Способ получения энтероцитоглобулина для лечения и превентизации от аутоиммунного энтерита у животных

(51) 61 39/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ энтероцитоглобулина для лечения и превентизации от аутоиммунных энтеритов. Техническим результатом является получение эффективного препарата для лечения и превентизации от аутоиммунизации при энтеритах. Способ получения метроцитоглобулина включает в себя следующие технические операции получение взвеси ткани из слизистой оболочки матки, иммунизация животных /собак, овец, ослов,кроликов/, получение гипериммунной сыворотки,выделение из полученной сыворотки гамма глобулинов, растворение гамма-глобулинов в 0,9 растворе хлорида натрия, содержащего 1,8 гипосульфита натрия с лиофильным высушиванием.(72) Муралинов Каримхан Каирханович Жанов Нурлан Калиакперович Муралинова Жулдыз Каримхановна Жумаханова Ракета Мухамедьяровна(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНТЕРОЦИТОГЛОБУЛИНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРЕВЕНТИЗАЦИИ ОТ АУТОИММУННОГО ЭНТЕРИТА У ЖИВОТНЫХ Изобретение относится к иммунологии, в частности к аутоиммунной патологии, получению энтероцитоглобулина для лечения и превентизации от аутоиммунного энтерита. Известен способ получения гамма-глобулинов из нормальной сыворотки крови с помощью фракционирования сывороточных белков этанолом(Хохлачв Н.В. и др. Препараты из крови человека. Гамма-глобулин. //Руководство по вакцинному и сывороточному делу. М., 1979, с. 322-328). Однако, полученные из нормальной сыворотки иммуноглобулины не обладают специфическими свойствами и поэтому не могут применяться для лечения и профилактики от аутоиммунизации при энтеритах. В настоящее время специфических препаратов для лечения аутоиммунизации не существует. Применяемые методы лечения связанные с ингибированием синтеза аутоантител,цитостатическими препаратами и гормонами являются паллиативными и оказывают временное воздействие. Известен способ получения миоцитоглобулина для лечения и профилактики аутоиммунных болезней мышц. Предварительный патент 7052 от 15.02.99 г. (кл 61 39/00, 01 33/53),включающий иммунизацию животных-продуцентов взвесью мышечной ткани в адъюванте Фрейнда с получением гамма-глобулинов крови для лечения и превентизации аутоиммунных болезней мышц животных Недостатком данного способа является использование миоцитоглобулина,который предназначен только для лечения и профилактики аутоиммунных болезней мышц животных Наиболее близким техническим решением является способ получения пневмоцитоглобулина(Муралинов К.К., Сайдулдин Т.С. Способ получения гамма-глобулина для лечения и профилактики аутоиммунных болезней органов дыхания Предварительный патент 7053 от 15.02.99 г. кл. 61 35/42), включающий иммунизацию животных - продуцентов взвесью легочной ткани в адъюванте Фрейнда с получением сыворотки крови с последующим выделением из не гамма-глобулинов,путем фракционирования этанолом и стабилизацией хлоридом натрия и гипосульфитом натрия для лечения и превентизации аутоиммунных болезней органов дыхания животных. Недостатком данного способа является использование пневмоцитоглобулина, который предназначен только для лечения и профилактики аутоиммунных болезней органов дыхания животных. Техническим результатом является способ получения энтероцитоглобулина для лечения и профилактики аутоиммунном энтерите, путем фракционирования этанолом и стабилизированием хлоридом натрия и гипосульфитом натрия. Технический результат достигается следующим методом животных доноров (ослов, овец кроликов) иммунизируют трижды взвесью ткани из слизистой 2 оболочки тонкого отдела кишки крупного рогатого скота в адъюванте Фрейнда подкожно из расчета 0,25 мл/кг живой массы, интервалом 7 дней. Сущностью изобретения является то, что при повреждениях тканей слизистой оболочки кишечника, связанных с их альтерацией и деструкцией, в организме происходят процессы аутоиммунизации,выражающееся появлением аутоантител против них. Энтероцитоглобулин обладает направленным цитопатическим свойством,действуя избирательно и специфический,ингибирует синтез аутоантител против слизистой кишечника, блокирует идиопатические цепи иммунной системы Взятие крови проводят на 21 день после последней иммунизации,полученную гипериммунную сыворотку - идиотип против ткани слизистой оболочки тонкой кишки проверяют на активность, которая должна быть в пределах от 15120 до 110240. Из полученного идиотипа против ткани кишки выделяют иммуноглобулины методом фракционирования этанолом Осажденный иммуноглобулин растворяют в изотоническом растворе хлорида натрия содержащего 1,8 гипосульфита натрия(стабилизатор и сорбент). Препарат разливают в ампулы по 2 или 5 мл и подвергают лиофильной сушке. Перед употреблением содержимое ампулы растворяют в 2 мл дистиллированной воды. При хранении препарата в температурном режиме 4 С в течение 2-х лет препарат сохраняет первоначальную активность. Препарат вводится подкожно двукратно или трехкратно с интервалом 5-7 дней. При показаниях повторное применение по этой же схеме спустя 3-4 недели. Применение препарата полученного данным способом обуславливает лечебный эффект при аутоиммунных энтеритах у животных. Применение с профилактической целью показало его хорошее превентивное действие, на месте инъекции возможно возникновение небольшого покраснения с незначительным отеком, которое проходит в течение 2-3-х дней без последствия. Пример В качестве антигена использовали ткань из слизистой оболочки из тонкого отдела кишки крупного рогатого скота, которую измельчают ножницами, затем тщательно отмывают сначала дистиллированной водой, затем физиологическим раствором до полного исчезновения видимых примесей крови, гомогенизируют с прибавлением физиологического раствора из расчета 9 мг на 1 г ткани. Полученную суспензию используют в качестве антигена. Антиген подвергают обработке антибиотиками (по 10 тыс. ЕД пенициллина и 0,01 г. стрептомицина на 1 мл материала), выдерживают 2 часа в термостате при температуре 37 С. Соотношение антигена и адъюванта берут 12. Антиген вводят подкожно, из расчта 0,25 мл/кг живой массы с интервалом 7 дней, трхкратно. В качестве животных-доноров используют ослов. Взятие крови проводят на 21 день после последней иммунизации в объме 2-3 литров. Полученную сыворотку консервируют 0,5 раствором фенола и проверяют на активность, стерильность и токсичность. На бактериальную стерильность сыворотку проверяют посевом на МПБ и питательный агар. Токсичность полученных препаратов проверяют путм подкожного введения кроликам в объме по 0,5 мл, с использованием по 3 кролика на каждую серию, а также шести белых мышей, которым вводят внутрибрюшинно по 0,3 мл, с последующим наблюдением за всеми животными в течение 10 дней. Из полученной гипериммунной сыворотки выделяли методом фракционирования этанолом иммуноглобулины, растворяли их в изотоническом растворе хлорида натрия, содержащим 1,8 гипосульфита натрия. Препарат разливали в ампулы по 2 или 5 мл и подвергали лиофильной сушке. Перед употреблением содержимое ампулы растворяли в 2 мл дистиллированной воды. Лечебный и превентивный эффект энтероцитоглобулина обусловлен иммуносупрессивной активностью, в подавлении продукции аутоантител соответствующей специфичности,несущих антигенные детерминанты, против которых направлены эти аутоантитела. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения энтероцитоглобулина для лечения и превентизации от аутоиммунного энтерита у животных, включающий подкожную гипериммунизацию животныхпродуцентов взвесью ткани в адъюванте Фрейнда, с последующим получением сыворотки крови и выделением из нее гамма-глобулинов, путем фракционирования этанолом и стабилизацией хлоридом натрия и гипосульфитом натрия,отличающийся тем, что в качестве взвеси используют ткань слизистой оболочки тонкого отдела кишечника.