность профилактическая активность,замедленная выработка иммунитета и его применение ограничено иммунизацией только мелкого рогатого скота. Задачей изобретения является повышение активности препарата сразу после введения препарата выработка более напряженного иммунитета животных после его инъекции. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышении профилактической активности препарата. Способ изготовления вакцины из бруцелл,включающий выращивание бруцелл на эритритагаре при температуре 37,5 С, смыв бактериальный массы физиологическим раствором поваренной соли и приготовление микробной взвеси с последующей лиофилизацией, в бактериальную взвесь живых бруцелл в конечной концентрации перед лиофилизацией добавляют ультразвуковой лизат-1 В-0268 в количественном соотношении лизата и полученной суспензии 12,затем бактериальную массу разводят физиологическим раствором до концентрации 2109 КОЕ/мл, после чего лиофилизируют и используют в качестве целевого продукта. Для изготовления используют штамм 0268. Штамм характеризуются следующими признаками. Происхождение штаммов бактерий. Штамм 0268. Штамм бактерий родавыделен Эльбергем и Фенсом из организма барана производителя в 1953 году, путем высева из патологического материала на питательную среду - Альбими и последующего его селекционирования с добавлением в нее постепенно увеличивающих доз стрептомицина. Идентифицирован по определителю бактерий,2005,, . 370-386. Назначение штамма бактерий. Штамм предназначен для приготовления вакцины и диагностических препаратов. Состав среды и условия культивирования. Агар Д, эритрит агар, среда Альбими. Т 37-38 С,среда Белабаба. 2 Морфолого-культуральные свойства. Вегетативные клетки растут на эритрит агаре,Т 37-38 С, в течение 48 часов в термостате. Микроккоки, длиной 0,4-2,2 мкм, шириной 0,40,6 мкм, неподвижные, очертания концов округлые,по Граму не окрашиваются, (имеют красный цвет) окрашиваются по методу Козловского, не кислотоустойчивы, тип размножения - делением. Размер двух-терх-суточных колоний 1,0-2,0 мм,круглые, плотные, гладкие, прозрачные и телесные в отражением света. Рост в жидкой среде - вызывает помутнение МПБ в течение суток, образует пристеночное кольцо с голубоватым оттенком. Физиолого-биохимические свойства. Принадлежность к трофической группе хемоорганотроф. Типы катабализма условный аэроб. Симбиотрофные отношения внутриклеточный паразит, фагом Тб не лизируется. Источники углерода глюкоза, глицерин. Источники азота гидролизат животных белков. Источники серы-цистеин, цистин. Другие характерные физиологические особенности обмена дифференцирующие и диагностические ферменты каталаза, уреаза,оксидаза, не образует сероводорода и индола, не разжижает желатин. Маркерные признаки штамма. Растет на эритритагаре, среде Альбими, Белобаба находится стабильный -форме, не растет при выращивании на питательных средах с добавлением стрептомицина,не выделяет сероводород, обладает каталазной и оксидазной активностью. Способ, условия и состав сред для хранения. Штамм 0268 хранят в рефережираторе при 4-6 С на твердой питательной среде или в сухом виде в запаянных под вакуумом ампулах при температуре от 4 до 6 С. Пересев нативных культур проводят один раз в 3-4 месяца. Способ изготовления вакцины из бруцелл осуществляется следующим образом. Пример 1. Питательной средой для выращивания бактериальной массы в целях приготовления профилактического препарата служит биофабричная Питательная среда для выделения и культивирования бруцелл сухая (эритрит-агар) с добавлением глюкозы, глицерина, дрожжевого экстракта и -цистина. Данную среду растворяют в дистиллированной воде, доводят до кипения, кипятят 2-3 мин до полного растворения агара, затем вливают глицерин и через 1 минуту засыпают глюкозу, дрожжевой экстракт и -цистина, доводят до кипения и фильтруют через ватно-марлевый фильтр,разливают в колбы Тартаковского и автоклавируют в течение 20 мин при температуре 121 С. После автоклавирования колбам придают горизонтальное положение до застывания агара. Для контроля стерильности их помещают на 48 часов в термостат при температуре 37 С. Выращенную и проверенную на чистоту матриксную культуру в объеме 5-10 см 3 100 млрд взвеси микробных тел с соблюдением условий стерильности засевают в колбы Тартаковского с твердым питательной средой. Культуру, засеянную в колбы, выращивают 48-72 часа в термостате при температуре 37 С,затем проводят смыв физиологическим раствором хлористого натрия и приготовление 2-х млрд микробной взвеси по КОЕ с последующей лиофилизацией, в бактериальную взвесь живых бруцелл конечной концентрации перед лиофилизацией добавляют ультразвуковой лизат-1 В-0268 в количественном соотношении лизата и полученной суспензии 12, затем бактериальную массу разводят физиологическим раствором до концентрации 2109 КОЕ/мл, лиофилизируют и используют по назначению в качестве целевого продукта. Пример 2. Установлено, что у полученного описанным способом препарата сохраняется способность индуцировать иммунное состояние организма животных, зараженных в течение первых 48 часов и далее. Срок годности готового препарата не менее 12 месяцев (срок наблюдения). Активность и специфичность полученной описанным способом вакцины была проверена в лабораторных и производственных условиях. Полученные при этом данные указывают на высокую активность и специфичность препарата, что позволяет быстро вызвать иммунное состояние и повышать напряженный иммунитет, дополнительно выявлять до 10 больных поголовья скота. Пример 3. При изучении профилактической активности вакцины 20-ти здоровым морским свинкам, вводили вакцину в дозе 0,1 см 3 внутрикожно средней трети брюшка по белой линии живота. Через 48 часов проводили заражение и контрольных животных. По истечению 30 сутки животные были убиты и подвергнута бактериологическому исследованию. При исследовании внутренних органов иммунизированных животных культура бруцелл не выделена, таким образом лабораторные животные приобрели иммунитет. В благополучной по бруцеллезу отаре овец Т Байсерке-Агро 30 здоровым овцам вводили внутрикожно опытную вакцину, а 30 овцам обычную вакцину. Указанные животные были подвергнуты заражению. По истечению 30 суток все животные были подвергнуты забою и их внутренные органы бактериологическому исследованию. При это установлено, что вакцинированные опытным препаратом животные оставались иммунными, а из числа вакцинированных обычной вакциной культура бруцелл заражающего штамма выделена у 27 животных или 90. Использование предложенного способа позволит при внутрикожным введение больным бруцеллезом животных вызвать местную воспалительную реакцию, а у здоровых - обеспечить индукцию иммунитета. Препарат может найти широкое применение в ветеринарной практике для диагностики бруцеллеза у крупного и мелкого рогатого скота. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ изготовления вакцины из бруцелл,включающий выращивание бруцелл на эритритагаре при температуре 37,5 С, смыв бактериальный массы физиологическим раствором поваренной соли и приготовление микробной взвеси с последующей лиофилизацией, отличающийся тем, что в бактериальную взвесь живых бруцелл в конечной концентрации перед лиофилизацией добавляют ультразвуковой лизат-1 В-0268 в количественном соотношении лизата и полученной суспензии 12, затем бактериальную массу разводят физиологическим раствором до концентрации 2109 КОЕ/мл,после чего лиофилизируют и используют в качестве целевого продукта.