Штамм бактерий Rhodococcus erythropolis B12, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов

(51) 12 1/20 (2006.01) 09 1/10 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Биологический способ очистки нефтезагрязненных почв,с использованием активных штаммов нефтеокисляющих микроорганизмов на сегодняшний день признан наиболее экономичным и экологическим методом биоремедиации почв. Однако, очень часто,эффективность нефтеокисляющих микроорганизмов лимитируется почвенно-лиматическими условиями местности. Поэтому необходим постоянный поиск и пополнение активных штаммов микроорганизмов нефтедеструкторов. Техническим результатом является получение активного штамма нефтедеструктора. Предлагаемый биологический штамм нефтедеструкторВ 12 способен деструктировать нефть при низких положительных температурах до 50, что позволяетет проводить биоремедиационные работы в поздний осенний и ранневесенний периоды. Деструкция нефти при применении штамма в аридных услових составила 92, что дает основание для применения данного штамма в засушливоклиматических условиях.(72) Раманкулов Ерлан Мирхайдарович Молдагулова Назира Балтабаевна Сарсенова Айнур Сейтжаппаркызы Аюпова Айгуль Жанаевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ 12, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма - нефтедеструктораВ 12, который может быть использован для биоремедиации нефтезагрязненных почв при низких температурных условиях. Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. Биологический способ очистки нефтезагрязненных почв,с использованием активных штаммов нефтеокисляющих микроорганизмов на сегодняшний день признан наиболее экономичным и экологическим методом биоремедиации почв. Однако, очень часто,эффективность нефтеокисляющих микроорганизмов лимитируется почвенно-лиматическими условиями местности. Поэтому необходим постоянный поиск и пополнение активных штаммов микроорганизмов нефтедеструкторов. Известен штамм бактерий. ОС-1(Патент 2128221 С 1), используемый для окисления углеводородов нефти и нефтепродуктов. Штамм обладает высокой нефтеокисляющей активностью. Степень биодеградации по сырой нефти под воздействием штамма в течение 30 дней составляет 98-99. Недостатком данного штамма является неспособность окисления углеводородов нефти в аридных условиях, при низких положительных температурах. Наиболее близким аналогом является штамм бактерийАЕ используемый для окисления углеводородов нефти и нефтепродуктов в аридных условиях Западного Казахстана(Иновационный патент Республики Казахстан 24557). Недостатком данного штамма является неспособность окисления углеводородов нефти при низких положительных температурах. Задачей изобретения является получение нового штамма бактерий, характеризующегося высокой нефтеокисляющей активностью при низких положительных температурных условиях в аридных условиях. Технический результат - ускорение процесса очистки почвы от нефти и нефтепродуктов в засушливо-климатических условиях при низких положительных температурах. Характеристика штамма ШтаммВ 12 выделен из нефтезагрязненной почвы Атырауской области. Штамм представляет собой подвижные грамположительные палочки, размером 2-3 мкм с округленными концами, расположенные одиночно и в скоплениях. При росте на СПА (сухой питательный агар) через 24-72 часа инкубации образует колонии округлой формы, размером 1-3 мм, бежево-розового цвета, выпуклые,блестящие, поверхность гладкая, пастообразной консистенции с ровными краями, пигмент в среду не выделяет. Факультативный аэроб. На СПБ образует тонкую пленку, среда прозрачная со скудным волокнистым осадком. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки Каталаза положительная,оксидаза отрицательная. Не разжижает желатин, крахмал гидролизует слабо, образует сероводород, не образует индол, ацетилметилкарбонил и газы из 3. Не утилизирует цитрат в среде Симеона, не дезаминирует фенилаланин. Хранят на скошенных агаризованных средах с 1 нефтью или с углеводородом при температуре 4 С. Пересев осуществляют 1 раз в 3 месяца. Растет при температуре 4 С 30 С - 24-72 часа. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий депонирован в ТОО КАЗНИИППП, под номером В-497 Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами Пример 1. Проводили изучениеВ 12 нефтеокисляющей активности культуры микроорганизмов в полевых условиях. Объектом служила нефтезагрязненная почва с высоким содержанием углеводородов нефти на территории месторождения Жана Узень, АО РД Узеньмунайгаз Мангистауской области, тип почвы солонец-солончак. Микроорганизмы вносили в количестве 1010 кл/г почвы. После внесения проводили рыхление и увлажнение. Контролем служил вариант без биомассы микроорганизмов. Время культивирования 3 месяца. Остаточное количество нефти в почве определяли гравиметрическим методом, экстрагируя нефть гексаном и хлороформом. Результаты исследования показали, что содержание нефти снизилось на 91,24 через 3 месяца (таблица 1). Пример 2. Проводили изучение нефтеокисляющей активности культуры микроорганизмовВ 12 в модельных экспериментах с 10 нефтезагрязненной почвой при 10 С и 25 С. Микроорганизмы вносили в количестве 109 кл/г почвы. После внесения проводили рыхление и увлажнение. Контролем служил вариант без биомассы микроорганизмов. Время проведения опытов 3 месяца. Остаточное количество нефти в почве определяли методом ИК спектрометрии. Результаты исследования показали, что содержание нефти снизилось на 91,24 через 3 месяца (таблица 2). Таблица 1 Степень деградации нефти в почве под воздействием штаммаВ 12 Варианты КонтрольВ 12 Таблица 2 Степень деградации нефти в почве в модельных экспериментах под воздействием штаммаВ 12 при разных температурах Варианты КонтрольВ 12 при 4 Таким образом, при полевых экспериментах в аридных условиях Западного Казахстана утилизация нефти штаммомВ 12 составила более 90, что сопоставимо с результатами инновационного патента Республики Казахстан 24557. Также использование штаммаВ 12 при 10 С снижает концентрацию нефти до 50, что позволяет использовать штамм в биоремедиационных работах при низких положительных температурах. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий 12,депонирован в ТОО КазНИИППП под номером-497, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов.