Штамм бактерий Arthrobacter globiformis 24, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов

(51) 12 1/20 (2011.01) 09 1/10 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвенных экосистем от нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий 24 используют для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. Предлагаемый штамм 24 активно утилизирует нефть разных месторождений Прикаспийского региона, а также нефтепродукты. При 5 содержании нефти степень деструкции за 10 суток достигает 62.(72) Саданов Аманкелди Курбанович Айткельдиева Светлана Айткельдиновна Файзулина Эльмира Рамазановна Курманбаев Аскар Абылайканович Байгонусова Жанат Анарбаевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан 25881 Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвенных экосистем от нефти и нефтепродуктов. Известен штамм бактерий, используемый для очистки подсланевых и промышленных сточных вод от нефти и нефтепродуктов (А.с. СССР 1409594, 12, 1988). Недостатком данного штамма является неспособность осуществлять утилизацию нефти и нефтепродуктов при высоком содержании их к объему загрязненного объекта. Кроме того, этот штамм утилизирует нефть и нефтепродукты только в сточных водах и не способен осуществлять очистку почвы от нефти. Наиболее близким является штамм бактерий. ВКПМ Ас-1556, используемый для разложения нефти и нефтепродуктов (патент РФ 2128221, С 12 1/20, 1999). Недостатками данного штамма является то, что штамм осуществляет деструкцию нефтепродуктов только в воде и не способен осуществлять активную очистку почвы от нефти. Задачей изобретения является получение нового штамма бактерий, характеризующегося высокой нефтеокисляющей активностью в аридных условиях. Характеристика штамма. Штамм 24 выделен из нефтезагрязненной почвы Атырауской области. Штамм представляет подвижные палочки. Грамположительные, некислотоустойчивые, спор не образуют. На МПА и РПА культура образует округлые, выпуклые колонии кремового цвета,диаметром 2-3 мм. Край колоний ровный,пигментов в среду не выделяет. Аэроб. При росте в МПБ наблюдается помутнение среды, выпадает осадок, на поверхности образуется рыхлая пленка. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки. В качестве источника углерода использует глюкозу, мальтозу, сахарозу, фруктозу, маннит и глицерин. Крахмал не гидролизует,желатину не разжижает. Сероводород образует, индол не продуцирует. Нитраты восстанавливает до нитритов. Дает положительную реакцию на каталазу и отрицательную на оксидазу. Растет в МПБ с 2,5 и 6,5 , при температуре 20 С, 29 С, 37 С. Культуру выращивают и хранят на косяках МПА или РПА. Температура хранения 4 С, пересев через 2 месяца. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий 24 депонирован в коллекции Института микробиологии и вирусологии МОН РК под номером ИМиВ В-85. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами. Пример 1. Для оценки нефтеокисляющей активности культуру выращивают на минеральной среде следующего состава, г/л 43 - 1,0 К 2 НР 4 - 1,0 КН 2 Р 4 - 1,0 472- 0,2 СаС 12- 0,02 4- следы,- 1,0 дистиллированная вода - 1 л, рН среды 7,0-7,2. Среду разливают по 100 мл в колбы Эрленмейера объемом 750 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 минут. Суспензию бактерий получают путем смыва с поверхности скошенной среды 3 мл стерильной воды и вносят в среду. В качестве единственного источника углерода используют нефть месторождения Жанаталап в концентрации 1, 3, 5 и 7. Культивируют на качалке 180 об/мин при 28-30 С 10 суток. Потребление нефти определяют гравиметрическим методом,экстрагируя остаточную нефть хлороформом. Контролем служит минеральная среда с нефтью без бактерий. Данные представлены в таблице 1. Результаты исследований показали,что предлагаемый штамм бактерий способен активно утилизировать нефть месторождения Жанаталап(табл. 1). При его росте на минеральной среде с 1,3 и 5 нефти степень ее деструкции составила 80,3, 68,3 и 62,0 соответственно. Пример 2. Минеральную среду разливают по 100 мл в колбы Эрленмейера объемом 750 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 минут. Суспензию бактерий получают путем смыва с поверхности скошенной среды 3 мл стерильной воды и вносят в среду. В качестве единственного источника углерода добавляют нефть месторождения Кульсары в количестве 1 по объему. Культивируют на качалке 180 об/мин при 28-30 С 10 суток. Потребление нефти определяют гравиметрическим методом,экстрагируя остаточную нефть хлороформом. Контролем служит минеральная среда с нефтью без бактерий. Результаты показывают(табл. 2),что предлагаемый штамм способен утилизировать 60,5 нефти месторождения Кульсары за 10 суток. Пример 3. Опыты по определению потребления разных нефтепродуктов штаммом 24. Минеральную среду разливают по 100 мл в колбы Эрленмейера объемом 750 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 минут. Суспензию бактерий получают путем смыва с поверхности скошенной среды 3 мл стерильной воды и вносят в среду. В качестве единственного источника углерода добавляют дизельное топливо, керосин и вазелиновое масло в количестве 2 по объему. Культивируют на качалке 180 об/мин при 28-30 С 10 суток. Потребление нефтепродуктов определяют гравиметрическим методом. Для экстракции используют хлороформ. Контролем служит минеральная среда с нефтепродуктами без бактерий. Полученные результаты(табл. 3) свидетельствуют о том, что предлагаемый штамм способен активно потреблять дизельное топливо,керосин и вазелиновое масло. Таким образом, предлагаемый штамм способен утилизировать нефть различных месторождений 25881 Прикаспийского региона, а также нефтепродукты. Данный штамм может быть использован для Потребление нефти месторождения Жанаталап штаммом 24 Степень утилизации нефти,3 5 68,3 62,0 18,9 12,5 Потребление нефти месторождения Кульсары штаммом 24 Штамм 24 Контроль Рост 24 на нефтепродуктах Штамм 24 Контроль Степень утилизации нефтепродуктов,дизельное топливо керосин вазелиновое масло 92,9 96,0 80,5 28,6 42,7 13,3 МОН РК, под номером ИМиВ В-85, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов.