Штамм бактерий Arthrobacter sp. К-3, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов

(51) 12 1/20 (2011.01) 09 1/10 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН. К-3, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ(57) Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвенных экосистем от нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий. -3 используют для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. Предлагаемый штамм. -3 активно утилизирует нефть разных месторождений Прикаспийского региона, а также нефтепродукты. При 7 содержании нефти степень деструкции за 10 суток достигает 53,3.(72) Айткельдиева Светлана Айткельдиновна Саданов Аманкелди Курбанович Файзулина Эльмира Рамазановна Курманбаев Аскар Абылайканович(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан 25880 Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма бактерий, который может быть использован для очистки почвенных экосистем от нефти и нефтепродуктов. Известен штамм бактерий ВКПМ Ас-1667, используемый для разложения нефти и нефтепродуктов (патент 2257410 С 1,С 12,2005). Недостатком данного штамма является неспособность осуществлять утилизацию нефти в аридных условиях. Наиболее близким является штамм бактерий. ВКПМ Ас-1556, используемый для разложения нефти и нефтепродуктов (патент РФ 2128221, С 12 1/20,1999). Недостатками данного штамма является то, что штамм осуществляет деструкцию нефтепродуктов только в воде и не способен осуществлять активную очистку почвы от нефти. Задачей изобретения является получение нового штамма бактерий, характеризующегося высокой нефтеокисляющей активностью в аридных условиях. Характеристика штамма. Штамм. -3 выделен из нефтезагрязненной почвы Атырауской области. Штамм представляет подвижные палочки. Грамположительные, некислотоустойчивые, спор не образуют. На МПА и РПА культура образует округлые, выпуклые колонии оранжевого цвета,диаметром 1-2 мм, пастообразные, блестящие. Край колоний ровный, пигментов в среду не выделяет. Аэроб. При росте в МПБ наблюдается помутнение среды, выпадает осадок, на поверхности образуется хлопьевидная пленка. Штамм не токсичен и не патогенен. Физиолого-биохимические признаки. В качестве источника углерода использует глюкозу, мальтозу, сахарозу, фруктозу, галактозу,маннит и глицерин. Крахмал не гидролизует,желатину не разжижает. Сероводород и индол не образует. Нитраты не восстанавливает. Дает положительную реакцию на каталазу и отрицательную на оксидазу. Растет в МПБ с 2,5 и 6,5 , при температуре 4 С, 20 С, 29 С. Культуру выращивают и хранят на косяках МПА или РПА. Температура хранения 4 С, пересев через 2 месяца. Штамм характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий-3 депонирован в коллекции Института микробиологии и вирусологии МОН РК под номером ИМиВ В-86. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами. Пример 1. Для оценки нефтеокисляющей активности культуру выращивают на минеральной среде следующего состава, г/л 43 - 1,0 К 2 НРО 4 - 1,0 КН 2 РО 4 - 1,0 О 472 О - 0,2 СаС 12- 0,02 О 4- следы,- 1,0 дистиллированная вода - 1 л, рН среды 7,0-7,2. Среду разливают по 100 мл в колбы Эрленмейера объемом 750 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 минут. Суспензию бактерий получают путем смыва с поверхности скошенной среды 3 мл стерильной воды и вносят в среду. В качестве единственного источника углерода используют нефть месторождения Жанаталап в концентрации 1, 3, 5 и 7. Культивируют на качалке 180 об/мин при 28-30 С 10 суток. Потребление нефти определяют гравиметрическим методом,экстрагируя остаточную нефть хлороформом. Контролем служит минеральная среда с нефтью без бактерий. Данные представлены в таблице 1. Результаты исследований показали,что предлагаемый штамм бактерий способен активно утилизировать нефть месторождения Жанаталап(табл. 1). При его росте на минеральной среде с 1,3, 5 и 7 нефти степень ее деструкции составила 87,8, 80,0, 58,2 и 53,3 соответственно. Пример 2. Минеральную среду разливают по 100 мл в колбы Эрленмейера объемом 750 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 минут. Суспензию бактерий получают путем смыва с поверхности скошенной среды 3 мл стерильной воды и вносят в среду. В качестве единственного источника углерода добавляют нефть месторождения Кульсары в количестве 1 по объему. Культивируют на качалке 180 об/мин при 28-30 С 10 суток. Потребление нефти определяют гравиметрическим методом,экстрагируя остаточную нефть хлороформом. Контролем служит минеральная среда с нефтью без бактерий. Результаты показывают(табл. 2),что предлагаемый штамм способен утилизировать 77,3 нефти месторождения Кульсары за 10 суток. Пример 3. Минеральную среду разливают по 100 мл в колбы Эрленмейера объемом 750 мл и стерилизуют при 1 атм. 30 минут. Суспензию бактерий получают путем смыва с поверхности скошенной среды 3 мл стерильной воды и вносят в среду. В качестве единственного источника углерода добавляют дизельное топливо, керосин и вазелиновое масло в количестве 2 по объему. Культивируют на качалке 180 об/мин при 28-30 С 10 суток. Потребление нефтепродуктов определяют гравиметрическим методом. Для экстракции используют хлороформ. Контролем служит минеральная среда с нефтепродуктами без бактерий. Полученные результаты(табл. 3) свидетельствуют о том, что предлагаемый штамм способен активно потреблять дизельное топливо,керосин и вазелиновое масло. Таким образом, предлагаемый штамм способен утилизировать нефть различных месторождений Прикаспийского региона, а также нефтепродукты. Данный штамм может быть использован для очистки нефтезагрязненных почв. 25880 Таблица 1 Потребление нефти месторождения Жанаталап штаммом. К-3 Степень утилизации нефти,3 5 80,0 58,2 18,9 12,5 Потребление нефти месторождения Кульсары штаммом. К-3 Штамм К-3 Контроль Рост штамма. К-3 на нефтепродуктах Штамм К-3 Контроль Степень утилизации нефти,керосин вазелиновое масло 95,7 79,0 42,7 13,3 МОН РК, под номером ИМиВ В-86, используемый для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов.