Способ изготовления поливалентной вакцины против лептоспирозов животных

(51) 61 39/116 (2011.01) 12 1/20 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ минерализированная вода, полученная путем фильтрации водопроводной воды через цеолитовошунгитовый фильтр (соотношение цеолита и шунгита 11 по массе и фракции 0,5 мм), при следующем соотношении компонентов, мас.инактивированная сыворотка крови овец - 5 витамин В 12 - 0,01 витамин В 1 - 0,02 аргинин 0,001 цистин - 0,00024 гистидин - 0,00031 глутамин - 0,0025 валин - 0,0004 изолейцин 0,0004 лейцин - 0,00045 лизин - 0,0004 метионин 0,0001 фенилаланин - 0,0003 триптофан - 0,0001 тирозин 0,0003 аспарагин 0,008 минерализованная вода - до 100. Посевы производили во флаконы емкостью 200 см 3,содержащий 100 см 3 среды, и культивировали в течение 5-7 суток при 280,5 С, с последующей инактивировацей 0,4-0,5 формалином,добавлением в вакцину алюмоквасцов (0,13-0,15),хлористого кальций (0,13-0,1). Предлагаемая питательная среда в сравнении с известной регламентной питательной средой является более эффективной в отношении выхода целевого продукта.(72) Бияшев Кадыр Бияшевич Киркимбаева Жумагуль Слямбековна Кузембекова Гульнур Бериковна Мырзабаев Кенжебек Есмагамбетович Ермагамбетова Светлана Емлсовна(54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЛЕПТОСПИРОЗОВ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарной и медицинской микробиологии и может быть использовано на предприятиях биологической промышленности для производства средств специфической профилактики лептоспирозов животных. Способ изготовления поливалентной вакцины против лептоспирозов животных включает культивированных штаммов лептоспир , , на питательной среде,основой изготовления которой является Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ветеринарной и медицинской микробиологии и может быть использовано на предприятиях биологической промышленности для производства средств специфической профилактики лептоспирозов животных. Известен способ изготовления поливалентной вакцины против лептоспирозов животных путем культивированных штаммов лептоспир е, , с последующей инактивацией биомассы лептоспир 0,4-0,5 формалином,добавлением в вакцину алюмокалиевых квасцов (0,13-0,15) и хлористого кальций (0,13-0,1), при этом выращивание лептоспир осуществляют на водно-сывороточной среде (Предварительный патент РК 5880, Кл. А 61 39/02, 1998). Недостатком способа является низкая эффективность водно-сывороточной питательной среды. Целью изобретения является повышение выхода биомассы лептоспир и вакцины. Способ изготовления поливалентной вакцины против лептоспирозов животных включает культивированных штаммов лептоспир , , на питательной среде,основой изготовления которой является минерализированная вода, полученная путем фильтрации водопроводной воды через цеолитовошунгитовый фильтр (соотношение цеолита и шунгита 11 по массе и фракции 0,5 мм), при следующем соотношении компонентов, мас.инактивированная сыворотка крови овец - 5 витамин В 12 - 0,01 витамин В 1 - 0,02 аргинин 0,001 цистин - 0,00024 гистидин - 0,00031 глутамин - 0,0025 валин - 0,0004 изолейцин 0,0004 лейцин - 0,00045 лизин - 0,0004 метионин 0,0001 фенилаланин -0,0003 триптофан - 0,0001 тирозин 0,0003 аспарагин 0,008 минерализованная вода - до 100. Посевы производили во флаконы емкостью 200 см 3,содержащий 100 см 3 среды, и культивировали в течение 5-7 суток при 280,5 С, с последующей инактивировацей 0,4-0,5 формалином,добавлением в вакцину алюмоквасцов (0,13-0,15),хлористого кальций (0,13-0,1). Предлагаемая питательная среда в сравнении с известной питательной средой является более эффективной в отношении выхода целевого продукта, обеспечивает увеличение накопления биомассы на 32-35. Способ осуществляется следующим образом. Пример 1. Изготовление вакцины. Для приготовления матровых расплодок штаммы лептоспир , ,изасевали отдельно каждый штамм во флаконы с питательной средой следующего состава,масс,инактивированная сыворотка крови овец 5 витамин В 12 - 0,01 витамин 1 - 0,02 аргинин 2 0,001 цистин - 0,00024 гистидин - 0,00031 глутамин - 0,0025 валин - 0,0004 изолейцин 0,0004 лейцин - 0,00045 лизин - 0,0004 метионин 0,0001 фенилаланин -0.0003 триптофан - 0,0001 тирозин 0,0003 аспарагин 0,008 минерализованная вода - до 100. Посевы производили во флаконы емкостью 200 см 3,содержащий 100 см 3 среды, и культивировали в течение 5-7 суток при 280,5 С. После проверки на наличие роста и чистоту культуры путем просмотра мазков раздавленная капля под микроскопом с темнопольным конденсором (количество лептоспир в поле зрения микроскопа при увеличении в 400 раз должно составлять 250-300 экземпляров). После микроскопии на 7 день отбирали матровые расплодки лептоспир. е , ,с удовлетворительным ростом для дальнейшего применения. Для получения производственных расплодок проверенные культуры засевали отдельно в 10-дм 3 бутыли с 4-5 дм 3 среды того же состава в объеме 100-150 см 3. Посевы выдерживают в термостате при температуре 28 С до максимального накопления в среде лептоспир в течение 5-7 суток. При росте лептоспир среда оставалась прозрачной, без осадков и хлопьев. Рост культуры в каждой бутыли контролировали микроскопированием в затемненном поле микроскопа. Бутыли с хорошим ростом (150-250 и выше лептоспир в поле зрения микроскопа) отбирали для приготовления вакцины. Далее проводили инактивацию культур каждого серовара путем внесения формалина (содержащего не менее 36,5 формальдегида) до 0,3-0,5 концентрации с последующим выдерживанием в термостате при температуре 28 С в течение 10 суток. Полноту инактивации культур проверяли путем высева на питательные среды. Депонирование инактивированных культур осуществляли добавлением 0,13-0,15 алюмокалиевых квасцов и через 24-48 часов - 0,130,15 хлористого кальция. Далее инактивированные серовары лептоспир смешивали в равных объемах и расфасовывали во флаконы. Датой изготовления вакцины считается день расфасовки вакцины во флаконы. Пример 2. Каждую серию изготовленной вакцины проверяли на стерильность, безвредность и иммуногенность. Проверку на стерильность проводили путем высевов из 5 флаконов вакцины по 0,2 см 3 на ВВС,ПС, МПБ, МПА, на среду Китта-Тароцци по 2 пробирки на каждый флакон. Посевы со всеми средами выдерживали в термостате при 37 С в течение 10 суток. Посевы на среде Сабуро культивировали при температуре 18-24 С в течение 10 суток. Питательные среды с посевами должны оставаться стерильными. Для проверки на безвредность отбирали 10 белых мышей массой 16-18 г и 5 морских свинок массой 300-400 г. Отобранным животным вводили вакцину белым мышам подкожно по 0,3 см 3,морским свинкам подкожно по 5 см 3. Животные в течение 10 суток должны оставаться клинически здоровыми. Контроль иммуногенности вакцины осуществляли введением вакцины 5 кроликам массой 1,5-1,8 кг, подкожно в дозе 5 см 3. Через 16 суток после введения вакцины у всех подопытных кроликов брали кровь в объеме 5-8 см 3 крови для определения титра антител в сыворотке в реакции микроагглютинации-лизиса. Для постановки реакции использовали штаммы, из которых готовилась вакцина. При наличии агглютинирующего титра в сыворотках крови кроликов в разведении 1200-1400 к каждому из 8 штаммам, из которых она изготовлена, вакцина считается активной. Сыворотка кроликов,иммунизированных полученной поливалентной вакциной,агглютинировала лептоспиры серогрупп . , , в титрах 1453 - 1640. Пример 3. Вакцина предназначена для иммунизации сельскохозяйственных животных с профилактической целью. Вакцину вводят крупному рогатому и мелкому рогатому скоту,лошадям, свиньям, собакам в возрасте 1 года - 2 см 3,собакам и пушным зверям - 0,5-0,8 см 3, взрослым животным от 3,0-5,0 см 3. Вакцина сохраняет свои свойства в течение 12 месяцев со дня изготовления при хранении в затемненном месте при температуре 4-15 С. Использование предлагаемого способа изготовления поливалентной вакцины против лептоспирозов животных путем усовершенствования питательных сред имеет следующие преимущества по сравнению с существующим способом выход биомассы лептоспир и вакцины увеличивается на 32-35. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ изготовления поливалентной вакцины против лептоспирозов животных, включающий культивирование штаммов лептоспир . , ., . , .на питательной среде с последующей инактивацией формалином 0,3-0,5, добавлением в вакцину алюмоквасцов 0,13-0,15,хлористого кальция 0,13-0,15,отличающийся тем,что культивирование осуществляют на питательной среде, основой изготовления которой,является минерализированная вода, полученная путем фильтрации водопроводной воды через цеолитовошунгитовый фильтр (соотношение цеолита и шунгита 11 по массе и фракции 0,5 мм), при следующем соотношении компонентов, мас.инактивированная сыворотка 5 крови овец витамин В 12 0,01 витамин В 1 0,02 аргинин 0,001 цистин 0,00024 гистидин 0,00031 глутамин 0,0025 валин 0,0004 изолейцин 0,0004 лейцин 0,00045 лизин 0,0004 метионин 0,0001 фенилаланин 0,0003 триптофан 0,0001 тирозин 0,0003 аспарагин 0,008 минерализованная вода до 100.